Page 135 - 《广西植物》2020年第1期

１ 期 张树伟等: ‘禾荔’优质晚熟突变体‘ＧＬＬ￣１’类黄酮糖基转移酶基因 ＬｃＵＦＧＴ 的克隆与表达分析 １ ３ １

表 １ 用于克隆及定量的引物序列
Ｔａｂｌｅ １ Ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｕｓｅｄ ｉｎ ｃｌｏｎｅ ａｎｄ ｑＲＴ￣ＰＣＲ ａｎａｌｙｓｉｓ

引物名称 序列 (５′－３′) 用途
Ｐｒｉｍｅｒ ｎａｍｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ (５′－３′) Ｕｓｅ
Ｐ１Ｕ ＣＴＡＣＴＴＣＡＡＣＣＡＴＧＣＡＣＣＡ ＬｃＵＦＧＴ 克隆引物
Ｐｒｉｍｅｒ ｆｏｒ ｇｅｎｅ ｃｌｏｎｉｎｇ
Ｐ１Ｌ ＴＡＣＡＴＧＡＡＣＴＴＡＡＧＡＣＡＧ
ＬｃＵＦＧＴ￣Ｆ ＣＣＣＣＡＧＧＡＧＧＡＣＡＴＴＧＡＧＴＴＡ ｑＲＴ￣ＰＣＲ 引物
Ｐｒｉｍｅｒ ｆｏｒ ｑＲＴ￣ＰＣＲ
ＬｃＵＦＧＴ￣Ｒ ＧＡＴＡＡＣＣＡＡＣＡＡＧＧＣＡＣＧＡＡＡ
ＬｃＡｃｔｉｎ￣Ｆ ＧＴＧＧＴＴＣＴＡＣＴＡＴＧＴＴＣＣＣＴＧ 内参基因引物
Ｐｒｉｍｅｒ ｆｏｒ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｇｅｎｅ
ＬｃＡｃｔｉｎ￣Ｒ ＣＴＣＧＴＣＧＴＡＣＴＣＡＴＣＣＴＴＴＧ

６７ ｄ 是‘禾荔’ 果实花色苷快速积累的时期ꎬ此时
ＬｃＵＦＧＴ 表达量显著增加ꎻ‘ ＧＬＬ￣１’ 突变体果实着

色延迟ꎬＬｃＵＦＧＴ 的表达也延迟到 ６７ ｄ 显著增加ꎮ
因此ꎬＬｃＵＦＧＴ 的表达与‘ 禾荔’、‘ ＧＬＬ￣１’ 的果实
着色 进 程 一 致ꎬ 推 测 ‘ ＧＬＬ￣１’ 果 实 着 色 延 迟 与

ＬｃＵＦＧＴ 的表达延迟有关ꎮ

３ 讨论与结论

荔枝 ＬｃＵＦＧＴ 蛋白含有 ４５３ 个氨基酸残基ꎬ是
一种存在于细胞质基质的非分泌型蛋白ꎬ有类黄
酮￣３￣Ｏ￣葡萄糖基转移酶保守序列 ＰＳＰＧ 盒ꎬ该保
守序列是糖基供体的结合域ꎬＬｃＵＦＧＴ 的 ＰＳＰＧ 盒
Ｍ. Ｍａｒｋｅｒ ＤＬ２０００ꎻ １ꎬ３. ‘禾荔’ꎻ ２ꎬ４. ‘ＧＬＬ￣１’ꎮ
Ｍ. Ｍａｒｋｅｒ ＤＬ２０００ꎻ １ꎬ３. ‘Ｈｅｌｉ’ꎻ ２ꎬ４. ‘ＧＬＬ￣１’. 第 ２２ 位色氨酸ꎬ说明其糖基供体主要是 ＵＤＰ￣葡萄
图 １ 果皮总 ＲＮＡ(左)和 ＬｃＵＦＧＴ(右)扩增 糖ꎮ ＬｃＵＦＧＴ 在进化关系上与柑橘类葡萄柚、甜橙
序列琼脂糖凝胶电泳图 和克里曼丁橘较近ꎬ但是是否具有相同的功能ꎬ还
Ｆｉｇ. １ Ｔｏｔａｌ ＲＮＡ (ｌｅｆｔ) ｏｆ ｐｅｒｉｃａｒｐ ａｎｄ ＬｃＵＦＧＴ
有待进一步研究ꎮ
ｇｅｎｅ (ｒｉｇｈｔ) ｂｙ ａｇａｒｏｓｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ
‘ＧＬＬ￣１’突变体果实发育迟缓ꎬ较母株果实成
熟期延迟 １５ ｄ 左右ꎬ而荔枝果实成熟的主要标志
橙和克里曼丁橘的 ＵＦＧＴ 有较近的亲缘进化关系ꎻ 之一即为果皮花色苷的积累ꎮ ＵＦＧＴ 是花色素苷
来自同一科的 ＵＦＧＴ 进化关系较近ꎬ蔷薇科草莓、 合成的最后一个关键酶ꎬ使不稳定的花青素转变
梨、苹果、月季和樱桃等 ＵＦＧＴ 聚为一类ꎻ山葡萄、 成稳定的花青苷ꎬ苹果、梨、草莓和葡萄等果树中ꎬ
圆叶葡萄和河岸葡萄的 ＵＦＧＴ 聚为一类ꎮ ＵＦＧＴ 活性与花色素合成显著正相关( Ｋｏｂａｙａｓｈｉ ｅｔ
２.３ ＬｃＵＦＧＴ 基因的表达分析 ａｌ.ꎬ ２００１ꎻ Ｇｒｉｅｓｓｅｒ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００８ꎻ Ｏｎｉｋ ｅｔ ａｌ.ꎬ
ＵＦＧＴ 是荔枝果皮花色素苷合成的关键酶之 ２０１８)ꎬ抑制荔枝果皮 ＵＦＧＴ 酶活性可以抑制花青
一ꎬ荧光定量分析显示结果见图 ５ꎮ ‘ ＧＬＬ￣１’ 突变 苷合成ꎮ 已有研究结果表明ꎬ桂味荔枝果皮中ꎬ
体和‘禾荔’中ꎬＬｃＵＦＧＴ 均随荔枝果实发育和着色 ＬｃＵＦＧＴ 的表达量呈直线增加ꎬ在采收时略微降低
增加表达量先上升后下降ꎬ在果实发育前期表达 (魏永赞等ꎬ２０１４)ꎻ妃子笑 ＬｃＵＦＧＴ 的表达量随着
量维持较低水平ꎬ果实发育进入转色期表达量显 果皮颜色加深表达量逐渐增加(Ｗｅｉ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１１)ꎻ

著增加ꎬ接近成熟时表达量显著降低ꎮ 花后 ５６ ~ 糯米糍 ＬｃＵＦＧＴ 基因在红色果皮和嫩叶中表达量