Page 152 - 《广西植物》2023年第4期
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Ꭾ ሕ ࿗ 广জ 西জ 植জ 物 ࿗ሕ 卷
析ᤥ 取样后将花瓣样品装入锡箔纸中并在液氮中 相为甲醇ྉԡϟᠮ甲酸ɯଫྉሕɯ 洗脱梯度设定为 ԡጲ ᤃ
处理 ሕԡ ቝᔽႿᖔ随后放置于ͱऐԡ ቩ 的冰箱保存ᖔ用于 ቝᔽႿ ጢᠮ ା 相ᖔᤃጲ ϟ ቝᔽႿ 增至 ጢԡᠮᖔϟ ጲ ϟ࿗ ቝᔽႿ 增至
后续靶向代谢组学分析ᤥ ँጢᠮᖔ保持 ቝᔽႿᖔϟ࿗ቝᔽႿ 降至 ጢᠮᖔ平衡 ቝᔽႿଫྉ࿗ɯ
ϓॹԣ 花瓣表型及生理指标分析 流速 ԡሕጢ ቝᓂ 每分钟ଫ柱温 ࿗ԡ ቩଫ进样量 ဂᓂᤥ 质
参考向秋虹ྉԡϟँɯ 的方法并略做修改ᖔ取 ሕ 谱条件᧥电喷雾离子源ྉᔀᔀዹᡷʢᆍ༁ᡱʢᑕᢃ ᔽᆍႿᔽझᑕᡷᔽᆍႿᖔጶ୩᧧ɯ
个品种的花瓣进行徒手切片观察ᤥ 用单刀片切取 温度 ጢጢԡ ऊᖔ正离子模式下质谱电压 ጢጢԡԡ ᖔ气帘气
花被片基部薄片置于超纯水中ᖔ夹取薄片放置于 ྉዹࣼʢᡷᑕᔽႿ ੫ᑕ༁ᖔऊВɯሕጢ ᡱ༁ᔽᤥ 在 ͐᥋ఋʢᑕᡱ ᤃጢԡԡշ中ᖔ每个离
载玻片上制备成临时装片ᖔ在光学显微镜下观察 子对是根据优化的去簇电压ྉʛᔀዹࣼ༁ᡷᔀʢᔽႿ੫ ᡱᆍᡷᔀႿᡷᔽᑕᖔ
花瓣表皮细胞色素分布情况ᤥ ᧕۪ɯ和碰撞能ྉዹᆍᔽ༁ᔽᆍႿ ᔀႿᔀʢ੫ᢃᖔऊጶɯ进行扫描检测ᤥ
叶绿素提取参考 ᓂᔽ 等ྉԡϟɯ 的方法并略做 ϓॹጇ 数据分析
修改ᖔ称取 ԡϟ ੫ 鲜样ᖔ放入 ϟጢ ቝᓂ 的 ँጢᠮ乙醇中ᖔ 基于标准品构建的 ᥘۼ᧕ାྉ ቝᔀᡷऔᑕʢᔀ ʛᑕᡷᑕᤦᑕ༁ᔀɯ
黑暗避光条件下浸提过夜ᖔ直至材料全部退绿ᖔ得 数据库ᖔ对质谱检测得到的数据进行定性分析ᤥ
到叶绿素提取液ᤥ 使用可见分光光度计测定提取 相对定量分析利用三重四级杆质谱的多反应监测
液在 ᤃᤃሕ Ⴟቝ 和 ᤃ࿗ጢ Ⴟቝ 的波长下的吸光值ᤥ 叶绿 模式ྉቝࣼᡷᔽᡱᔀ ʢᔀᑕዹᡷᔽᆍႿ ቝᆍႿᔽᡷᆍʢᔽႿ੫ᖔᥘᥘɯ分析ᖔ每个
素含量计算公式᧥ 色谱峰的峰面积ྉᑕʢᔀᑕɯ代表对应物质的相对含量ᖔ
᥋ϟ
叶绿素含量ྉቝ੫ኼ੫ ɯ ᢉ ࣷ շ ࣷ ଫࣷ ᢉ ϟሕ ँጢ ġ 代入线性方程和计算公式ᖔ采用 ᥘࣼᡷᔽ͐ࣼᑕႿᡷ ሕԡሕ
ᑕ ᤦ ᑕ
ዛ ͱᤃऐऐġዛ ଫࣷ ᢉ ࿗ँᤃġዛ ͱᎮሕġዛ ᤥ 软件ᖔ最终得到所有样本中待测物的定性定量分
ᤃᤃጢ ᤃ࿗ँ ᤦ ᤃ࿗ँ ᤃᤃጢ
花青素提取参考 ᓂᔽ 等ྉԡϟɯ 的方法并略作 析结 果ᤥ 使用 ྉ ၤᡷᡷᡱ༁᧥ ᣰ ᣰ औऔऔ ʢ᥋ᡱʢᆍᢼᔀዹᡷ ᆍʢ੫ ᣰ ɯᖔ对
修改ᖔ称取 ԡϟ ੫ 样品ᖔ加入 ᤃԡԡ ဂᓂ 的 ϟᠮ ̀ऊ᥋甲 不同 样 本 间代谢物的积累模式进行聚类分析
醇溶液ྉϟᠮ̀ऊᖔቂᣑ Ⴌɯ在 ࿗ቩ 中提取 ၤᤥ 之后加 ྉ̀ऊዶɯ及主成分分析ྉ۪ऊዶɯᤥ 计算差异倍数值
入 ࿗ԡԡ ဂᓂ 蒸馏水和氯仿ᖔϟ ԡԡԡ 离心 ϟԡ ቝᔽႿᖔ取 ྉᆍʛᡸዹၤᑕႿ੫ᔀɯ及 ۗ 值ᖔ选取 ۗ 值፪ԡጢ 的代谢物为
上清液ᖔ测定 ዛ 和 ዛ 的吸光值ᤥ 差异代谢物ᖔ并将差异代谢物映射到 ጶ᥈᥈ 数据
ጢሕԡ ᤃጢᎮ
花青素含量ྉቝ੫ኼ੫ ɯ ᢉ ࣷġ提取总量 ᣰ 样品鲜 库中进一步富集用于后续分析ᤥ 计算公式᧥
᥋ϟ
重ġϟ ԡԡԡᖔ式中 ࣷ ᢉ ዛ ͱԡ࿗ġዛ ᤥ 代谢物含量ྉဂ੫ኼ੫ ɯᢉ ዞġႬ ᣰ ϟ ԡԡԡ ԡԡԡ ᣰ ቂᤥ
᥋ϟ
ጢሕԡ ᤃጢᎮ
ϓॹᇺ 样品制备及代谢物提取 式中᧥ዞ 为样本中积分峰面积代入标准曲线得
᥋ϟ
基于超高效液相色谱 ͱ串联质谱系统ྉВ۪ᓂऊ᥋ 到的浓度值ྉႿ੫ኼቝᓂ ɯଫႬ 为提取时所用溶液的体
ᥘ୩ ᣰ ᥘ୩ɯ进行靶向代谢组学的研究ᤥ 样品真空冷冻 积ྉဂᓂɯଫቂ 为称取的样本质量ྉ੫ɯᤥ
干燥ᖔ研磨成粉末ྉሕԡ ̀झᖔ ϟጢ ቝᔽႿɯᖔͱऐԡ ቩ 保存ᤥ
取 ጢԡ ቝ੫ 粉末称重ᖔ用 ԡጢ ቝᓂ 甲醇ᣰ 水ᣰ 盐酸ྉጢԡԡ ᨒ জ 结果与分析
ጢԡԡ ᨒ ϟᖔႬᣑ Ⴌᣑ Ⴌɯ提取ᤥ 随后将提取液涡旋 ጢቝᔽႿᖔ超
声 ጢቝᔽႿᖔ在 ࿗ቩ下 ϟ ԡԡԡ 离心 ሕቝᔽႿᤥ 在相同条 ԣॹϓ 花瓣表型及生理指标分析
件下重复上述步骤再次提取残渣ᤥ 收集上清液ᖔ经 永源寺ܦ普贤象和郁金样品盛花期花瓣形态
微孔膜过滤器ྉԡ ဂቝᖔዶႿᡱᔀɯ过滤样品ᖔ后续使用 如图 ϟ 所示ᖔ均为重瓣品种ᖔ花朵完全开展且表观
ᓂऊ᥋ᥘ୩ ᣰ ᥘ୩ྉ୩ऊ᧧ጶᣮᖔ͐ఋዶ۪ ᤃጢԡԡշɯ进行分析ᤥ 混合 色彩差异较大ᤥ 通过 ԡ 倍光学显微镜观察花瓣
标准溶液作为质控样本ᖔ每隔 ϟԡ 个检测分析插入 ϟ 上表皮的显微结构ᖔ白色花瓣上表皮无明显色素
个质控样本用于检测仪器稳定性ᤥ 沉积ྉ图 ϟ᧥᧕ɯଫ而粉色花瓣上表皮细胞呈现粉紫
ϓॹ 靶向花青素代谢组测定 色ྉ图 ϟ᧥ጶɯᖔ可能是花青素的色素沉淀ଫ绿色花瓣
花青素提取基于 èᔀʢʢᑕʢ༁ 等ྉԡϟ࿗ɯ 的方法ᤥ 数 上表皮呈现绿色ྉ 图 ϟ᧥èɯᤥ 进一步测定品种叶绿
据采 集 仪 器包括使用超高效液相色谱 ྉ ࣼᡷʢᑕ 素含量后发现ᖔ郁金中的叶绿素含量远高于其他
ᡱᔀʢᆍʢቝᑕႿዹᔀ ᔽीࣼᔽʛ ዹၤʢᆍቝᑕᡷᆍ੫ʢᑕᡱၤᢃᖔВ۪ᓂऊɯ 和串联质 两个品种ྉ 图 ɯ ᖔ 郁金呈现绿色的主要原因是叶
谱ྉᡷᑕႿʛᔀቝ ቝᑕ༁༁ ༁ᡱᔀዹᡷʢᆍቝᔀᡷʢᢃᖔᥘ୩ ᣰ ᥘ୩ɯᤥ 液相条件᧥ 绿素沉积ᤥ 这表明花青素在植物花色中起到关
ྉϟɯዶऊ͐В᧧ఋɟ ାጶ̀ ऊϟऐ ϟᎮ ဂቝᖔϟ ቝቝġϟԡԡ ቝቝ 的 键性作用ᖔ结合已有的表型和生理指标ᖔ选定花
色谱柱ଫྉɯ流动 ዶ 相为超纯水ྉԡϟᠮ甲酸ɯଫ流动 ା 青素进行下一步的靶向代谢组学检测ᤥ
