Page 144 - 《广西植物》2024年第11期
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２ １ ２ ８ 广 西 植 物 ４４ 卷
１.１.３ 微生物接种用土 ２０２２ 年 １ 月 ５ 日ꎬ采集已经 为接种源ꎬ取质量为土壤基质 １０％的新鲜土壤( 即
分别种植了 ８０ ｄ 山合欢和 ８０ ｄ 银合欢的新鲜土壤 ８０ ｇ 新鲜土)ꎬ按 １ ∶ １ 的土水比加入灭菌水中ꎬ混
用作微生物接种用土ꎬ经高通量测序ꎬ山合欢和银 合并搅拌 ２ ｍｉｎꎮ 先将悬浮液放置 １５ ｍｉｎ 后ꎬ再搅
合欢土壤的微生物群落组成和多样性如表 １ 所示ꎮ 拌 ２ ｍｉｎ 并静置 １５ ｍｉｎꎬ最后筛分上清液ꎬ将上清
将采集的新鲜土壤保存于－２０ ℃冰箱中备用ꎮ 液过 ０.５ ｍｍ 筛ꎬ过滤液即为接种液ꎬ并用灭菌水
１.２ 试验设计 冲洗至相同的体积ꎬ为一个盆钵接种量ꎮ 对照处
整个试验包括植物、水分、土壤微生物 ３ 个因 理添加等量的灭菌后的土壤悬浮液ꎮ 微生物接种
素ꎮ 其中ꎬ植物分为山合欢和银合欢ꎮ 水分处理 １ 个月后开始进行水分胁迫ꎬ通过称重法控制不同
采用传统的称重法进行控制ꎬ通过控制不同的土 的田间持水量进行浇水ꎮ 每天进行称重并补充灭
壤田间持水量(ｆｉｅｌｄ ｃａｐａｃｉｔｙꎬ ＦＣ)水平设置水分梯 菌水以维持含水量ꎬ并记录各盆钵每次的浇水量ꎮ
度( Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１６ꎻ刘爱林等ꎬ２０２３)ꎮ 试验前 同时ꎬ及时收集落叶ꎬ观察植物变化ꎮ 水分胁迫 ７２
测出该区燥红土的 ＦＣ 为 １２％ꎬ据此设置湿润(Ｗ) ｄ 后收获植物和土壤样品进行指标测定ꎮ
和干旱(Ｄ)两个梯度ꎬ湿润为 ８０％ ~ ８５％ ＦＣꎬ干旱 １.３ 指标测定方法
为 ４０％ ~ ４５％ ＦＣꎬ对应的土壤质量含水量分别为 (１)植物生长和生物量指标:用直尺测量植株
９.６％ ~ １０.２％和 ４.８％ ~ ５.４％ꎮ 微生物处理分为未 株高ꎻ将各盆中植株地上部分和根系部分分开取
接种(Ｍ )和接种土壤微生物(Ｍ)两种ꎮ 由于不同 样ꎬ将根系和地上部分于 ６５ ℃ 烘干至恒重后称量
０
植物下的土壤微生物群落具有差异ꎬ对本地种和 每盆中根系生物量和地上生物量ꎮ 同时ꎬ将试验
外来种的反馈效应也不同ꎬ本研究主要关注植物 过程中收集的枯叶于 ６５ ℃ 烘干称重ꎮ 每盆随机
生长过程中自身的土壤微生物对其生长发育的反 选择 ２０ 片长势良好的叶片ꎬ首先将采集的叶片迅
馈作用ꎬ因此山合欢处理接种山合欢土壤微生物ꎬ 速称鲜重(Ｗ )ꎬ然后在 ５ ℃ 的黑暗环境中用去离
Ｆ
银合欢处理接种银合欢土壤微生物ꎬ最终形成山 子水浸泡 １２ ｈ 后用吸水纸吸去叶片表面水分ꎬ迅
合欢(ＤＭ 、ＷＭ 、ＤＭ 、ＷＭ)和银合欢(ＤＭ 、ＷＭ 、 速称其饱和鲜重( Ｗ )ꎬ最后将叶片放入 ６５ ℃ 烘
０ ０ ０ ０ Ｒ
ＤＭ、ＷＭ)共 ８ 种处理ꎬ每个处理设置 ４ 个重复ꎮ 箱中烘干至恒重后称干重( Ｗ )ꎬ计算相对含水量
Ｄ
本研究采用室内培养法ꎬ利用气候箱模拟干热 (％)＝ [(Ｗ －Ｗ ) / (Ｗ －Ｗ )] ×１００ꎮ
Ｆ Ｄ Ｒ Ｄ
河谷的温湿度条件ꎬ未考虑当地地形的影响ꎮ 试验 (２)植物养分指标:将植株地上部分烘干后磨
于 ２０２２ 年 ２ 月底开始ꎬ试验时ꎬ先称量空盆钵重量ꎬ 细ꎬ用于测定植株氮磷含量ꎮ 运用凯氏定氮法测
将盆钵灭菌(１２１ ℃ꎬ２０ ｍｉｎ) 后根据盆钵体积取等 量植物氮含量ꎬ钒钼黄吸光光度法测量磷含量ꎮ
质量的山合欢灭菌土(４００ ｇ) 和银合欢灭菌土(４００ (３)土壤指标:每盆中取一定量的、同样深度
ｇ) 混匀后装入灭菌的盆钵中ꎬ用作盆栽基土ꎬ同时 的土壤ꎬ烘干称量土壤重量含水量ꎮ 通过稀释平
浇适量灭菌水保持土壤湿润ꎮ 挑选健康、饱满的植 板法测定土壤中细菌、霉菌、放线菌数量ꎬ细菌采
物种子ꎬ经过浓硫酸浸泡搅拌 ５ ｍｉｎ 后破除休眠ꎬ用 用牛肉膏琼脂培养基ꎬ浓度梯度为 １０ ꎬ放线菌采
￣４
无菌水反复冲洗干净后播种于盆钵中ꎬ每盆播 １０ 颗 用高氏一号培养基ꎬ浓度梯度为 １０ ꎬ霉菌采用孟
￣２
银合欢或山合欢种子ꎬ播种后再在表面覆盖等质量 加拉红固体培养基ꎬ浓度梯度为 １０ ꎮ 土壤有效氮
￣２
的灭菌基质ꎬ放入气候培养箱( 昼夜:１６ ｈ / ８ ｈꎬ３５ 含量采用碱解扩散法ꎬ土壤有效磷含量采用钼锑
℃ / ２５ ℃ꎬ光照度 １５ ０００ ｌｘ)中培养ꎮ ３５ ℃ / ２５ ℃的 抗比色法ꎮ
昼夜温度接近于干热河谷区植物生长季的空气温 (４)共生体指标:根系取样时通过计数法统计
度(王雪梅等ꎬ２０１７)ꎮ 前期保持等量足够的浇水量 根瘤 数 量ꎮ 采 用 醋 酸 墨 水 染 色 法 ( 杨 亚 宁 等ꎬ
促使种子发芽ꎬ待所有盆钵均出现 ４ 株幼苗时间苗ꎬ ２０１０)在高倍显微镜下观察菌丝、泡囊和丛枝的交
保持每盆有 ４ 株幼苗ꎮ 继续培养一段时间后ꎬ开始 叉点数ꎬ最后计算丛枝菌根真菌的侵染情况ꎮ
进行微生物接种处理ꎮ １.４ 数据分析
土壤微生物接种参照 ｖａｎ ｄｅ Ｖｏｏｒｄｅ 等(２０１２) 本试验采用 Ｅｘｃｅｌ 和 ＳＰＳＳ ２２.０ 软件对数据进
的方法ꎬ以接种土壤微生物悬浮液的方式进行ꎬ具 行统计分析ꎮ 首先ꎬ用独立样本 Ｔ 检验分析山合
体方法如下:分别以山合欢和银合欢的新鲜土壤 欢和银合欢是否存在显著性差异ꎮ 然后ꎬ 由于接
