Page 156 - 《广西植物》2022年第9期

ϟ ጢ ँ ԰ 广জ 西জ 植জ 物 ࿗԰ 卷
柑橘对溃疡病的抗性ྉ祁静静等ᖔ ԰ԡ԰ԡɯᤥ 目前ᖔ已 化大肠杆菌 ᧕̀ጢም 感受态细胞ᖔ在氨苄抗性平板
鉴定出多个物种的 ऊዶఋ༁ 和 ୩ᨃ᧕༁ᤥ 例如᧥拟南芥 上进行筛选ᖔ经菌液 ۪ऊ኏ 和电泳检测后ᖔ挑选阳性
ྉዛʗᐹᤇᔠʐᅳᡓ໧ᔠ໧ ᡙ၊ᐹᤀᔠᐹႥᐹɯ 中鉴定出了 ሕ 个 ऊዶఋ 和 Ꭾ 个 克隆送上海生工测序ᤥ
୩ᨃ᧕ 基 因家族成员 ྉ ᣽᤟ᔽᔀᤦᔀႿ༁ᡷᔀᔽႿ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ ϟँँऐଫ ϟ঎԰঎԰ 总 ኏શዶ 提取与 ዹ᧕શዶ 第一条链的合成জ 总
჆ᑕႿʛᔀႿᑕᤦᔀᔀ᤟ᔀ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ ԰ԡԡ࿗ɯଫ水稻ྉ᧣ʗᡥऊᐹ ໧ᐹᡙᔠצᐹɯྉશᑕᡷၤ ኏શዶ 提取依照改良 ऊఋዶାͱ异丙醇法进行ྉ 张力鹏
ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ ԰ԡϟ࿗ɯ 和高粱 ྉ ୒ᅳʗ੖၊ࣩቂ ᤇᔠዞᅳᤀᅳʗ ɯ ྉ èᔽ᤟ᔽझ ᪲ 等ᖔ ԰ԡϟᎮɯᤥ 利用可见光分光光度 计 શᑕႿᆍ᧕ʢᆍᡱ
ఋᆍቝᤦࣼ᤟ᆍ੫ ږ ᤟ࣼᖔ ԰ԡϟጢɯ中均鉴定出 ऐ 个 ୩ᨃ᧕ 基因家族成 ϟ ԡԡԡ检测 ኏શዶ 的纯度和浓度ᖔ并利用 ϟᠮ琼脂糖
员ᤥ 鉴于大花红景天所生长的环境为极地高原气 凝胶电泳检测其完整性ᤥዹ᧕શዶ 第一条的合成利
候ᖔ在其生活史中寒冷ܦ低氧ܦ强紫外线照射等恶劣 用反转录酶 ᥘͱᥘᓂ჆ྉ ఋᑕҴᑕʢᑕᖔ ȮᑕᡱᑕႿɯᖔ采用 ጢԡ ဂᓂ
环境因子必然引起光合作用ܦ呼吸作用及其他代谢 体系ᖔ反转录总 ኏શዶ 量为 ጢဂ੫ ኏શዶᤥ 将反转产物
途径的变化ᖔ其中较为直接的影响即为活性氧的动 用无菌 ʛʛ ̀ ᨃ 稀释 ϟԡ 倍后ͱ԰ԡ ቩ 保存ᤥ
԰
态变化ᤥ 因此ᖔ我们提出 ऊዶఋ 和 ୩ᨃ᧕ 基因可能对 ϟ঎԰঎ሕ 生物信息学分析 জ 通过生物信息学在线网
于西藏大花红景天适应特殊生境具有重要作用ᤥ 站对获得的 ቴዞࣷዛ௴໧ܦቴዞ୒᧣ᦵ໧ 和 ቴዞࣷࣷ୒ 基因氨基酸
然而ᖔ目前对大花红景天及其红景天属植物尚无相 序 列 进行分析ᤥ 利用 ା᤟ᑕ༁ᡷ଴ ྉ ၤᡷᡷᡱ༁᧥ᣰ ᣰ ᤦ᤟ᑕ༁ᡷ঎ Ⴟዹᤦᔽ঎
关基因的报道ᤥ Ⴟ᤟ቝ঎Ⴟᔽၤ঎੫ᆍ׹ ᣰ ା᤟ᑕ༁ᡷ଴ɯ进行序列验证ଫ利用 ᨃ኏è èᔽႿʛᔀʢ
为了进一步研究 ቴዞࣷዛ௴໧ 和 ቴዞ୒᧣ᦵ໧ 基因家族 ྉၤᡷᡷᡱ᧥ᣰ ᣰ औऔऔ঎ᤦᔽᆍᔽႿ஦ᆍʢቝᑕᡷᔽዹ༁঎ᆍʢ੫ ᣰ ༁ቝ༁԰ ᣰ ᆍʢ஦ᡸ஦ᔽႿʛ঎ ၤᡷቝ᤟ɯ
的功能ᖔ本研究以西藏大花红景天为材料ᖔ对 ኏ᨃ୩ 获得编码框ଫ利用 ା᤟ᑕ༁ᡷ۪ 寻找同源基因 ྉ ၤᡷᡷᡱ༁᧥ᣰ ᣰ
途径中的 ऊዶఋ 和 ୩ᨃ᧕ 基因家族成员进行克隆ᖔ基 ᤦ᤟ᑕ༁ᡷ঎ Ⴟዹᤦᔽ঎ Ⴟ᤟ቝ঎ Ⴟᔽၤ঎ ੫ᆍ׹ ɯଫ 利用 ᧕શዶᥘዶશ 计算
于在线软件和实时定量 ۪ऊ኏ 对其生物信息学和特 ቴዞࣷዛ௴໧ܦቴዞ୒᧣ᦵ໧ 和 ቴዞࣷࣷ୒ 与各自同源基因的同源
异性表达进行分析ᖔ并构建 ቴዞࣷዛ௴ 和 ቴዞ୒᧣ᦵϟ 的酵 性比 值ଫ 利用 ۪ʢᆍᡷऊᆍቝᡱ 分析基因的亚细 胞 位 置
母表达载体与酵母双杂交诱饵载体ᖔ分别进行酵 ྉ ၤᡷᡷᡱ᧥ᣰ ᣰ ᤟ᔽႿࣼ଴ϟ঎ ༁ᆍ஦ᡷᤦᔀʢʢᢃ঎ ዹᆍቝᣰ ɯଫ 利用 ఋᥘ̀ᥘᥘ
母胁迫分析和筛选拟南芥酵母文库中的互作蛋 ୩ᔀʢ׹ᔀʢᖔ ׹঎ ԰঎ԡ 分析基因的跨膜结构域有无ྉၤᡷᡷᡱ᧥ᣰ ᣰ
白ᖔ以揭示西藏大花红景天对其高原恶劣环境适 औऔऔ঎ ዹᤦ༁঎ ʛᡷࣼ঎ ʛҴ ᣰ ༁ᔀʢ׹ᔽዹᔀ༁ᣰ ఋᥘ̀ᥘᥘᣰ ɯଫ 利用 ጶ଴۪ዶ୩ᢃ

应的分子机制ᤥ 预测 蛋白质理化性质 ྉ ၤᡷᡷᡱ༁᧥ᣰ ᣰ औᔀᤦ঎ ᔀ଴ᡱᑕ༁ᢃ঎ ᆍʢ੫ ᣰ
ᡱʢᆍᡷᡱᑕʢᑕቝᣰ ɯ ྉ张世鑫等ᖔ ԰ԡ԰ϟଫ 解盛等ᖔ ԰ԡ԰ϟɯᤥ
ϟজ 材料与方法 ϟ঎԰঎࿗ 基因表达分析জ 组织特异性表达分析ᖔ采用
同一株组培苗的根ܦ茎ܦ叶三个器官ᤥ 非生物胁
ϓॹϓ 实验材料 迫采用低温诱导ᖔ将处于同一生长时期的组培苗
研究材料为西藏大花红景天ᖔ于 ԰ԡϟጢ 年 Ꭾ 月采 浸于冰水混合物中黑暗胁迫处理 ԡܦሕܦᎮ ʛᤥ 植物
集自西藏地区米拉山山脉ྉ海拔 ࿗ ऐᤃऐ঎࿗ ቝܦँ԰঎ሕ࿗๼ 激素脱落酸ྉዶାዶɯ 诱导ᖔ将同一生长时期的组培
ጶܦ԰ँ঎Ꭾऐ๼ શɯᤥ 经南开大学宋文芹教授鉴定为景天 苗浸于含有 ጢԡ ဂቝᆍ᤟ኼᓂ ዶାዶ 的 ᥘ୩ 液体培养基
᥋ϟ
科药用植物大花红景天ᤥ 部分材料经液氮速冻后 中ᖔ黑暗处理 ᤃܦ԰࿗ܦሕᤃ ၤᖔ每个处理均设 ሕ 个生物
保存于ͱऐԡ ቩଫ其余材料以叶片为外植体进行组织 学重复ᤥ 胁迫处理后ᖔ所有材料均经无菌水洗净
培养获得无菌再生苗并进行后续实验ᤥ 并擦干后于液氮速冻ᖔͱऐԡ ቩ 超低温保存ᤥ 胁迫
ϓॹԣ 实验方法 处理材料的叶片用于提取总 ኏શዶ ྉ 张力鹏等ᖔ
ϟ঎԰঎ϟ 基因序列 扩 增 জ ቴዞࣷዛ௴໧ܦቴዞ୒᧣ᦵ໧ 和 ቴዞࣷࣷ୒ ԰ԡϟँɯ ᤥ
基因序列来源于本实验室已完成的转录组数据 ϟ঎԰঎ጢ 实时定量 ۪ऊ኏জ 采用 ାᔽᆍ᥋኏ᑕʛ 公司荧光定量
库ᖔ基于 ʐᓣ Ⴅᅳצᅳ 拼接的 ࣼႿᔽ੫ᔀႿᔀ 注释信息ᖔ分别以 ۪ऊ኏ 仪 ᔽ͐ጢ 进行 ी኏ఋ᥋۪ऊ኏ᖔ检测目的基因在不同
ऊዶఋ 和 ୩ᨃ᧕ 为 关 键 词 对数据库进行检索ᖔ 获得 组织和不同胁迫条件下表达水平ᤥ 反应体系为 ԰ԡ
ቴዞࣷዛ௴໧ܦቴዞ୒᧣ᦵ໧ 和 ቴዞࣷࣷ୒ 序列ᖔ然后根据所获得 ဂᓂᖔ包含 ϟԡ ဂᓂ ୩ɟା኏᥈ʢᔀᔀႿྉ ఋᑕҴᑕʢᑕᖔ ȮᑕᡱᑕႿɯᖔϟ ဂᓂ
的基因序列设计特异性引物扩增全长ᖔ以大花红 ዹ᧕શዶᖔԡ঎ጢ ဂᓂ 上下游引物ᤥ 以 ቴዞᤩዛۗᦵ̵ 为内参
景天叶片 ዹ᧕શዶ 为模板进行 ۪ऊ኏ 反应ᖔ用 ۪ऊ኏ 产 基因ᖔ每个样品均采用三次生物学重复ྉ ԻၤᑕႿ੫ ᔀᡷ
物纯化试剂盒纯化后与 ᡱᥘ᧕ϟँ ͱఋ׹ᔀዹᡷᆍʢ 连接ᖔ转 ᑕ᤟঎ᖔ ԰ԡϟऐɯᤥ