Page 67 - 《广西植物》2023年第11期

１１ 期 梁考云等: 药用红树木榄胚轴抗 ＨＢＶ 化学成分的研究 ２ ０ ２ ７

到的单体化合物稀释成 １００ μｇｍＬ ꎬ同时使用 表 １ 木榄胚轴粗提物及各萃取部位对
￣１
１００ μｇｍＬ 拉米夫定(３ＴＣ) 作为阳性对照ꎬ另设 ＨｅｐＧ２.２.１５ 细胞增殖的影响
￣１
阴性对照组ꎮ 使用乙型肝炎核酸定量检测试剂盒 Ｔａｂｌｅ １ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｃｒｕｄｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ
ｐａｒｔｓ ｏｆ ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ ｏｆ Ｂｒｕｇｕｉｅｒａ ｇｙｍｎｏｒｈｉｚａ
检测第 ６ 天细胞上清液中 ＨＢＶ ＤＮＡ 的含量ꎮ
ｏｎ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＨｅｐＧ２.２.１５ ｃｅｌｌｓ
２ 结果与分析 细胞存活率 Ｃｅｌｌ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ (％)
提取物
Ｅｘｔｒａｃｔ ５００ ２５０ １２５
２.１ 活性部位筛选结果 μｇｍＬ ￣１ μｇｍＬ ￣１ μｇｍＬ ￣１
高浓度药物作用于细胞ꎬ会引起细胞变形、死 粗提物 ７３.６６± ９５.０５± １０２.６２±
亡ꎬ从而导致乙肝病毒标志物分泌量减少ꎬ对药物 Ｃｒｕｄｅ ｅｘｔｒａｃｔ ６.２８ａ ４.６１ｂ ４.１４
石油醚部位 ６４.５４± ９０.５１± １０１.５９±
抗乙肝病毒作用的判定产生影响( 刘建京和林秀
Ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ ｅｔｈｅｒ ｅｘｔｒａｃｔ １.８１ａ １.２６ｂ ６.８８
玉ꎬ１９９５)ꎮ 因此ꎬ需确定对 ＨｅｐＧ２.２.１５ 细胞基本 乙酸乙酯部位 ４４.０８± ５０.８１± ７６.２９±
Ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｅｘｔｒａｃｔ １.２８ａ ０.９１ａ ０.８６ａ
无毒性的药物剂量进行乙肝病毒实验ꎮ 采用 ＭＴＴ
正丁醇部位 ６２.２２± ８７.０４± ９３.６２±
方法 测 定 木 榄 胚 轴 粗 提 物 和 不 同 萃 取 部 位 对 ｎ￣ｂｕｔａｎｏｌ ｅｘｔｒａｃｔ ３.３７ａ １.３７ａ ５.５４
ＨｅｐＧ２.２.１５ 细胞增殖的影响ꎬ确保后续抗 ＨＢＶ 活 水部位 ９５.４９± ９２.１３± ９５.２４±
Ｗａｔｅｒ ｅｘｔｒａｃｔ １.６１ ５.７５ ９.５６
性实验在基本无毒的条件下进行ꎮ 由表 １ 可知ꎬ
拉米夫定 — ８８.１１± —
与阴性对照组相比ꎬ粗提物和其他部位在 ５００、２５０ ３ＴＣ １.６１
μｇｍＬ 浓度下对细胞增殖均有显著抑制作 用 阴性对照 — １００.００± —
￣１
Ｃｏｎｔｒｏｌ ２.３６
(Ｐ<０.０５)ꎬ水部位对细胞的增殖无抑制作用ꎮ 粗
￣１ 注: ａ 表示与阴性对照组比较ꎬ差异显著( Ｐ<０.０５)ꎻ ｂ 表示
提物和其他部位在 １２５ μｇｍＬ 下对 ＨｅｐＧ２.２.１５
与阴性对照组比较ꎬ差异极显著(Ｐ<０.０１)ꎮ 下同ꎮ
细胞无毒副作用ꎬ后续活性实验可使用 １２５ μｇ
Ｎｏｔｅ: ａ ｉｎｄｉｃａｔｅｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｖｓ Ｃｏｎｔｒｏｌ ( Ｐ< ０.０５)ꎻ
￣１
ｍＬ 或者更低量为给药浓度ꎮ ｂ ｉｎｄｉｃａｔｅｓ ｅｘｔｒｅｍｅｌｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｖｓ Ｃｏｎｔｒｏｌ ( Ｐ <
ＨＢＶ￣ＤＮＡ 为乙肝病毒复制的基础ꎬ也是检测 ０.０１). Ｔｈｅ ｓａｍｅ ｂｅｌｏｗ.
乙肝病毒复制的直接指标ꎬ研究表明慢性 ＨＢＶ 感
染的传染性强弱跟 ＨＢＶ ＤＮＡ 水平密切相关ꎬ同时 (１Ｈꎬ ｄꎬ Ｊ ＝ ８.０７ Ｈｚꎬ Ｈ￣６)ꎬ ５.７８ (１Ｈꎬ ｄꎬ Ｊ ＝
ＨＢＶ ＤＮＡ 复制水平会变化ꎬ乙肝疾病的病理现象 ５.４６ Ｈｚꎬ Ｈ￣１′)ꎬ ５.６５ (１Ｈꎬ ｄꎬ Ｊ ＝ ８.０４ Ｈｚꎬ Ｈ￣
也会变化ꎮ 乙肝病毒 ＤＮＡ 定量检测是最直接检 ５)ꎬ ４.０２ (１Ｈꎬ ｔꎬ Ｊ ＝ ５.３４ Ｈｚꎬ Ｈ￣２′)ꎬ ３.９６ (１Ｈꎬ
测其是否发生复制的方法( 王光彦等ꎬ２０２２)ꎮ 现 ｔꎬ Ｊ ＝ ４.５３ Ｈｚꎬ Ｈ￣３′)ꎬ ３.８４ ( １Ｈꎬ ｑꎬ Ｊ ＝ ３.４４
今可通过检测给药后 ＨＢＶ ＤＮＡ 复制水平来判断 Ｈｚꎬ Ｈ￣４′)ꎬ ３.６２ (１Ｈꎬ ｄｔꎬ Ｊ ＝ ３.０６ꎬ １２.１１ Ｈｚꎬ Ｈ￣
是否具有抗 ＨＢＶ 活性ꎮ 木榄胚轴粗提物及萃取 ５′)ꎬ ３.５５ (１Ｈꎬ ｄｔꎬ Ｊ ＝ ３.０１ꎬ １２.２０ Ｈｚꎬ Ｈ￣６′)ꎻ
１３
部位对 ＨｅｐＧ２.２.１５ 细胞上清 ＨＢＶ ＤＮＡ 影响ꎮ 实 Ｃ ＮＭＲ (１２５ ＭＨｚꎬ ＤＭＳＯ￣ｄ ) δ : １５０.８( Ｃ￣２)ꎬ
６
Ｃ
验结果如图 １ 所示ꎬ与阴性对照组相比ꎬ石油醚部 １６３.２ ( Ｃ￣４)ꎬ １０１. ８ ( Ｃ￣５)ꎬ １４０. ８ ( Ｃ￣６)ꎬ ８７. ７
位未表现出抑制细胞上清 ＨＢＶ ＤＮＡ 水平作用ꎮ ( Ｃ￣１′)ꎬ ６９.９ (Ｃ￣２′)ꎬ ７３.６ (Ｃ￣３′)ꎬ ８４.９ (Ｃ￣４′)ꎬ
木榄粗提物、水部位、正丁醇部位均使细胞上清 ６０.９ ( Ｃ￣５′)ꎮ 化 合 物 波 谱 数 据 与 文 献 ( Ｗａｎｇ ｅｔ
ＨＢＶ ＤＮＡ 的水平显著降低( Ｐ<０.０５)ꎮ 正丁醇部 ａｌ.ꎬ ２０１０)具体报道基本一致ꎬ故鉴定为尿嘧啶ꎮ
位抑制ＨｅｐＧ２.２.１５细胞分泌的 ＨＢＶ ＤＮＡ 具有极 化合 物 ２ 白 色 粉 末ꎮ ＥＳＩ￣ＭＳ ｍ / ｚ: ２４３. １
＋ １
显著作用(Ｐ<０.０１)ꎬ抑制效果强于木榄胚轴粗提 [Ｍ＋Ｈ] ꎬ 分 子 式: Ｃ Ｈ Ｎ Ｏ ꎮ Ｈ ＮＭＲ ( ５００
１０
１４
５
２
物ꎬ因此选择木榄胚轴正丁醇部位作为研究对象ꎬ ＭＨｚꎬ ＤＭＳＯ￣ｄ ) δ : １１.２７ (１Ｈꎬ ｓꎬ Ｈ￣３)ꎬ ７. ７０
Ｈ
６
进行物质基础研究ꎮ (１Ｈꎬ ｄꎬ Ｊ ＝ １.５１ Ｈｚꎬ Ｈ￣６ )ꎬ ６.１７ (１Ｈꎬ ｄｄꎬ Ｊ ＝
２.２ 化学成分结构鉴定(具体结构见图 ２) ６.１３ꎬ ７.６３ Ｈｚꎬ Ｈ￣１′)ꎬ ４.２４ (１Ｈꎬ ｄｔꎬ Ｊ ＝ ２.９８ꎬ
化合 物 １ 白 色 结 晶ꎮ ＥＳＩ￣ＭＳ ｍ / ｚ: ２４４. ７ ２.９８ꎬ ５.８６ Ｈｚꎬ Ｈ￣３′)ꎬ ３.７６ (１Ｈꎬ ｑꎬ Ｊ ＝ ３.７２ꎬ
＋ １
[ Ｍ＋Ｈ] ꎬ 分 子 式: Ｃ Ｈ Ｎ Ｏ ꎮ Ｈ ＮＭＲ ( ５００ ３.７２ꎬ ３.７３ Ｈｚꎬ Ｈ￣４′)ꎬ ３.５６ (２Ｈꎬ ｍꎬ Ｈ￣５′)ꎬ ２.０７
９ １２ ２ ６
ＭＨｚꎬ ＤＭＳＯ￣ｄ ) δ : １１.３１ ( １Ｈꎬ ｓꎬ Ｈ￣３) ꎬ ７.８９ (２Ｈꎬ ｍꎬ Ｈ￣２′)ꎬ １. ７７ ( ３Ｈꎬ ｄꎬ Ｊ ＝ １. １８ Ｈｚꎬ
６ Ｈ