Page 71 - 《广西植物》2023年第7期

７ 期 周思旋等: 光枝勾儿茶内生真菌多样性及抑菌活性研究 １ ２ ３ ９

生变化的最后 １ 孔药物浓度为该药的 ＭＩＣꎮ ＩＲ 和 ＩＦ 分别为 ４. ５２％ ( ２１ / ４６５) 和 １８. ５８％ ( ２１ /
１. ６. ４ 最 小 杀 菌 浓 度 ( ｍｉｎｉｍｕｍ ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌ １１３)ꎬ葡萄座腔菌属 ＩＲ 和 ＩＦ 分别为 ４.０９％ (１９ /
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎꎬ ＭＢＣ)的测定 将 １.６.３ 试验组澄清 ４６５)和 １６.８１％(１９ / １１３)ꎮ 从黔西分离得到的优
的各孔中液体取 １００ μＬ 涂布于 ＭＨ 固体培养基 势属为 刺 盘 孢 属ꎬ ＩＲ 和 ＩＦ 最 高ꎬ 分 别 为 ６. ３５％
上ꎬ３７ ℃ 培养 １８ ~ ２４ ｈ 观察结果ꎮ 肉眼观察无菌 (２０ / ３１５)和 ２５.６４％(２０ / ７８)ꎬ其次为间座壳属ꎬＩＲ
落生长的最低药物浓度为其 ＭＢＣꎮ 和 ＩＦ 分别为 ５.４０％(１７ / ３１５) 和 ２１.７９％(１７ / ７８)ꎬ
葡萄座腔菌属的 ＩＲ 和 ＩＦ 分别为 ４.１３％(１３ / ３１５)
２ 结果与分析 和 １６.６７％(１３ / ７８)ꎮ
２.３ 不同组织部位内生真菌多样性分析
２.１ 光枝勾儿茶内生真菌组成 从光枝勾儿茶不同组织分离内生真菌分析结
从贵阳及黔西光枝勾儿茶不同组织部位 ７８０ 果表明( 表 ２)ꎬ根、茎、叶和果实分离菌分别分布
个组织块中分离得到 １９１ 株内生真菌ꎬ分离率为 于 ９ 个、１３ 个、１１ 个、６ 个属ꎬ４ 个组织均分离到共
２４.４９％ ( １９１ / ７８０)ꎬ 其 中 贵 阳 分 离 率 为 ２４. ３０％ 有属葡萄座腔菌属、刺盘孢属和间座壳属ꎮ 新壳
(１３２ / ４６５)ꎬ黔西为 ２４.７６％(９３ / ３１５)ꎮ ＰＣＲ 产物 梭孢属为根、茎、叶共有属ꎬ链格孢属和歪嘴座壳
序列经校对、拼接、剪切后ꎬ结合形态学和分子生 属为茎、叶、果实共有属ꎬ毛色二孢属和叶点霉属
物学对分离得到的内生真菌进行鉴定( 表 １)ꎮ 结 为茎和叶共有属ꎬ镰刀菌属、新拟盘多毛孢属和拟
果显示ꎬ分离菌株隶属于 ３ 个门 ５ 个纲 １０ 个目 １５ 盘多毛孢属为根和茎共有属ꎮ 仅从根中分离得到 ２
个科 １９ 个 属ꎮ 在 贵 阳 和 黔 西 分 别 分 离 得 到 １１ 个属ꎬ分别为毛霉属和木霉属ꎻ仅从茎中分离到 ２ 个
个、１４ 个属的菌株ꎮ 其中ꎬ仅贵阳分离得到菌株隶 属ꎬ包括匍柄霉属和微结节霉属ꎻ仅从叶中分离到 ３
属于 ５ 个属ꎬ分别为烟管菌属( Ｂｊｅｒｋａｎｄｅｒａ)、假囊 个属ꎬ包括拟盾壳霉属、环纹碳团菌属和烟管菌属ꎻ
酵 母 属 ( Ｅｒｅｍｏｔｈｅｃｉｕｍ )、 毛 色 二 孢 属 仅从果实中分离到 １ 个属为假囊酵母属ꎮ
(Ｌａｓｉｏｄｉｐｌｏｄｉａ)、歪嘴座壳属( Ｐｌｅｕｒｏｓｔｏｍａ) 和匍柄 光枝勾儿茶不同组织香农－维纳多样性指数
霉属(Ｓｔｅｍｐｈｙｌｉｕｍ)ꎻ仅黔西分离得到 ８ 个属ꎬ分别 结果分析表明ꎬ茎(Ｈ′ ＝ ２.００４) >根(Ｈ′ ＝ １.７６４) >
Ｓ Ｒ
为 环 纹 碳 团 菌 属 ( Ａｎｎｕｌｏｈｙｐｏｘｙｌｏｎ)、 镰 刀 菌 属 叶(Ｈ′ ＝ １.６５４) >果实( Ｈ′ ＝ １.４７３)ꎬ辛普森指数
Ｌ Ｆ
(Ｆｕｓａｒｉｕｍ)、微结节霉属( Ｍｉｃｒｏｄｏｃｈｉｕｍ)、毛霉属 结果 为 茎 ( Ｄ ＝ ０. ８２６) > 果 实 ( Ｄ ＝ ０. ８１３) > 根
Ｓ Ｆ
(Ｍｕｃｏｒ)、新拟盘多毛孢属( Ｎｅｏｐｅｓｔａｌｏｔｉｏｐｓｉｓ)、拟盾 (Ｄ ＝ ０.７６５) >叶( Ｄ ＝ ０.７２１)ꎮ 茎和叶所得内生
Ｒ Ｌ
壳 霉 属 ( Ｐａｒａｃｏｎｉｏｔｈｙｒｉｕｍ )、 拟 盘 多 毛 孢 属 真菌的相似性最高ꎬＣｓ ＝ ０.６６７ꎬ其次为根和茎ꎬ
Ｓ－Ｌ
(Ｐｅｓｔａｌｏｔｉｏｐｓｉｓ) 和木霉属( Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ)ꎻ贵阳和黔 Ｃｓ ＝ ０.６３６ꎬ相似性最低的为根和果实ꎬＣｓ ＝
Ｒ－Ｓ Ｒ－Ｆ
西共有属 ６ 个ꎬ分别为链格孢属( Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ)、葡萄 ０.２６７ (表 ３)ꎮ
座 腔 菌 属 ( Ｂｏｔｒｙｏｓｐｈａｅｒｉａ )、 刺 盘 孢 属 ２.４ 内生真菌次级代谢产物抑菌活性筛选
(Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ)、间座壳属( Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ)、新壳梭孢 选择的 ２３ 株菌株次级代谢产物抑菌活性测
属(Ｎｅｏｆｕｓｉｃｏｃｃｕｍ)、叶点霉属( Ｐｈｙｌｌｏｓｔｉｃｔａ)ꎮ 其多 定结果表明ꎬ其中 ２０ 株内生真菌液体发酵提取物
样性分析结果表明ꎬ贵阳和黔西香农－维纳多样性 对 ３ 株细菌均表现出一定的抑菌作用ꎬＭＩＣ 介于
￣１
指数 结 果 为 黔 西 ( Ｈ′ ＝ ２. １１２ ) > 贵 阳 ( Ｈ′ ＝ ６.２５ ~ １００ ｍｇｍＬ 之间ꎬ１ 株内生真菌 ＱＸ３Ｊ４￣１
Ｑ Ｇ
１.８０１)ꎬ辛普森指数结果为黔西( Ｄ ＝ ０.８４０) >贵 仅对大肠杆菌有抑菌作用ꎬ２ 株菌株液体发酵提取
Ｑ
阳(Ｄ ＝ ０.７７４)ꎬ索伦森相似性指数 Ｃｓ ＝ ０.９２３ꎮ 物对供试菌株未见明显抑菌效果ꎮ 菌株 ＱＸ４Ｇ６、
Ｇ Ｇ－Ｑ
２.２ 光枝勾儿茶内生真菌优势属的分离频率 ( ＩＦ) Ｇ３Ｆ４ 和 Ｄ２Ｇ２４ 对大肠杆菌抑菌效果较好ꎬＭＩＣ 均
￣１
和分离率(ＩＲ) 为 １２.５ ｍｇｍＬ ꎻＱＸ４Ｇ６、Ｇ２Ｓ１２ 和 Ｇ３Ｆ４ 对金黄
试验分离所得菌株优势属依次为叶点霉属、 色葡萄球菌抑菌效果较好ꎬＭＩＣ 均为 ６. ２５ ｍｇ
￣１
间座壳属、葡萄座腔菌属和刺盘孢属ꎬ分离率( ＩＲ) ｍＬ ꎻ 菌 株 ＱＸ４Ｇ６、 ＱＸ１Ｙ１￣１、 Ｇ３Ｆ４、 Ｄ２Ｇ２４ 和
分别为 ５.９０％(４６ / ７８０)、４.８７％(３８ / ７８０)、４.１０％ Ｇ２Ｓ１ 对沙门氏 菌 抑 菌 效 果 较 好ꎬＭＩＣ 均 为 １２. ５
(３２ / ７８０)和 ３.５９％(２８ / ７８０)ꎬ分离频率( ＩＦ) 分别 ｍｇｍＬ (表 ４)ꎮ
￣１
为 ２４. ０８％ ( ４６ / １９１)、１９. ８９％ ( ３８ / １９１)、１６. ７５％ ２０ 株内生真菌液体发酵提取物对 ３ 株供试细
￣１
(３２ / １９１)和 １４.６６％(２８ / １９１)ꎮ 从贵阳分离得到 菌的 ＭＢＣ 介于 ６.２５ ~ １００ ｍｇｍＬ 之间ꎬ１ 株内生
的优势属叶点霉属 ＩＲ 和 ＩＦ 最高ꎬ分别为 ９.４６％ 真菌 ＱＸ３Ｊ４￣１ 仅对大肠杆菌有杀菌作用ꎬ２ 株菌株
(４４ / ４６５)和 ３９.９４％(４４ / １１３)ꎬ其次为间座壳属ꎬ 液体发酵提取物对大肠杆菌、 金黄色葡萄球菌及沙