Page 132 - 《广西植物》2024年第11期

２ １ １ ６ 广 西 植 物 ４４ 卷
酶 ( ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅꎬ ＳＯＤ )、 过 氧 化 物 酶 １.３.４ 穿心莲根边缘细胞黏胶层厚度的测定 参
(ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅꎬＰＯＤ)、过氧化氢酶(ｃａｔａｌａｓｅꎬＣＡＴ)ꎬ以 照乔永旭(２０１１)的方法ꎮ 取 ５０ μＬ 的细胞悬液加
及 丙 二 醛 ( ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅꎬ ＭＤＡ) 含 量 和 根 系 入同等体积的印度墨水混匀染色 ５ ｍｉｎꎬ在普通光

活力ꎮ 学显微镜下拍照测量ꎮ 每个细胞测定 ４ 个不同位
１.３ 测定指标与方法 置(细胞两端以及中间到边缘的距离)ꎮ 每个处理
１.３.１ 穿心莲萌发指标测定 根长、苗高:直尺测 组测定 １０ 个细胞ꎬ取平均值ꎮ

量穿心莲幼苗根长和苗高ꎮ １.３.５ 穿心莲根尖生理指标检测 ＳＯＤ 活性采用
鲜重:分别收集各处理幼苗 ２０ 株ꎬ滤纸吸干 氮蓝四唑还原法测定ꎬＰＯＤ 活性采用愈创木酚法
幼苗 表 面 水 分ꎬ 用 分 析 天 平 称 量 幼 苗 鲜 重ꎬ 取 测定ꎬＣＡＴ 活性采用紫外吸收法测定ꎻＭＤＡ 含量

均值ꎮ 采用硫代巴比妥酸法测定ꎬ根系活力采用 ＴＴＣ 还
干重:分别收集各处理幼苗 ２０ 株ꎬ１０５ ℃ 杀青 原法测定(李合生ꎬ２０００)ꎮ
３０ ｍｉｎꎬ６５ ℃ 烘干至恒重ꎬ用分析天平称量幼苗干 １.３.６ 化 感 作 用 评 价 化 感 效 应 指 数 ( ｒｅｓｐｏｎｓｅ
重ꎬ取均值ꎮ ｉｎｄｅｘꎬＲＩ) 参考 Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎ 和 Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ(１９８８) 的
(１)发芽势 ＝ (３ ｄ 内发芽种子数 / 供试种子 方法:ＲＩ ＝ １－Ｃ / Ｔ( 当 Ｔ≥Ｃ 时) 或 ＲＩ ＝ Ｔ / Ｃ－１( 当
数) ×１００％ꎻ Ｔ<Ｃ 时)ꎬＣ 为对照值ꎬＴ 为处理值ꎮ 当 ＲＩ>０ 为促
(２)发芽率 ＝ ( ７ ｄ 内发芽种子数 / 供试种子 进作用ꎬＲＩ<０ 为抑制作用ꎬ绝对值的大小与化感作
数) ×１００％ꎻ 用强度一致ꎮ
(３)发芽指数( ＧＩ) ＝ ∑( Ｇｔ/ Ｄｔ)ꎮ Ｇｔ 为第 ｔ 天 １.４ 数据处理与分析
发芽种子数ꎬＤｔ 为对应 Ｇｔ 的发芽天数ꎮ 采用 Ｅｘｃｅｌ ２０１０ 处理试验数据ꎬＳＰＳＳ ２０.０ 进
(４)种子活力指数( ＶＩ) ＝ Ｓ×ＧＩꎮ 式中 Ｓ 为萌 行单 因 素 方 差 分 析ꎬ 利 用 Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ８. ０
发试验结束时种子胚根的长度(ｃｍ)ꎮ 作图ꎮ
１.３.２ 穿心莲根边缘细胞活性测定及根尖原位观
察 参考吴常 ( ２０２０) 的 方 法ꎬ切 取 ５０ 个 长 约 ５ ２ 结果与分析
ｍｍ 的穿心莲根尖ꎬ加入 ５００ μＬ 蒸馏水ꎬ涡旋振荡
２ ~ ３ ｍｉｎꎬ吸取细胞液后加入 １２５ μＬ 蒸馏水冲洗 ２ ２.１ 马铃薯根系分泌物对肉桂酸胁迫下穿心莲种
次ꎬ合并细胞液ꎮ 使用微量注射器抽打 ３ 次ꎬ使根 子萌发的影响
边缘细胞分开ꎮ ４ ℃ 下 ５００ ｒｍｉｎ 离心 ３ ｍｉｎꎬ弃 肉桂酸胁迫抑制了穿心莲种子的萌发ꎬ不同
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去部分上清液ꎬ即得分散均匀的根边缘细胞悬液ꎮ 浓度的马铃薯根系分泌物对其均有一定程度的
参考胡忠良等(２０１５) 的方法ꎬ取 ５０ μＬ 上述 缓解作用( 图 １) ꎮ 随着分泌物浓度的提升ꎬ穿心
细胞悬液ꎬ加入 ２０ μＬ ＡＯ￣ＥＢ 染液ꎬ混匀避光染色 莲种子的发芽势、发芽指数、活力指数、鲜重、干
１ ｍｉｎꎮ 吸取 １０ μＬ 混合液ꎬ加入血细胞计数板ꎬ在 重、根长等指标均显著提高( Ｐ<０.０５) ꎬ在分泌物
荧光显微镜下观察记录根边缘细胞的存活数和细 浓度为 ２５ ｍｇｍＬ 时达到最大值ꎬ而在 ５０、１００
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胞总数ꎬ并计算活率ꎮ 细胞活率 ＝ ( 活细胞数 / 细 ｍｇｍＬ 时其活力指数、鲜重、干重、根长等指标
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胞总数) × １００％ꎮ 每个处理重复 ３ 次ꎮ 另取 ５ 个 均降 低ꎬ 但 仍 然 显 著 高 于 单 肉 桂 酸 处 理 ( Ｐ <
根尖置于载玻片上ꎬ滴加适量 ＡＯ－ＥＢ 染液后立即 ０.０５) ꎮ 肉桂酸对穿心莲种子的各萌发指标均存

用荧光显微镜进行根尖原位观察拍照ꎮ 在化感抑制作用( ＲＩ< ０) ꎬ添加不同浓度的分泌
１.３.３ 穿心莲根边缘细胞凋亡率测定 参照马春 物均降低了肉桂酸对各萌发指标的化感指数( 表
红等(２０１１) 的方法ꎮ 取 ５０ μＬ 细胞悬液ꎬ加入同 １) ꎬ以 ２５ ｍｇｍＬ 的分泌物对肉桂酸化感作用
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等 体 积 的 Ｈｏｃｈｅｓｔ￣３３２５８ 染 液 后ꎬ 避 光 染 色 ５ 的影响最 强ꎮ 此 时ꎬ 发 芽 势、 发 芽 指 数、 活 力 指
ｍｉｎꎬ吸取 １０ μＬ 混合液ꎬ加入血细胞计数板ꎬ在 数、鲜 重、 干 重、 根 长 的 化 感 指 数 分 别 下 降 了
荧光显微镜下观察记录凋亡细胞数和细胞总数ꎬ ８８.２３％、９５. ６５％、５５.４２％、７４％、７４％、５５. ７０％ꎮ
并计算凋亡率ꎮ 细胞凋亡率 ＝ ( 凋 亡 细 胞 数 / 细 因此ꎬ 后 续 试 验 的 最 适 分 泌 物 浓 度 设 置 为 ２５
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胞总数) ×１００％ꎮ ｍｇｍＬ ꎮ