Page 168 - 《广西植物》2021年第6期

ϟ ԡ ϟ ᤃ 广জ 西জ 植জ 物 ࿗ϟ 卷
ϓॹԣ 方法 ᣏ 进行线性回归ᖔ得到回归方程ᤥ ɔ ᢉ ϟ঎ጢጢँ ᤃ ᣏ ͱ
԰
ϟ঎԰঎ϟ 总 ኏શዶ 的提取与 ዹ᧕શዶ 的合成জ኏શዶ ᡱʢᔀᡱ ԡ঎ԡᤃᤃ ԰ ྉቴ ᢉ ԡ঎ँँऐ ऐɯᤥ 将制备好的总皂苷样品
۪ࣼʢᔀ ۪᤟ᑕႿᡷ ᣽ᔽᡷ Џ 天根生化科技ྉ 北京ɯ 有限公司ᖔ 溶液按上述方法进行检测ᖔ所得数据按标准曲线
᧕۪࿗࿗ϟ૒ 试剂盒说明ᖔ 提 取 绞 股 蓝各组织的总 方程换算成总皂苷含量ᤥ
኏શዶᖔ使用 ᧕શᑕ༁ᔀ ሙ 去除 ኏શዶ 样品中的微量 ϟ঎԰঎ሕ঎԰ 皂苷单体的测定জ 参考史美荣等ྉ԰ԡϟጢɯ 的
᧕શዶᤥ 采用 ኏ᔀ׹ᔀʢᡷ ዶᔽʛ èᔽʢ༁ᡷ ୩ᡷʢᑕႿʛ ዹ᧕શዶ ୩ᢃႿᡷၤᔀ༁ᔽ༁ 高效液相色谱法测定皂苷单体ᤥ 绞股蓝皂苷单体
᣽ᔽᡷྉ ఋၤᔀʢቝᆍ èᔽ༁ၤᔀʢ ୩ዹᔽᔀႿᡷᔽ஦ᔽዹ ᧧Ⴟዹ঎ᖔ ᣽ϟᤃᤃ԰ɯᖔ 按照 ϟ 标准品ྉᤠँऐᠮɯ 用孔径为 ԡ঎԰԰ ဂቝ 的滤膜进行过
ဂ੫ 的总 ኏શዶ 量ᖔ进行等量反转录合成 ዹ᧕શዶᤥ 滤ᖔ 注入进样小瓶中ᤥ 使 用 安捷伦 ྉዶ੫ᔽ᤟ᔀႿᡷ
ϟ঎԰঎԰ 荧光定量 ۪ऊ኏ 分析জ 在 શऊା᧧ 数据库中搜索本 ఋᔀዹၤႿᆍ᤟ᆍ੫ᔽᔀ༁ɯ的高效液相色谱仪进样进行 ۪̀ᓂऊ 检
研究的绞股蓝各基因的序列ᖔ使用 ᡱʢᔽቝᔀʢ ᡱʢᔀቝᔽᔀʢ ᤃ঎ԡ 测ᖔ检测的条件如表 ԰ 所示ᤥ 根据已有的高效液相
软件设计基因的荧光定量 ۪ऊ኏ 引物序列如表 ϟᤥ 色谱条件测定峰面积ᖔ由已知的浓度和得出的峰面
积进行方程计算ᖔ以浓度 ᣏ 为横坐标ᖔ峰面积 ɔ 为
表 ϓই 本研究使用的引物信息
纵坐标绘标准曲线ᖔ得出直线回归方程如下ᤥ኏ᤦ ᧥
ఋᑕᤦ᤟ᔀ ϟজ ᧧Ⴟ஦ᆍʢቝᑕᡷᔽᆍႿ ᆍ஦ ᡱʢᔽቝᔀʢ ༁ᔀीࣼᔀႿዹᔀ༁ ᔽႿ ᡷၤᔽ༁ ༁ᡷࣼʛᢃ ϟ
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基因名 引物名称 引物序列ྉጢࣕ᥋ሕࣕɯ
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ԡ঎ँँँ ጢɯᤥ 将制备好的皂苷样品溶液按上述方法检
ᤩᡓϟऐ୒ʗቴટዛ ᤩᡓϟऐ୒ʗቴટዛ᥋ीèۼ ጢࣕ᥋ዶऊ᥈ዶఋ᥈ऊऊ᥈ዶऊऊዶ᥈᥈᥈ዶఋఋ᥋ሕࣕ
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表 ԣই 绞股蓝皂苷单体含量测定的 ̵ۗᒦࣷ 条件
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ቝᆍႿᆍቝᔀʢ༁ ᔽႿ ᤩᡥႥᅳ໧ᡙᓣቂቂᐹ ᡓᓣႥᡙᐹᡓ၊ᡥᤀᤀࣩቂ
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ᤩᡓ୒ጛ ᤩᡓ୒ጛ᥋ीèۼ ጢࣕ᥋᥈ዶऊఋఋዶዶऊ᥈᥈ዶ᥈ऊऊఋ᥈ዶऊ᥋ሕࣕ 色谱柱 Իᨃ኏ାዶᣮ ጶዹ᤟ᔽᡱ༁ᔀ
ᤩᡓ୒ጛ᥋ी኏ۼ ጢࣕ᥋ऊఋఋऊఋऊዶऊ᥈ऊዶఋऊऊఋऊఋ᥈᥋ሕࣕ ऊၤʢᆍቝᑕᡷᆍ੫ʢᑕᡱၤᔽዹ ዹᆍ᤟ࣼቝႿ ۪᤟ࣼ༁ ऊ ϟऐ
柱温 ऊᆍ᤟ࣼቝႿ ᡷᔀቝᡱᔀʢᑕᡷࣼʢᔀ ԰ጢ ቩ
流速 ჆ᔀ᤟ᆍዹᔽᡷᢃ ԡ঎ऐ ቝᓂኼቝᔽႿ ᥋ϟ
জজ 荧 光 定量反应体系为 ϟԡ ဂᓂᖔ 其中包括 ԰ ġ
流动相 ᥘᆍᤦᔽ᤟ᔀ ᡱၤᑕ༁ᔀ ዶྉ水ɯ ͱାྉ乙腈ɯ
୩ɟା኏ ۪ʢᔀቝᔽ଴ ጢ ဂᓂܦ上游引物 ԡ঎ጢ ဂᓂܦ下游引物 ԡ঎ጢ ዶྉۼᑕᡷᔀʢɯ ͱାྉዶዹᔀᡷᆍႿᔽᡷʢᔽ᤟ᔀɯ
ဂᓂ ྉ引物浓度为 ϟԡ ဂቝᆍ᤟ኼᓂ ᖔ反应体系中每条引 ԡቝᔽႿ ዶᨒ ା ᢉ ᤃጢᠮ ᨒ ሕጢᠮ
᥋ϟ
ԡጲ ԰ԡ ቝᔽႿ ዶ ᨒ ା ᢉ ᤃጢᠮ ጲ ᤃԡᠮ ᨒ ሕጢᠮ ጲ ࿗ԡᠮ
᥋ϟ
物终浓度均为 ԡ঎԰ ဂቝᆍ᤟ኼᓂ ɯܦዹ᧕શዶ 模板 ԰ဂᓂܦ
检测波长 ᧕ᔀᡷᔀዹᡷᔽᆍႿ औᑕ׹ᔀ᤟ᔀႿ੫ᡷၤ ԰ԡሕ Ⴟቝ
ʛʛ̀ ᨃ ԰ဂᓂᤥ ी۪ऊ኏ 反应在 ାᔽᆍ᥋኏ᑕʛ 公司的 ऊèᣮ
԰ ԰
进样量 ᧧ႿᢼᔀዹᡷᔽᆍႿ ׹ᆍ᤟ࣼቝᔀ ԰ԡ ဂᓂ
实时荧光定量 ۪ऊ኏ 仪中进行ᖔ按仪器使用说明书
进行操作ᖔी۪ऊ኏ 反应程序᧥ँጢ ቩ 预变性 ሕቝᔽႿଫँጢ
ϟ঎԰঎࿗ 数据处理分析জ 用 ጶ଴ዹᔀ᤟ ԰ԡԡᎮ 软件整理数
ቩ 变性 ϟԡ ༁ᖔጢᎮ ቩ 退火 ሕԡ ༁ᖔᎮ԰ ቩ 延伸 ϟԡ ༁ᖔ共 ࿗ԡ
据ᖔ处理组和对照组 之 间 的 差 异 显 著 性 分 析 用
个循 环ଫ 然后进行溶解曲线分析ᤥ 利用 ऊèᣮ
ቝᑕႿᑕ੫ᔀʢ ሕ঎ԡ 软件自动进行基线和 ऊी 值分析ᤥ 根 ୩۪୩୩ ԰ԡ঎ԡ 软件进行单因素 ዶ჆ᨃશዶ 检验ᤥ᥍表示
ͱσσऊी 差异显 著 ྉ ۗ ጐԡ঎ ԡጢɯᖔ ᥍᥍ 表示差异极显著 ྉ ۗ ጐ
据 ͐ ᢉ ԰ 计算基因的表达值ᤥ
ϟ঎԰঎ሕ 总皂苷与皂苷单体的测定 ԡ঎ԡϟɯᤥ
ϟ঎԰঎ሕ঎ϟ 总皂苷的测定জ 参考宋小妹等ྉϟँँऐɯ 的
方法ᖔ采用超声波提取法提取粗总皂苷ᖔ用色谱甲 ԰জ 结果与分析
醇溶解烘干的粗总皂苷ᖔ定容至 ϟԡ ቝᓂᖔ即制成总
皂苷样品溶液ଫ采用比色法测定总皂苷含量ᖔ以购 ԣॹϓ 乙烯对绞股蓝皂苷生物合成关键酶 Þۗ୒ܓ୒୒
置于中国药品生物制品鉴定所的绞股蓝总皂苷 和 ୒ጛ 基因表达的影响
ྉᤠँऐᠮɯ 为标准品ᖔ在波长 ጢጢԡ Ⴟቝ 处测定吸光 乙烯对绞股蓝根ܦ茎ܦ成熟叶和幼叶中的皂苷
度ᤥ 以吸光度ྉዛɯ 为纵坐标 ɔᖔ浓度ྉ ࣷɯ 为横坐标 生物合成关键酶 è۪୩ܦ୩୩ 和 ୩ጶ 基因表达的影响如