Page 49 - 《广西植物》2023年第1期
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１ 期 廖广凤等: 白花银背藤中的生物碱及其细胞毒活性研究 ４ ５
图 １ 化合物 １－９ 的结构式
Ｆｉｇ. １ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ １－９
油醚－乙酸乙酯(１０ ∶ ０ ~ １ ∶ １)梯度洗脱ꎬ分离得 血病 ＨＬ￣６０、肺癌 Ａ５４９、肝癌 ＳＭＭＣ￣７７２１、乳腺癌
到 ９ 个组分 Ｆｒ.１ ~ Ｆｒ.９ꎮ Ｆｒ.５ 经 Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０ 柱 ＭＣＦ￣７ 及结肠癌 ＳＷ４８０ 细胞调整浓度为 ３×１０ ~
４
￣１
５
色谱分 为 ３ 个 组 分 ( Ｆｒ. ５ － １ ~ Ｆｒ. ５ － ３)ꎮ 其 中ꎬ １.５×１０ 个ｍＬ 的细胞悬液ꎬ接种到 ９６ 孔板ꎬ每
Ｆｒ.５－１经甲醇重结晶得到化合物 ６( 白色针晶ꎬ７.８ 孔体积 １００ μＬꎬ培养 ２４ ｈ 后弃去旧培养液ꎬＰＢＳ 清
ｍｇ)ꎬＦｒ.５－２ 通过半制备 ＨＰＬＣ 色谱分离得到化合 洗ꎬ分组给药ꎬ每组 ３ 个复孔ꎬ空白组加入新的完
物 ５(１.５ ｍｇ)ꎮ Ｆｒ.６ 经中低压 ＯＤＳ 制备液相色谱 全培养液ꎬ实验组分别加入含待测样品的完全培
分离ꎬ用甲醇－水(１０％ ~ １００％) 梯度洗脱ꎬ划分为 养液每孔 ２００ μＬꎮ 化合物 １ － ９ 分别用 ＤＭＳＯ 溶
４ 个组分(Ｆｒ.６－１ ~ Ｆｒ.６－４)ꎮ 其中ꎬＦｒ.６－１、Ｆｒ.６－ 解ꎬ再用培养液稀释到相应浓度ꎬ单体化合物初次
３、Ｆｒ.６－４ 分别用半制备 ＨＰＬＣ 色谱分离ꎬ得到化 筛选终浓度为 ４０ μｍｏｌＬ ꎮ 根据初筛结果进行
￣１
合物 １(４.０ ｍｇ)、２(４.９ ｍｇ)、３(５.０ ｍｇ)和化合物 ９ 复筛ꎬ单体化合物终浓度分别为 ４０、８、１.６、０.３２、
(６.０ ｍｇ)ꎮ Ｆｒ.７ 经中低压 ＯＤＳ 制备液相色谱分 ０.０６４ μｍｏｌ Ｌ ꎬ 并 设 顺 铂 ( ＤＤＰ ) 和 紫 杉 醇
￣１
离ꎬ以甲醇－水(１０％ ~ １００％) 梯度洗脱ꎬ划分为 １２ (ｔａｘｏｌ)２ 个阳性对照组ꎮ 给药后放入培养箱中培
个组分(Ｆｒ.７－１ ~ Ｆｒ.７－１２)ꎮ 其中ꎬＦｒ.７－３、Ｆｒ.７－４ 养 ４８ ｈ 后ꎬ弃去贴壁细胞孔内的培养液ꎬ分别加入
分别用半制备 ＨＰＬＣ 色谱分离ꎬ得到化合物 ７(６.０ ２０ μＬ ＭＴＳ 溶液和 １００ μＬ 培养液ꎻ弃去悬浮细胞
ｍｇ)、８(１０.０ ｍｇ)ꎮ Ｆｒ.８ 经 Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０ 柱色谱 孔内培养上清液 １００ μＬꎬ再加入 ＭＴＳ 溶液 ２０ μＬꎮ
分为 ３ 个组分(Ｆｒ.８－１ ~ Ｆｒ.８－３)ꎮ 其中ꎬＦｒ.８－１ 经 设置加入 ＭＴＳ 溶液和培养液分别为 ２０、１００ μＬ 的
半制备 ＨＰＬＣ 色谱纯化得到化合物 ４(１.５ ｍｇ)ꎮ ３ 个空白复孔ꎬ放入培养箱中继续孵育 ２ ~ ４ ｈ 后测
１.３.２ 细 胞 毒 活 性 实 验 细 胞 毒 活 性 测 试 参 考 定光吸收值ꎮ 使用多功能酶标仪于 ４９２ ｎｍ 波长
Ｋａｕｎｄａ 等(２０２０)的方法ꎬ分别将对数期生长的白 处ꎬ读取并记录各孔光吸收值ꎮ 初筛数据经处理
