Page 97 - 《广西植物》2023年第4期

࿗ 期 杨 甲 甲 等 ᧥ 生物钟 ۪኏኏ 蛋白促进拟南芥幼苗中花青素的合成 ᤃ Ꭾ ँ

列克 隆 到 ᡱ᥈ዶ᧕ఋᎮ 载体ᖔ 构建质粒 ዶ᧕᥋ᥘɟାᎮጢܦ ዶ᧕᥋ఋఋऐ᥋શྉ第 ϟ 至第 ሕጢऐ 个氨基酸ɯ 和 ዶ᧕᥋ఋఋऐ᥋ऊ
ዶ᧕᥋ᥘɟାँԡܦዶ᧕᥋ᥘɟାϟϟሕܦዶ᧕᥋ᥘɟାϟϟ࿗ 和 ዶ᧕᥋ఋఋऐᖔ ྉ第 ሕጢँ 至第 ጢϟँ 个氨基酸ɯྉ ᣮᔽᔀ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ ԰ԡϟᤃଫ
并构建分段质粒 ዶ᧕᥋ᥘɟାᎮጢ᥋શྉ第 ϟ 至第 ϟ԰԰ 个氨 ऊၤᔀႿ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ ԰ԡ԰ԡɯᤥ 构建酵母双杂交实验所需克
基酸ɯܦዶ᧕᥋ᥘɟାᎮጢ᥋ऊྉ第 ϟ԰ሕ 至第 ԰࿗ँ 个氨基酸ɯܦ 隆的引物如表 ԰ 所示ᤥ

表 ԣই 各种表达载体构建的引物
ఋᑕᤦ᤟ᔀ ԰জ ۪ʢᔽቝᔀʢ༁ ࣼ༁ᔀʛ ஦ᆍʢ ੫ᔀႿᔀʢᑕᡷᔽႿ੫ ׹ᑕʢᔽᆍࣼ༁ ዹ᤟ᆍႿᔀ༁
克隆名称 正向引物 反向引物
ऊ᤟ᆍႿᔀ Ⴟᑕቝᔀ èᆍʢऔᑕʢʛ ᡱʢᔽቝᔀʢ ኏ᔀ׹ᔀʢ༁ᔀ ᡱʢᔽቝᔀʢ
ା᧕᥋۪኏኏ጢ ዶఋዶऊዶఋዶఋ᥈ዶఋ᥈ዶऊఋዶ᥈ఋዶ᥈ऊ᥈ዶ᥈᥈ዶዶ᥈ఋዶ᥈ఋఋ᥈ዶዶ ዶఋዶ᥈ዶዶఋఋऊऊఋዶఋ᥈᥈ዶ᥈ऊఋఋ᥈ఋ᥈ఋ᥈᥈ዶఋఋ᥈᥈ዶ
ϟͱϟऐԡ
ା᧕᥋۪኏኏ጢ ዶఋዶऊዶఋዶఋ᥈ዶఋ᥈ዶऊఋዶ᥈ఋዶ᥈ऊ᥈ዶ᥈᥈ዶዶ᥈ఋዶ᥈ఋఋ᥈ዶዶ ዶఋዶ᥈ዶዶఋఋऊዶዶዶ᥈ऊఋዶఋऊዶ᥈᥈ዶ᥈ऊዶዶ᥈ఋ᥈ዶዶ᥈ఋఋ
ϟᎮ԰ͱጢጢऐ
ା᧕᥋۪኏኏ጢ ዶఋዶऊዶఋዶఋ᥈ऊዶዶዶऊఋఋऊዶऊఋఋ᥈ऊఋऊऊఋ᥈ዶఋዶ᥈ऊ ዶఋዶ᥈ዶዶఋఋऊఋ᥈᥈ዶ᥈ऊఋఋ᥈ఋ᥈ఋ᥈᥈ዶఋఋ᥈᥈ዶऊ
ጢԡ԰ͱጢጢऐ
ା᧕᥋۪኏኏ጢ ዶఋዶऊዶఋዶఋ᥈ዶዶዶዶఋఋऊዶ᥈ऊዶዶఋऊఋऊఋఋऊዶዶऊ᥈ዶ ዶఋዶ᥈ዶዶఋఋऊఋ᥈᥈ዶ᥈ऊఋఋ᥈ఋ᥈ఋ᥈᥈ዶఋఋ᥈᥈ዶऊ
۪኏኏ጢ᥋ዹɟè۪ ዶఋዶఋऊఋዶ᥈ዶዶఋ᥈ዶऊఋዶ᥈ఋዶ᥈ऊ ዶఋዶ᥈᥈ዶఋऊऊఋ᥈᥈ዶ᥈ऊఋఋ᥈ఋ᥈ఋ᥈᥈ዶఋఋ᥈᥈
۪኏኏ጢ ϟͱϟऐԡ ᥋ዹɟè۪ ዶఋዶఋऊఋዶ᥈ዶዶఋ᥈ዶऊఋዶ᥈ఋዶ᥈ऊ ዶఋዶ᥈᥈ዶఋऊऊዶዶዶ᥈ऊఋዶఋऊዶ᥈᥈ዶ᥈ऊዶዶ᥈
ା᧕᥋۪኏኏Ꭾ ዶఋዶऊዶఋዶఋ᥈ዶఋ᥈ዶዶఋ᥈ऊఋዶዶఋ᥈ዶ᥈᥈ዶ᥈᥈᥈ ዶఋዶ᥈ዶዶఋఋऊఋఋዶ᥈ऊఋዶఋऊऊఋऊዶዶఋ᥈ఋఋఋఋఋఋዶఋ᥈ఋऊ
ା᧕᥋۪኏኏ँ ዶఋዶऊዶఋዶఋ᥈ዶఋ᥈᥈᥈᥈᥈ዶ᥈ዶఋఋ᥈ఋ᥈᥈ఋఋఋఋዶዶ ዶఋዶ᥈ዶዶఋఋऊఋऊዶఋ᥈ዶఋఋఋఋ᥈ఋዶ᥈ዶऊ᥈ऊ᥈ఋऊఋ᥈
ዶ᧕᥋ᥘɟାᎮጢ ዶఋዶऊዶఋዶఋ᥈ዶఋ᥈᥈ዶ᥈᥈᥈ఋఋऊ᥈ఋऊऊዶዶዶ᥈᥈ ዶఋዶ᥈ዶዶఋఋऊऊఋዶዶఋऊዶዶዶఋఋఋऊዶऊዶ᥈ఋऊఋऊఋऊऊዶఋऊ
ዶ᧕᥋ᥘɟାᎮጢ᥋શ ዶఋዶऊዶఋዶఋ᥈ዶఋ᥈᥈ዶ᥈᥈᥈ఋఋऊ᥈ఋऊऊዶዶዶ᥈᥈ ዶఋዶ᥈ዶዶఋఋऊऊఋఋఋఋఋऊዶఋऊఋఋఋዶఋऊఋఋዶऊዶዶऊዶऊ᥈᥈
ዶ᧕᥋ᥘɟାᎮጢ᥋ऊ ዶఋዶऊዶఋዶఋ᥈ዶ᥈ዶ᥈ዶऊዶఋఋዶऊ᥈ऊऊऊዶఋఋऊऊఋዶऊ ዶఋዶ᥈ዶዶఋఋऊऊఋዶዶఋऊዶዶዶఋఋఋऊዶऊዶ᥈ఋऊఋऊఋऊऊዶఋऊ
ᥘɟାᎮጢ᥋Ⴟɟè۪ ዶఋዶ᥈᥈ዶఋऊऊዶఋ᥈᥈ዶ᥈᥈᥈ఋఋऊ᥈ఋऊऊዶዶዶ᥈᥈ ዶఋዶఋऊఋዶ᥈ዶዶఋऊዶዶዶఋఋఋऊዶऊዶ᥈ఋऊఋऊఋऊऊዶఋऊ᥈
ዶ᧕᥋ᥘɟାँԡ ዶఋዶऊዶఋዶఋ᥈ዶఋ᥈᥈ዶ᥈᥈᥈ఋఋऊ᥈ఋऊऊዶዶዶ᥈᥈ ዶఋዶ᥈ዶዶఋఋऊऊఋዶዶఋऊዶዶ᥈ఋఋऊዶዶऊዶ᥈ఋऊఋऊఋऊऊዶఋऊ
ᥘɟାँԡ᥋Ⴟɟè۪ ዶఋዶ᥈᥈ዶఋऊऊዶఋ᥈᥈ዶ᥈᥈᥈ఋఋऊ᥈ఋऊऊዶዶዶ᥈᥈ ዶఋዶఋऊఋዶ᥈ዶዶఋऊዶዶ᥈ఋఋऊዶዶऊዶ᥈ఋऊఋऊఋऊऊዶఋऊዶ
ዶ᧕᥋ᥘɟାϟϟሕ ዶఋዶऊዶఋዶఋ᥈ዶఋ᥈᥈᥈ऊ᥈ዶዶఋऊዶऊऊऊዶዶዶ᥈ ዶఋዶ᥈ዶዶఋఋऊऊఋዶዶఋఋऊዶ᥈ఋఋऊఋዶዶዶ᥈ఋऊఋऊఋఋऊዶఋऊዶዶዶ
ᥘɟାϟϟሕ᥋Ⴟɟè۪ ዶఋዶ᥈᥈ዶఋऊऊዶఋ᥈᥈᥈ऊ᥈ዶዶఋऊዶऊऊऊዶዶዶ᥈ ዶఋዶఋऊఋዶ᥈ዶዶఋఋऊዶ᥈ఋఋऊఋዶዶዶ᥈ఋऊఋऊఋఋऊዶఋऊዶዶዶऊ
ዶ᧕᥋ᥘɟାϟϟ࿗ ዶఋዶऊዶఋዶఋ᥈ዶఋ᥈᥈ዶ᥈᥈᥈ఋఋऊ᥈ఋऊऊዶዶዶ᥈᥈ ዶఋዶ᥈ዶዶఋఋऊऊఋዶዶዶዶዶዶఋዶఋऊ᥈ዶऊఋఋఋఋఋ᥈᥈᥈ऊ
ዶ᧕᥋ఋఋऐ ዶఋዶ᥈ዶዶఋఋऊዶఋ᥈᥈ዶఋ᥈ዶዶఋऊዶዶ᥈ఋዶఋఋዶఋఋऊऊ᥈᥈ ዶఋዶ᥈᥈ዶఋऊऊऊఋዶఋዶ᥈ዶఋఋዶ᥈ఋዶఋऊዶఋ᥈ఋዶఋఋዶఋ᥈ዶऊఋఋ᥈᥈ఋ᥈
ዶ᧕᥋ఋఋऐ᥋શ ዶఋዶ᥈ዶዶఋఋऊዶఋ᥈᥈ዶఋ᥈ዶዶఋऊዶዶ᥈ఋዶఋఋዶఋఋऊऊ᥈᥈ ዶఋዶ᥈᥈ዶఋऊऊऊ᥈᥈ఋዶ᥈ऊऊఋऊఋఋዶఋऊఋఋఋዶ᥈ఋ᥈ఋఋ᥈ఋ
ዶ᧕᥋ఋఋऐ᥋ऊ ዶఋዶ᥈ዶዶఋఋऊऊ᥈᥈᥈ዶዶ᥈ዶఋऊఋ᥈ዶ᥈ऊऊዶऊ᥈ ዶఋዶ᥈᥈ዶఋऊऊऊఋዶఋዶ᥈ዶఋఋዶ᥈ఋዶఋऊዶఋ᥈ఋዶఋఋዶఋ᥈ዶऊఋఋ᥈᥈ఋ᥈
ఋఋऐ᥋Ⴟɟè۪ ዶఋዶ᥈᥈ዶఋऊऊዶఋ᥈᥈ዶఋ᥈ዶዶఋऊዶዶ᥈ఋዶఋఋዶఋఋऊऊ᥈᥈ ዶఋዶ᥈᥈ዶఋऊऊఋዶ᥈ዶఋఋዶ᥈ఋዶఋऊዶఋ᥈ఋዶఋఋዶఋ᥈ዶऊఋఋ᥈᥈ఋ᥈᥈
᥈В୩᥋Ⴟɟè۪ ዶఋዶ᥈᥈ዶఋऊऊዶఋ᥈᥈ఋऊऊ᥈ఋऊऊఋ᥈ఋዶ᥈ዶዶዶऊऊ ዶఋዶఋऊఋዶ᥈ዶఋఋ᥈ఋఋఋ᥈ऊऊఋऊऊऊఋ᥈ऊఋ᥈ऊ
᥈В୩᥋ዹɟè۪ ዶఋዶఋऊఋዶ᥈ዶዶఋ᥈᥈ఋऊऊ᥈ఋऊऊఋ᥈ఋዶ᥈ዶዶዶऊऊ ዶఋዶ᥈᥈ዶఋऊऊఋఋ᥈ఋఋఋ᥈ऊऊఋऊऊऊఋ᥈ऊఋ᥈ऊ

ϓॹጇ 双分子荧光互补实验཯ଧᔠÞࣷ ዛ໧໧ᐹᡥ໧ɤ 显微 镜 ྉ ᨃ᤟ᢃቝᡱࣼ༁ᖔ ఋᆍҴᢃᆍᖔ ȮᑕᡱᑕႿ ɯ 观察 ɟè۪ 和

ϟͱϟऐԡ ܦ᥈В୩ 的编码序列融合于 ᧕ዶ۪᧧ 荧光ྉɟᑕႿ੫ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ ԰ԡ԰ϟɯᤥ 构建 ାᔽèऊ 实验所
将 ۪኏኏ጢܦ۪኏኏ጢ
ᡱè᥈ऊ᥋ዹɟè۪ྉ᣽ᔽቝ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ ԰ԡԡऐɯ中ᖔ构建质粒 ۪኏኏ጢ᥋ 需克隆的引物如表 ԰ 所示ᤥ
ϟͱϟऐԡ
ዹɟè۪ܦ۪኏኏ጢ ᥋ዹɟè۪ 和 ᥈В୩᥋ዹɟè۪ᤥ 将 ᥘɟାᎮጢܦ ϓॹᣤ 基因 ᧇᦵ
ᥘɟାँԡܦᥘɟାϟϟሕܦఋఋऐ 和 ᥈В୩ 的编码序列融合于 所 涉 及的拟南芥基因的 ᧧᧕᧥ ۗቴቴጢܦ
ᡱè᥈ऊ᥋Ⴟɟè۪ ྉ ᣽ᔽቝ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ ԰ԡԡऐ ɯ 中ᖔ 构建质粒 ዶఋጢ᥈԰࿗࿗ᎮԡଫۗቴቴᎮܦዶఋጢ᥈ԡ԰ऐϟԡଫۗቴቴँܦዶఋ԰᥈࿗ᤃᎮँԡଫ

ᥘɟାᎮጢ᥋Ⴟɟè۪ܦ ᥘɟାँԡ᥋Ⴟɟè۪ܦ ᥘɟାϟϟሕ᥋Ⴟɟè۪ܦ ఋఋऐ᥋ ᤹ɔଧᎮጢܦ ዶఋϟ᥈ጢᤃᤃጢԡଫ ᤹ɔଧँԡܦ ዶఋϟ᥈ᤃᤃሕँԡଫ
Ⴟɟè۪ 和 ᥈В୩᥋Ⴟɟè۪ᤥ 将构建好的质粒转化到农杆 ᤹ɔଧϟϟሕܦ ዶఋϟ᥈ᤃᤃሕᎮԡଫ ᤹ɔଧϟϟ࿗ܦ ዶఋϟ᥈ᤃᤃሕऐԡଫ ௴௴ऐܦ
菌ྉ 菌株为 ᥈჆ሕϟԡϟɯ 中ᖔ 取不同菌 液 ྉᨃ᧕ 值为 ዶఋ࿗᥈ԡँऐ԰ԡଫ ᦵÞቴܦ ዶఋጢ᥈࿗԰ऐԡԡଫ ᒦᦵ᧣ᣏܦ ዶఋ࿗᥈԰԰ऐऐԡଫ
ϟ঎ԡɯ按 ϟᨒ ϟ 体积比混合均匀ᖔ注射到生长状态良 ІÞሕᤩ௴ܦዶఋጢ᥈ጢ࿗ԡᤃԡᤥ 以 上 基因序列信息均可在
好的本氏烟草ྉ ટᔠዞᅳᡙᔠᐹႥᐹ ᤇᓣႥᡙ၊ᐹቂᔠᐹႥᐹɯ 叶片中ᖔ在 ఋၤᔀ ዶʢᑕᤦᔽʛᆍᡱ༁ᔽ༁ ᧧Ⴟ஦ᆍʢቝᑕᡷᔽᆍႿ ኏ᔀ༁ᆍࣼʢዹᔀྉఋዶ᧧኏ɯ网站中
避光ܦ湿润的环境中放置 ࿗ऐ ၤ 后ᖔ使用激光共聚焦 获取ᤥ