Page 162 - 《广西植物》2023年第6期
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１ １ ４ ８ 广 西 植 物 ４３ 卷
１.３ 方法 国家标准化管理委员会ꎬ２０２１) 中的苯酚－浓硫酸
１.３.１ 六堡茶毛茶及其水浸出物的制备 参考黄 比色法进行茶多糖含量测定ꎮ
敏周等(２０２０)的六堡茶毛茶制作工艺ꎬ将鲜叶先 １.３.６ 体外抗氧化、降血糖活性的测定
在萎凋棚下晾晒 ４ ｈꎬ再经滚筒杀青、揉捻后以提 １.３.６.１ ＤＰＰＨ 自由基清除能力 参考李明杨等
香机 ７０ ℃ 烘至茶样足够干ꎬ即得六堡茶毛茶ꎮ 将 (２０２２)的方法ꎬ并稍作改进ꎮ 将毛茶水浸出物稀
毛茶进一步粉碎后密封置于－２０ ℃ 保存ꎬ备用ꎮ 释成合适的系列浓度的待测样品ꎮ 分别精密量取
按 ＧＢ / Ｔ ８３０５—２０１３(中华人民共和国国家标 １.０ ｍＬ 待测样品与 ２.０ ｍＬ ９５％乙醇、１.０ ｍＬ ０.１２
准化管理委员会ꎬ２０１３)的方法对毛茶水浸出物进 ｍｇｍＬ ＤＰＰＨ 溶液混合摇匀ꎬ于室温下避光静
￣１
行提 取ꎬ 所 得 提 取 液 分 装 后 置 于 － ２０ ℃ 保 存ꎬ 置反应 ２０ ｍｉｎꎬ作为样品组ꎮ 以 ４.０ ｍＬ ９５％乙醇
待用ꎮ 为调零组ꎬ以相同体积的 ９５％乙醇代替 ＤＰＰＨ 溶
１.３.２ 六堡茶毛茶水浸出物含量的测定 按 ＧＢ / Ｔ 液为样品本底组ꎬ空白组为 ３.０ ｍＬ ９５％乙醇和 １.０
８３０５—２０１３(中华人民共和国国家标准化管理委 ｍＬ ＤＰＰＨ 溶液ꎬ在 ５１７ ｎｍ 波长下测定吸光度ꎮ 以
员会ꎬ２０１３)的方法对六堡茶毛茶水浸出物含量进 ＶＣ 为阳性对照物( 浓度梯度 为 ５、１０、１５、２０、２５
行测定ꎬ 茶 叶 中 水 浸 出 物 含 量 以 干 态 质 量 分 数 μｇｍＬ )ꎬ清除率按式(３)计算ꎮ
￣１
(％)表示ꎮ 清除率(％)＝ [１－(Ｔ－Ｔ ) / Ｃ] ×１００ (３)
０
１.３.３ 六堡茶毛茶水浸出物浸膏中总多酚含量的 式中:Ｔ 表示样品组的吸光度ꎻ Ｔ 表示样品本
０
测定 参考 ＧＢ / Ｔ ８３１３—２０１８(中华人民共和国国 底组的吸光度ꎻ Ｃ 表示空白组的吸光度ꎮ
家标准化管理委员会ꎬ２０１８)中的福林－酚法ꎬ并稍 毛茶水浸出物对 ＤＰＰＨ 自由基的清除能力以
作改进ꎮ 取毛茶水浸出物提取液 ０.２ ｍＬ 进行测 半数清除浓度 ＩＣ 表示ꎬＩＣ 值越小说明清除自由
５０ ５０
定ꎬ加水补足至 ６ ｍＬꎬ随后分别加入 ＦＣ 试剂 ０.５ 基的能力越强(吕平和潘思轶ꎬ２０２０)ꎮ
ｍＬꎬ混匀ꎬ１０ ｍｉｎ 后加 入 １. ５ ｍＬ ２０％ Ｎａ ＣＯ 溶 １. ３. ６. ２ 氧 自 由 基 吸 收 能 力 ( ｏｘｙｇｅｎ ｒａｄｉｃａｌ
２ ３
液ꎬ充分混合后加水定容至 ２５ ｍＬꎬ３０ ℃ 避光反应 ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ ｃａｐａｃｉｔｙꎬＯＲＡＣ) 参照 Ｗｅｎ 等(２０１６)
３０ ｍｉｎꎮ 以水为空白对照ꎬ在 ７６０ ｎｍ 波长下测定 的方法测定水浸出物样品的 ＯＲＡＣ 值ꎬ并表示为
吸光度 Ａꎮ 以没食子酸为标准品绘制标准曲线ꎬ水 每克水 浸 出 物 浸 膏 ( 干 重) 的 Ｔｒｏｌｏｘ 当 量 ( μｍｏｌ
浸出物浸膏中总多酚含量以干态质量分数(％) 表 ＴＥｇ )ꎮ ＯＲＡＣ 值越大说明毛茶水浸出物的氧
￣１
示ꎬ按式(１)计算ꎮ 自由基吸收能力越强ꎬ其抗氧化活性越高ꎮ
总多酚含量(％) ＝ 水浸出物提取液中总多酚 １.３. ６. ３ α ￣葡 萄 糖 苷 酶 抑 制 活 性 按 Ｐａｎ 等
(ｇ) / 水浸出物浸膏质量(ｇ) ×１００ (１) (２０２０)的方法ꎬ测定毛茶水浸出物对 α ￣葡萄糖苷
１.３.４ 六堡茶毛茶水浸出物浸膏中总黄酮含量的 酶抑制活性ꎮ 抑制 ５０％的酶活所需要的样品质量
测定 参考罗磊等(２０１６) 的硝酸铝比色法ꎬ并稍 浓度用 ＩＣ 值表示( μｇｍＬ )ꎬＩＣ 值越小说明对
￣１
５０
５０
作改进ꎮ 取毛茶水浸出物提取液 １.０ ｍＬ 进行测 α ￣葡萄糖苷酶的抑制能力越强ꎮ
定ꎬ用 ５０％乙醇补足至 １０.０ ｍＬꎮ 加入 ５％的亚硝 １.３.６.４ α ￣淀粉酶抑制活性 参考柳梅等(２０１７)
酸钠溶液 １.０ ｍＬꎬ混匀ꎬ１０ ｍｉｎ 后再加入 １７.６％的 的 ＤＮＳ 法ꎬ并稍作改进ꎮ 将不同浓度的样品溶液
￣１
九水硝酸铝溶液 １.０ ｍＬꎬ摇匀ꎬ放置 １０ ｍｉｎꎬ加入 (１.０ ｍＬ)和 １ ＵｍＬ α ￣淀粉酶(１.０ ｍＬ)混合ꎬ在
４％的氢氧化钠溶液 １０.０ ｍＬꎬ用 ５０％乙醇定容至 ３７ ℃ 下孵育 １０ ｍｉｎꎬ随后加入 １.０ ｍＬ １％可溶性
刻度ꎬ摇匀ꎬ放置 ３０ ｍｉｎꎬ同时做试剂空白ꎬ于 ５１０ 淀粉溶液( 已煮沸糊化)ꎬ在 ３７ ℃ 下反应 １５ ｍｉｎꎬ
ｎｍ 波长处测定吸光度 Ａꎮ 以芦丁为标准品绘制标 取出ꎬ经高温灭酶后分别加入 １.５ ｍＬ ＤＮＳꎬ继续煮
准曲线ꎬ水浸出物浸膏中总黄酮含量以干态质量 沸 ８ ｍｉｎꎮ 将混合体系定容至 ２５ ｍＬꎬ以水代替 α ￣
分数(％)表示ꎬ按式(２)计算ꎮ 淀粉酶溶液、１％可溶性淀粉溶液为校零管ꎬ于 ５４０
总黄酮含量(％) ＝ 水浸出物提取液中总黄酮 ｎｍ 波长处测定其吸光度 Ａ ꎬ以无样品的反应体系
１
质量(ｇ) / 水浸出物浸膏质量(ｇ) ×１００ (２) 为空白对照ꎬ测定其吸光度 Ａ ꎬ阿卡波糖为阳性对
０
１.３.５ 六堡茶毛茶水浸出物浸膏中茶多糖含量的 照ꎻ试剂背景以水校零ꎬ以等体积水取代 ＤＮＳꎬ测
测定 参照 ＧＢ / Ｔ ４０６３２—２０２１( 中华人民共和国 定其吸光度 Ａ ꎮ 按式(４)计算抑制率ꎮ
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