Page 58 - 《广西植物》2020年第2期

２ 期 蒋素华等: 白及蔗糖合成酶基因的克隆及表达分析 １ ９ ５

蛋白质序列具有较高的亲水性ꎬ其中第 ５６３ 位氨 ２.４ ＳｕＳｙ 蛋白质二级结构和三级结构预测
基酸的亲水性最强(２.４７８)ꎬ第 ４１２ 位氨基酸的疏 采用 ＥｘＰＡＳｙ 网站上的 ＧＯＲ 进行蛋白质二级
水性最强( －２.７６７)ꎮ 整体来看ꎬ亲水性氨基酸均 结构预测ꎬ结果表明ꎬ白及 ＳｕＳｙ 由 ３９.３５％的 α￣螺
匀分布在整个肽链中ꎬ且多于疏水性氨基酸ꎬ因此 旋 ( ａｌｐｈａ ｈｅｌｉｘ )、 １４. ９３％ 的 延 伸 链 ( ｅｘｔｅｎｄｅｄ
整个多肽链表现为亲水性ꎬ可认为该酶是亲水性 ｓｔｒａｎｄ)、４５.７３％ 的无规则卷曲( ｒａｎｄｏｍ ｃｏｉｌ) 组成
蛋白(图 ３)ꎮ (图 ４)ꎮ

图 ３ ＳｕＳｙ 蛋白的亲疏水性分析
图 ２ ＳｕＳｙ 基因 ＰＣＲ 扩增
Ｆｉｇ. ３ Ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ￣ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ ｐｒｏｐｅｒｔｙ
Ｆｉｇ. ２ ＰＣＲ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＳｕＳｙ ｇｅｎｅ
ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ＳｕＳｙ ｐｒｏｔｅｉｎ

图 ４ ＳｕＳｙ 蛋白二级结构预测
Ｆｉｇ. ４ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｅｃｏｎｄ ｓｔｕｃｔｕｒｅ ｆｏｒ ＳｕＳｙ ｐｒｏｔｅｉｎ

利用 ＳＷＩＳＳ￣ＭＯＤＥＬ 软件分析 ＳｕＳｙ 氨基酸三级结
构ꎬ以 (３ｓ２７. １. Ａ) 为模板进行建模ꎬ 该模板以 Ｘ￣
ＲＡＹ ２.９０ Å 方法产生ꎬ结果显示ꎬ白及 ＳｕＳｙ 与拟南
芥 ＳｕＳｙ 蛋白三级结构一致性为 ７５.２％(图 ５)ꎮ
２.５ ＳｕＳｙ 氨基酸序列同源性分析
利用 ＢｌａｓｔＰ 对 ＳｕＳｙ 蛋白进行序列同源比对分
析ꎬ发现白及 ＳｕＳｙ 在氨基酸水平上与兰科植物的
ＳｕＳｙ 蛋白具高度相似性ꎬ白及 ＳｕＳｙ 的氨基酸序列
与铁 皮 石 斛、 文 心 兰、 蝴 蝶 兰 的 相 似 性 分 别 为
９７％、９２％、９５％(图 ６)ꎮ 进一步利用 ＭＥＧＡ６.０ 软 图 ５ ＳｕＳｙ 蛋白的三级结构预测
件ꎬ采用相邻连接法构建系统进化树ꎬ根据 ＳｕＳｙ 氨 Ｆｉｇ. ５ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｔｈｉｒｄ ｓｔｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ＳｕＳｙ ｐｒｏｔｅｉｎ