Page 159 - 《广西植物》2022年第3期

３ 期 招礼军等: 不同生境下濒危植物膝柄木幼树的生态适应性 ５ ０ ３

村ꎬ地理位置为 １０８°０７′ Ｅ、２１°３２′ Ｎꎬ属湿热带季 依据考马斯亮蓝 Ｇ￣２５０ 在稀酸溶液中遇蛋白质变
风气候区ꎬ海拔 ２０ ~ ４０ ｍꎮ ８ 月份测定的试验地林 色的原理ꎬ通过在波长为 ５２０ ｎｍ 处的吸光度值来
缘、林窗和林下光合有效辐射分别为(１ ７４３±１３８) 计算可溶性蛋白含量(李合生等ꎬ２０００)ꎮ
μｍｏｌ ｍ ｓ 、 ( １ ３６３ ± ９６) μｍｏｌ ｍ ｓ 和 游离脯氨酸含量使用茚三酮比色法测定ꎬ在
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(１７６±２８) μｍｏｌｍ ｓ ꎮ 试验前测定林缘、林 待测植物叶片中加入 ３％的磺基水杨酸溶液提取
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窗、林下三种生境土壤 ｐＨ 值为 ４.１ ~ ４.５ꎬ有机质含 脯氨酸ꎬ再在脯氨酸提取液中加入冰醋酸和酸性
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量为 ２０.９６ ~ ２２.３５ ｇｋｇ ꎬ全氮为 １.２１ ~ １.４６ ｇ 印三酮ꎬ沸水浴加热ꎬ变色后加入甲苯离心后在分
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ｋｇ ꎬ有效磷为 ４.８ ~ ５.２ ｍｇｋｇ ꎬ速效钾为３１.８８ ~ 光光度计波长为 ５２０ ｎｍ 处测定吸光度值( 李合生
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４３.８３ ｍｇｋｇ ꎬ差异不显著ꎮ 等ꎬ２０００)ꎮ
１.２ 材料与试验设计 １.３.２.３ 质膜透性和丙二醛( ｍａｌｏｎａｌｄｅｈｙｄｅꎬＭＤＡ)
试验材料采自广西东兴市东部江平镇巫头村 含量 测 定 ＭＤＡ 含 量 采 用 硫 代 巴 比 妥 酸 法
２００９ 年人工培育、长势良好的回种到原出生地树林 (ｔｈｉｏｂａｒｂｉｔｕｒｉｃ ａｃｉｄꎬＴＢＡ) 测定ꎬ将 ０.５ ｇ 的植物样
的林缘、林窗、林下三种生境中(通过采集种子进行 品中 加 入 ５％ 的 三 氯 乙 酸 ( ｔｒｉｃｈｌｏｒｏａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄꎬ
人工培育) 的膝柄木幼树ꎮ 并于 ２０１５ 年 １２ 月至 ＴＣＡ)研磨ꎬ将匀浆离心后取上清液加入 ０.６７％的
２０１６ 年 １０ 月期间选取自然条件下生长良好、植株
ＴＢＡꎬ煮沸后再次离心ꎬ测定上 清 液 在 ４５０、５３２、
基本一致的林缘、林窗和林下三种不同生境人工种
６００ ｎｍ 处的吸光值(李合生等ꎬ２０００)ꎮ
植的膝柄木幼树ꎬ对其生长指标(地径、株高、叶面 质膜透性采用电导仪法测定ꎬ将 ２ ｇ 大小切割
积)进行测定ꎬ每种生境下选择幼树各 ３ 株ꎬ此外在 一致的叶片放入真空干燥器内ꎬ加入 ２０ ｍＬ 的去
此期间的 ２、４、６、８、１０、１２ 月中旬选取不同生境下膝 离子水ꎬ抽气后缓缓放入空气ꎬ待叶片下沉后ꎬ取
柄木幼树东南西北四个方向上树冠中部枝条下 ４~６
出烧杯静置 ２０ ｍｉｎ 后用玻璃棒搅拌均匀ꎬ用电导
片长势良好的成熟叶片ꎬ放入冰盒带回实验室ꎬ进
仪测其初电导值( Ｓ )ꎬ测完后将烧杯放入沸水浴
行生理指标和光合指标的测定ꎮ 在试验期间及时 １
中ꎬ用自来水冷却至室温后测其煮沸电导值( Ｓ )ꎬ
２
对幼树进行除草防治病虫害ꎮ
相对电导率(Ｌ)＝ Ｓ / Ｓ (李合生等ꎬ２０００)ꎮ
１.３ 测定项目与方法 １ ２
１.３.２.４ 光合色素测定 光合色素采用丙酮－乙醇
１.３.１ 苗木生长指标的测定 在试验开始前ꎬ在每
混合液提取法测定(李合生等ꎬ２０００)ꎬ依据叶绿素
株幼树的根茎处用红色布条绑住做好标记ꎬ用钢
提取液可吸收可见光谱的原理ꎬ将待测的叶片剪
卷尺(精确度为 ０.１ｃｍ) 测量膝柄木幼树根部作记
碎ꎬ加入少量的石英砂和碳酸钙粉以及 ９５％乙醇
号到顶芽的高度ꎮ 用游标卡尺( 精确到 ０.０１ ｍｍ)
后研磨至组织变白ꎬ用 ９５％的乙醇将滤纸上的色
精确测量每株苗木根茎处的直径ꎮ 同时ꎬ记录下
素洗入容量瓶中定容ꎬ根据 ６６５、６４９、４７０ ｎｍ 波长
每株树的叶片数量ꎬ使用激光叶面积仪测量叶面
处测得的吸光度值计算光合色素浓度ꎬ公式如下:
积ꎮ 根据前后两次测得的数值差计算苗木的地
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叶绿素 ａ 浓度:Ｃ (ｍｇＬ )＝ １３.９５ Ａ －６.８８
径、叶面积和株高净增长量ꎮ ａ ６６３
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Ａ ꎻ叶绿 素 ｂ 浓 度: Ｃ ( ｍｇ Ｌ ) ＝ ２４. ９６ Ａ －
１.３.２ 叶片生理生化指标的测定 ６４５ ｂ ６４５
１.３.２. １ 抗 氧 化 酶 活 性 测 定 超 氧 化 物 歧 化 酶 ７.３２ Ａ ６３３ ꎻ
(ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅꎬ ＳＯＤ) 活 性 采 用 氮 蓝 四 唑 叶绿素 ａ / ｂ 浓度:Ｃ ａ/ ｂ 浓度 ＝ Ｃ / Ｃ ꎻ类胡萝卜
ａ
ｂ
(ｎｉｔｒｏｂｌｕｅ ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍꎬＮＢＴ) 光化还原法测定ꎬ依据 素 浓 度: Ｃ ｘｃ ＝ ( １ ０００ × Ａ ４７０ － ２. ０５ Ｃ － １１４. ８
ａ
ＮＢＴ 在光下可被还原ꎬ被还原后的核黄素在氧化 Ｃ ) / ２４５ꎻ
ｂ
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２－ ２－ 相应色素的含量(ｍｇｇ )＝ (Ｃ ×Ｖ×ｄ) / ｍꎮ
物质的存在下氧化产生 Ｏ ꎬＮＢＴ 被氧化后的 Ｏ ｉ
还原成蓝色甲腙ꎬ通过测定甲腙在 ５６０ ｎｍ 处的吸 式中:Ｃ 为相应色素的浓度ꎻＶ 表示提取液体
ｉ
光度来测量 ＳＯＤ 活性(李合生等ꎬ２０００)ꎮ 积ꎻｄ 表示稀释倍数ꎻｍ 表示样品鲜重ꎮ
过氧化氢酶( ｃａｔａｌａｓｅꎬＣＡＴ) 活性采用紫外光 １.３.３ 叶片光合生理指标测定 选择天气晴朗的
吸收法测定ꎬ在单位时间内测定波长 ２４０ ｎｍ 处吸 上午(９:００—１１:００)ꎬ采用 Ｌｉ￣６４００ 光合测定仪对
植株叶片净光合速率 Ｐ 、胞间 ＣＯ 浓度 Ｃ 、蒸腾速
光度的差值(Ａｅｂｉꎬ １９８４)ꎮ ｎ ２ ｉ
１.３.２.２ 可溶性蛋白和游离脯氨酸含量测定 可溶 率 Ｔ 进行测定ꎮ 并计算水分利用效率( ｗａｔｅｒ ｕｓｅ
ｒ
性蛋白含量采用考马斯亮蓝 Ｇ￣２５０ 染色法测定ꎬ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙꎬＷＵＥ)＝ Ｐ / Ｔ ꎮ
ｒ
ｎ