Page 114 - 《广西植物》2020年第1期

１ １ ０ 广 西 植 物 ４０ 卷
取出后用无菌水漂洗 ４ ~ ５ 次ꎻ之后放置到无菌不 部附着的培养基ꎬ在 １ ０００ 倍的“ 枯萎根腐特效
锈钢盘中ꎬ剪掉两端伤口ꎬ保留 ２ ~ ４ ｃｍ 的带腋芽 灵—噁霉嘧啶申嗪” 溶液中消毒 ２ ~ ３ ｍｉｎꎻ用
茎段ꎬ接种到初代诱导培养基中ꎮ 培养 １４ ｄ 后ꎬ统 该药剂喷洒消毒移栽基质( 园土、泥碳土和椰糠)
计消毒污染率和存活率( 表 １)ꎮ 污染率 ＝ 污染的 后ꎬ装于营养杯中ꎬ栽种上青钱柳生根苗ꎬ在荫蔽
外植体数 / 总外植体数×１００％ꎻ存活率 ＝ 存活的无 度 ７０％的大棚中培养ꎬ注意保持环境及基质湿度ꎬ
菌外 植 体 数 / ( 总 外 植 体 数 － 污 染 的 外 植 体 每周喷上述药剂预防病害ꎮ ４０ ｄ 后统计移栽成活
数) ×１００％ꎮ 率(表 ７)ꎮ 根据不同移栽基质、移栽季节的移栽成
１.２ 培养基制备及筛选 活率ꎬ确定适合青钱柳组培苗移栽的基质和时间ꎮ
初代培养基:以 ＭＳ 和 ＷＰＭ 为基本培养基ꎻ通 １.５ 数据统计
过初 步 的 预 实 验ꎬ 按 １０ ∶ １ 的 比 例ꎬ 添 加 ６￣ＢＡ 外植体消毒处理与初代培养实验每个处理 ６０
￣１
(１.０、２.０、４.０、８.０ ｍｇ∙Ｌ ) 和 ＩＢＡ(０.１、０.２、０.４、 瓶ꎬ重复 ３ 次ꎻ继代与生根培养实验每个处理 １０
￣１ ￣１ 瓶ꎬ重复 ３ 次ꎮ 所有数据用 ＳＰＳＳ 统计软件进行统
０.８ ｍｇ∙Ｌ )ꎬ附加蔗糖 ３０ ｇ∙Ｌ 、琼脂 ３.３ ｇ∙
Ｌ ꎬｐＨ ５.８(表 ２)ꎮ 通过观测统计不同培养基芽诱 计分析ꎮ
￣１
导率及芽苗生长情况ꎬ筛选出最佳初代诱导培养
基配方ꎮ 芽诱导率 ＝ ( 萌芽的外植体数 / 消毒成功 ２ 结果与分析

的外植体数) ×１００％ꎮ
继代增殖培养基:以 ＭＳ 为基本培养基ꎬ添加不 ２.１ 外植体采集及消毒

同浓度和组合的植物生长调节剂ꎬ附加蔗糖 ３０ ｇ∙ 比较不同采样时间、外植体部位和消毒时间
Ｌ 、琼脂 ３.３ ｇ∙Ｌ ꎬｐＨ ５.８ꎻ所用的植物生长调节剂 对青钱铆消毒成功率和存活率的影响( 表 １)ꎮ 结
￣１
￣１
包括 ６￣ＢＡ、ＫＴ、ＺＴ、ＩＢＡ、ＮＡＡ、ＩＡＡ 和 ＴＩＢＡ(三碘苯 果发现:(１) 在 ８ 月—１０ 月份采样ꎬ不论是顶芽、
钾酸)(表 ３ꎬ表 ４)ꎮ 筛选增殖系数高、继代芽苗健 未木质化茎段或轻微木质化茎段ꎬ也不论消毒时

壮、效果稳定的继代增殖和壮苗培养基配方ꎮ 间长短ꎬ污染率均较高ꎬ为 ６７.６％ꎻ且所有的外植
生根培养基:以 １ / ２ＭＳ 和 １ / ２ＷＰＭ 为基本培 体在后续的培养过程中全部褐化死亡ꎮ (２) 在 ４
养基ꎬ添 加 不 同 种 类、 浓 度 和 组 合 的 ＩＢＡ、 ＮＡＡ、 月—６ 月份采样ꎬ顶芽及未木质化茎段为外植体ꎬ
ＩＡＡ、ＤＡ￣６(己酸二乙氨基乙醇酯ꎬ又名胺鲜脂) 和 消毒后 ２ ~ ３ ｄ 内全部褐化死亡ꎮ 而轻微木质化茎
￣１
５￣ＮＧＳ(５￣硝基愈创木酚钠)ꎻ附加蔗糖 ２０ ｇ∙Ｌ 、 段为外植体ꎬ消毒 ５ ~ ７ ｍｉｎꎬ污染率 ４５.９％ꎬ存活率
琼脂 ３.３ ｇ∙Ｌ ꎬｐＨ ５.８( 表 ５ 和表 ６)ꎮ 筛选合适 高达 ８８.７％ꎻ轻微木质化茎段消毒 ８ ~ １０ ｍｉｎꎬ污染
￣１
的生根培养基配方ꎮ 率 ４３.９％ꎬ褐化死亡率增多ꎬ存活率下降至 ６５.３％ꎮ
上述每次实验每个处理 １０ ~ ６０ 瓶ꎮ 培养基配 统计结果显示ꎬ５ ~ ７ ｍｉｎ 和 ８ ~ １０ ｍｉｎ 的消毒处理ꎬ
制分装后ꎬ于 １２５ ℃ 灭菌 ２５ ｍｉｎꎬ冷却待用ꎮ 污染率差异不明显ꎬ但存活率差异较大ꎮ 综上所
１.３ 接种和培养 述ꎬ青钱铆外植体最佳的采集时间为 ４ 月—６ 月ꎻ
初代接种:为防交叉感染ꎬ每瓶接种 １ 个外植 最佳外植体部位为轻微木质化茎段ꎻ最佳消毒方
体ꎮ 继代接种:当芽苗长到 ３ ~ ５ ｃｍ 时ꎬ将再生芽 法为 ０.１％ ＨｇＣｌ 浸泡 ５ ~ ７ ｍｉｎꎮ
２
分成单芽ꎬ剪掉叶片后切成含 １ 个腋芽节段ꎬ接种 ２.２ 初代培养
于继代培养基上ꎬ每瓶 ８ ~ １０ 个接种点ꎬ培养时间 将经表面消毒的青钱柳轻微木质化茎段接种
３０ ~ ４０ ｄꎮ 生根接种:选择高度 ４.５ ｃｍ 以上、植株 于不同初代诱导培养基上( 表 ２)ꎬ培养 ３ 周后发
健壮的继代芽苗ꎬ从基部剪下ꎬ整株接入生根培养 现ꎬ在以 ＭＳ 和 ＷＰＭ 为无机盐的培养基上均能生
基中ꎬ每瓶接种 ８ ~ １０ 株ꎬ培养时间 ３０ ~ ４０ ｄꎮ 培 长ꎬ但以 ＭＳ 为无机盐的培养基的芽诱导率和芽苗

养条件:培养温度为(２８±３) ℃ ꎬ光照时间为 １０ ~ 高度均优于 ＷＰＭꎮ 培养基中的 ６￣ＢＡ 和 ＩＢＡ 在低
￣１
￣１
￣１ ￣２ ￣１ 浓度(１.０ ~ ２.０ ｍｇ∙Ｌ ＋０.１ ~ ０.２ ｍｇ∙Ｌ ) 时芽苗
１２ ｈｄ ꎬ光照强度为 ３０ ~ ４０ μｍｏｌｍ ｓ ꎮ
１.４ 生根苗炼苗移栽 生长较快ꎻ在高浓度(８.０ ｍｇ∙Ｌ ＋ ０.８ ｍｇ∙Ｌ )
￣１
￣１
当青钱柳组培苗长出 ２ ~ ５ 条根、根长 ２.０ ｃｍ 时ꎬ腋芽萌发和芽苗生长均显著受到抑制ꎮ 总体
以上时ꎬ将生根瓶苗开盖炼苗 ３ ~ ５ ｄꎬ洗净植株根 上看ꎬ 青钱柳在初代培养阶段耐受的植物生长调