Page 122 - 《广西植物》2021年第2期

԰ 期 徐康等᧥ 速生湿地松良种胚性愈伤组织诱导与增殖 ԰ ऐ ጢ
ϓॹԣ 方法 导率最高的为 ԰ 号ᖔ达到 ԰ጢ঎ሕᎮᠮᖔ其次是 ጢ 号和
ϟ঎԰঎ϟ 外植体消毒与接种জ 从冰箱中取出球果ᖔ剥 ϟԡ 号ᖔ诱导率最低的为 ϟᎮ 号家系ᖔ胚性愈伤组织
出种子ᖔ选择饱满ܦ发育良好种子去除种翅ᤥ 在超 诱导率仅为 ϟ঎࿗ሕᠮᤥ 方差分析结果显示ᖔ԰ 号基因
净工作台内ᖔ先用无菌水冲洗 ሕ 次ᖔ转入 Ꭾጢᠮ酒精 型胚性愈伤组织组织的诱导率显著高于其他基因
中浸泡 ሕԡ ༁ᖔ用无菌水冲洗 ሕ 次后再转入 ԡ঎ϟᠮ升 型ᖔ而 ϟ 号基因型的非胚性愈伤组织诱导率显著

汞中消毒 Ꭾጲऐ ቝᔽႿᖔ然后用无菌水清洗 ሕጲጢ 次ᖔ最 高于其他基因型ᖔ说明不同基因型胚性愈伤组织
后用无菌滤纸吸干表面水分ᖔ备用ᤥ 诱导与非胚性愈伤组织诱导无相关性ᤥ
取出消毒好的湿地松种子于无菌培养皿中ᖔ ԣॹԣ 采集时间ྉ 合子胚发育时期ɯ 对胚性愈伤组织
用无菌解剖刀和镊子去除种壳和种皮后置于诱导 诱导的影响

培养基上ᖔ每皿接种 ϟԡ 粒ᖔ接种后用封口膜封口ᖔ 从 ϟԡ 个湿地松优良家系中挑选诱导效果较好
置于培养箱中暗培养ᤥ 的 ϟԡ 号家系开展不同采集时间ྉᤃ 月至 ऐ 月ɯ对胚
ϟ঎԰঎԰ 胚性愈伤组织诱导জ 开展不同家系ܦ不同基 性愈伤组织诱导的影响ᖔ结果见表 ԰ᤥ 从表 ԰ 可以

本培养基ܦ不同取样时间ܦ不同植物生长调节剂组 看出ᖔ胚性愈伤组织诱导率随采集时间呈现先升
合及浓度ྉ԰ᖔ࿗᥋᧕ܦᤃ᥋ାዶ 和 ᣽ఋɯ 等因素对湿地松胚 后降的变化趋势ᖔᎮ 月 ԰ϟ 号采集的球果胚性愈伤
性愈伤组织诱导影响的研究ᖔ诱导培养基中添加 组织和非胚性愈伤组织诱导率均最高ᖔ分别达到
᥋ϟ
ᓂ᥋谷氨酰 胺 ሕԡԡ ቝ੫ኼ ᓂ ܦ水解酪 蛋 白 ጢԡԡ ቝ੫ ኼ ϟϟ঎԰ँᠮ和 ࿗ሕ঎ጢጢᠮᖔ其次是 Ꭾ 月 ϟ࿗ 号和 Ꭾ 月 Ꭾ 号ᖔ
ᓂ ܦ蔗糖 ሕԡ ੫ኼᓂ ܦ卡拉胶 Ꭾ੫ኼᓂ ଫ每种处理设置 胚性愈伤组织诱导率分别为 ऐ঎԰԰ᠮ和 ࿗঎ጢጢᠮᖔ而 ᤃ
᥋ϟ
᥋ϟ
᥋ϟ
ሕ 个重复ᖔྉ԰ሕ ō ϟɯ ቩ 暗培养ᤥ 接种后定期观测 月 ԰࿗ 号ܦᎮ 月 ϟ 号和 ऐ 月 ϟϟ 号则未诱导出胚性愈
种子变化ᖔ并于 ࿗ጲऐ 周后统计愈伤组织和胚性愈 伤组织ᤥ 方差分析结果显示ᖔ未成熟合子胚的采
伤组织的个数ᖔ计算诱导率ᤥ 集时间对胚性愈伤组织和非胚性愈伤组织诱导率
ϟ঎԰঎ሕ 胚性愈伤组织增殖জ 选择生长状态一致的 有显著影响ᖔᎮ 月 ϟ࿗ 号和 ԰ϟ 号采集球果的胚性愈
胚性愈伤组织置于不同植物生长调节剂浓度组合 伤组织诱导率显著高于其他 ᤃ 个时期ᖔ尤其是以 Ꭾ
的增殖培养基上ᖔ᧕ऊ኏ 为基本培养基ᖔ添加麦芽糖 月 ԰ϟ 号为最佳采样时期ᤥ

᥋ϟ ᥋ϟ 在 Ꭾ 月 ϟ࿗ 日和 Ꭾ 月 ԰ϟ 日采集的球果中随机
ሕԡ ੫ኼᓂ ܦ卡拉胶 Ꭾ੫ኼᓂ ܦᓂ᥋谷氨酰胺 ሕԡԡ ቝ੫ኼ
᥋ϟ ᥋ϟ 取出 ሕጲጢ 个球果ᖔ先从球果不同部位取出种子ᖔ然
ᓂ ܦ水解酪蛋白 ጢԡԡ ቝ੫ ኼ ᓂ ᤥ 培养温度 ྉ԰ሕ ō
ϟɯቩ ᖔ湿度 ᤃԡᠮ ጲ ᤃጢᠮᖔϟጢ ʛ 后观测愈伤组织生长 后用解剖刀剥去种壳和胚乳ᖔ得到合子胚ᖔ体视显
状态ᤥ 微镜下观察ྉ图 ϟɯᖔ发现 Ꭾ 月 ϟ࿗ 号种子中约有 ԰ᣰ
ϓॹᇺ 数据统计分析 ሕ 处于裂生多胚阶段ྉ 图 ϟ᧥ዶᖔ多胚明显ᖔ胚体透
ྉ胚性ɯ 愈伤组织诱导率 ྉᠮɯ ᢉ 诱导出 ྉ 胚 明ɯᖔ即合子胚发育的第֒阶段ᖔϟ ᣰ ሕ 处于湿地松合
性ɯ愈伤组织的未成熟合子胚数 ᣰ 接种的未成熟合 子胚发育的第ᎏ阶段ྉ 图 ϟ᧥ାᖔ胚头清晰ᖔ渐变为
子胚数 ġ ϟԡԡᖔ采用 ୩۪୩୩ 软件对数据进行统计分 白色不透明ɯᖔ而 Ꭾ 月 ԰ϟ 号采集的种子发育时期

析ᖔ᧕ࣼႿዹᑕႿ 法进行多重比较ᤥ 胚性愈伤组织增殖 约有 ԰ᣰ ሕ 处于湿地松合子胚发育的第ᎏ阶段ᖔϟ ᣰ ሕ
培养时生长状态用ᥥ շɼ表示程度ᤥ 种子处于合子胚发育的第᤻阶段ྉ 图 ϟ᧥ऊᖔ胚头乳
白色ᖔ不透明ᖔ开始发育为圆筒状ɯᤥ 本研究最佳
԰জ 结果与分析 采集时期虽然与其他文献报道有差异ᖔ但球果中
大多种子合子胚发育阶段处于第֒阶段至第᤻阶
ԣॹϓ 不同基因型对胚性愈伤组织诱导的影响 段ᖔ与张彩云等ྉ԰ԡϟᤃɯ研究结果一致ᤥ
湿地松 ϟԡ 个速生优良基因型的胚性愈伤组织 ԣॹᇺ 不同基本培养基对胚性愈伤组织诱导的影响
诱导效果见表 ϟᤥ 从表 ϟ 可以看出ᖔ不同基因型诱 保持植物生长调节剂配比和浓度不变ᖔ外植
导胚性愈伤组织存在明显差异ᖔϟԡ 个基因型中诱 体在 ᥘ୩ܦۼ۪ᥘܦ᧕ऊ኏ 和 ାጢ 四种不同基本培养诱