Page 93 - 《广西植物》2021年第2期
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ጢ ᤃ 广জ 西জ 植জ 物 ࿗ϟ 卷
᤹ ᥘᑕʢҴᔀʢ ϟԡԡጲ ጢ ԡԡԡ ᤦᡱ 标准分子量参照物ᖔ下同ଫ 样品编号为 ϟͱ࿗ԡᤥ
᤹ᥘᑕʢҴᔀʢ ϟԡԡͱጢ ԡԡԡ ᤦᡱ ቝᆍᔀዹࣼᑕʢ ቝᑕʢҴᔀʢᖔ ᡷၤᔀ ༁ᑕቝᔀ ᤦᔀᆍऔଫ ୩ᑕቝᡱᔀ Ⴟࣼቝᤦᔀʢ༁ ᑕʢᔀ ϟͱ࿗ԡ
图 ϟজ ԡ 个叶子花品种 ᧕શዶ 电泳凝胶图
èᔽ੫ ϟজ ᧕શዶ ੫ᔀ ᔀᔀዹᡷʢᆍᡱၤᆍʢᔀ༁ᔽ༁ ቝᑕᡱ ᆍ ԡ ଧᅳࣩᐹᔠႥצᔠᤀᤀᓣᐹ ዹࣼᡷᔽᑕʢ༁
本实验利用引物 Вାऊऐϟጢ 扩增 ᧕શዶ 模板ᖔ扩增产
物ྉ图 ɯ表明᧥模板浓度在 ԡԡϟ ጲ ጢԡ Ⴟ੫ኼ ဂᓂ 范
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围内均能扩增出条带ᖔ但在 ԡԡϟ Ⴟ੫ኼ ဂᓂ ܦԡԡጢ
Ⴟ੫ኼ ဂᓂ ܦϟԡ Ⴟ੫ኼ ဂᓂ ܦጢԡ Ⴟ੫ኼဂᓂ 浓度下扩增的
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效果较差ᖔԡϟ ጲ Ⴟ੫ኼဂᓂ 浓度范围内差异不明
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显ᤥ 经多次重复试验ᖔ在 ԡጢ Ⴟ੫ኼဂᓂ 浓度时条带
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较清晰ܦ稳定ᤥ
引物浓度对 ۪ऊ 反应的影响জ 引物浓度在
ԡϟ ጲ ԡ ဂቝᆍኼᓂ 范围内均能扩增出条带ᖔ但在
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ԡϟ ဂቝᆍኼᓂ ܦԡ ဂቝᆍኼᓂ 和 ԡ ဂቝᆍኼᓂ 浓度
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下扩 增的条带较少ܦ 亮度低ᖔ 浓度在 ԡ ጢ ጲ ϟ ԡ
ဂቝᆍኼᓂ 时扩增效果较好ᖔ经反复试验ᖔ最终确定
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后续试验所用引物浓度为 ԡጢ ဂቝᆍኼᓂ ᖔ如图 ሕ
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所示ᤥ ᧕શዶ 浓度为 ԡԡϟܦԡԡጢܦԡϟܦԡጢܦԡጢܦܦϟԡܦጢԡ Ⴟ੫ኼဂᓂ ᤥ
᧕શዶዹᆍႿዹᔀႿᡷʢᑕᡷᔽᆍႿ༁ ᑕʢᔀ ԡԡϟᖔ ԡԡጢᖔ ԡϟᖔ ԡጢᖔ ԡጢᖔ ᖔ ϟԡᖔ ጢԡ
ሕ 退火温度对 ۪ऊ 反应的影响জ 本研究在最
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Ⴟ੫ኼဂᓂ ᖔ ʢᔀ༁ᡱᔀዹᡷᔽᔀᢃ
佳反应体系基础上对筛选出的 ϟϟ 个引物进行退
图 জ 模板 ᧕શዶ 浓度对 ᧧୩୩᥋۪ऊ 反应的影响
火试验ᖔ确定了每个引物的最佳退火温度ᖔ引物
èᔽ੫ জ ጶᔀዹᡷ༁ ᆍ ᡷᔀቝᡱᑕᡷᔀ ᧕શዶ ዹᆍႿዹᔀႿᡷʢᑕᡷᔽᆍႿ
Вାऊऐϟሕܦ Вାऊऐϟ࿗ܦ Вାऊऐϟጢܦ Вାऊऐሕܦ Вାऊऐ࿗ܦ ᆍႿ ᧧୩୩᥋۪ऊ ʢᔀᑕዹᡷᔽᆍႿ
Вାऊऐሕጢܦ Вାऊऐ࿗ԡܦ Вାऊऐ࿗ϟܦ Вାऊऐ࿗ሕܦ Вାऊऐ࿗࿗ 和
ВାऊऐᎮᤃ 的最佳退火温度分别为 ጢሕܦጢጢँܦጢ࿗ሕܦ 目标片段的能力也随之下降ᖔ因此ᖔ适宜的循环次
ጢ࿗ሕܦጢሕᤃܦጢᤃܦጢᤃܦጢϟँܦጢ࿗࿗ܦጢ࿗ܦጢԡ ቩ ᤥ 部分 数对于扩增效果至关重要ᤥ
引物 筛 选 退火温度电泳图如图 ࿗ܦ 图 ጢ 和图 ᤃ 不同循环次数下的 ᧧୩୩᥋۪ऊ 扩增结果如图 Ꭾ
所示ᤥ 所示ᖔ模板在 ԡ ጲ ᤃ 个循环时均未扩增出条带ᖔ
࿗ 循环次数对 ۪ऊ 反应的影响জ 增加循环数 ँ ጲ ࿗ϟ 个循环时均能扩增出条带ᖔ但在 ሕ 个循环
在一定程度上能够提高产物量ᖔ但反应时间过长 时可获得明亮清晰的条带ᖔ效果最好ᖔ如果再增加
会使非特异扩增产物增加ᖔ而且会受到各反应成 循环次数ᖔ条带变化不大ᖔ但从节约时间和成本考
分的用量限制ᖔ如᧥随着酶的扩增能力下降ᖔ合成 虑ᖔ以 ሕ 个循环为宜ᤥ
