Page 90 - 《广西植物》2021年第2期

԰ 期 孙利娜等᧥ 基于 ᧧୩୩኏ 分子标记的叶子花亲缘关系分析和指纹图谱构建 ԰ ጢ ሕ
度多态性ྉ ʢᔀ༁ᡷʢᔽዹᡷᔽᆍႿ ஦ʢᑕ੫ቝᔀႿᡷ ᤟ᔀႿ੫ᡷၤ ᡱᆍ᤟ᢃቝᆍʢᡱၤᔽ༁ቝᖔ ᧕શዶ 扩增的重要因素如模板 ᧕શዶ 浓度ྉ模板 ᧕શዶ
኏èᓂ۪ɯᖔ易操作ᖔ所需 ᧕શዶ 少ᖔ稳定性强ᖔ重复性 为橙红品种ྉ ଧᅳࣩ੖ᐹᔠႥצᔠᤀᤀᓣᐹ ໧ᡓᓣዞᡙᐹᤇᔠᤀᔠ໧ ጸ ዶࣼʢᑕᡷࣼ༁ᆥɯ 和

好ᖔ成本低且安全性高 ྉ 谭华 强ᖔ԰ԡϟ࿗ɯᤥ 目前ᖔ 所用引物浓度设置梯度ᖔ模板 ᧕શዶ 设 ࿗ԡԡܦ԰ԡԡܦ
᥋ϟ
᧧୩୩኏ 标记已广泛应用到亲缘关系分析ྉ 李国帅ᖔ ጢԡܦ԰ԡܦϟԡܦጢܦԡ঎԰ Ⴟ੫ኼဂᓂ 共 Ꭾ 个浓度ᖔ引物设 ࿗ԡܦ
᥋ϟ
԰ԡϟ࿗ɯܦ 遗传多样性 分 析 ྉ 王琳ᖔ԰ԡϟጢଫ 梁颖ᖔ ԰ԡܦϟጢܦϟԡܦ࿗ܦ԰ ᡱቝᆍ᤟ኼဂᓂ 共 ᤃ 个浓度ᖔ利用初筛
԰ԡϟऐɯܦ指纹图谱构建ྉ 王璐静ᖔ԰ԡϟᤃɯܦ品种鉴别 获得的扩增效果较好的引物 Вାऊऐϟጢ 进行最优条
ྉዶ᤟ᔽᖔ ԰ԡϟጢଫ 孙利娜等ᖔ ԰ԡϟᎮᤦଫ ȮᔀʛʢझᔀᢼዹझᢃҴ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ 件的筛选ᖔ以期获得最佳反应体系ᤥ
԰ԡϟऐɯܦ纯度鉴定ྉ管洁等ᖔ԰ԡϟሕɯܦ遗传稳定性分析 ۪ऊ኏ 扩增反应在深圳珠海黑马公 司 生 产 的
ྉ኏ᔀझᑕ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ԰ԡϟऐɯ 等领域ᤥ 本研究以 ϟሕϟ 个叶子 ̀ᔀᥘᑕँᤃԡԡ 基因扩增仪上进行ᖔ۪ऊ኏ 最初扩增程
花品种为研究对象ᖔ利用 ᧧୩୩኏ 标记分析它们的遗 序᧥ँ࿗ ቩ 预变性 ጢቝᔽႿଫँ࿗ቩ 变性 ሕԡ ༁ᖔጢ԰ ቩ 退火
传多样性ᖔ确定它们的亲缘关系ᖔ并进行品种鉴定 ሕԡ ༁ᖔᎮ԰ ቩ 延伸 ԰ቝᔽႿᖔሕऐ 个循环后 ࿗ቩ 保存ᤥ 在
和指纹图谱构建ᖔ从而为叶子花种质资源保存ܦ知 此基础上ᖔ对筛选出的 ϟϟ 个引物设置退火温度试
识产权保护以及品种鉴定提供了可靠技术和有效 验ܦ对循环数进行梯度设置ྉ԰ԡ 个循环ܦ԰ሕ 个循

手段ᤥ 环ܦ԰ᤃ 个循环ܦ԰ँ 个循环ܦሕ԰ 个循环ܦሕጢ 个循环ܦ
ሕऐ 个循环ܦ࿗԰ 个循环ɯᤥ
ϟজ 材料与方法 ۪ऊ኏ 产物使用 ϟ঎ጢᠮ 琼脂糖胶检测ᖔ᥈ᆍ᤟ʛ׹ᔽᔀऔ
᥋ϟ
染色ᖔ在电压不超过 ጢ჆ኼዹቝ 的电场强度下ᖔϟ ġ
ϓॹϓ 材料 ఋዶጶ 缓冲液中电泳 ँԡ ቝᔽႿᖔȮ୩᥋ϟԡᎮጢ 凝胶成像系统
ϟ঎ϟ঎ϟ 植物材料জ 参试的 ϟሕϟ 个叶子花品种见表 上观察成像ᤥ
ϟᖔ其中 ϟऐ 个品种ྉ序号 ϟͱϟऐɯ 保存于广西壮族自 ϟ঎԰঎ሕ ᧧୩୩኏᥋۪ऊ኏ 反应体系验证জ 以供试的其中任
治区林业科学研究院园林花卉所ᖔϟϟሕ 个品种ྉ 序 意 ϟऐ 个叶子花品种的 ᧕શዶ 为模版ᖔ用筛选出的多
号 ϟँͱϟሕϟɯ采自中国热带农业科学院热带作物品 态性好的 ᧧୩୩኏ 引物在最佳反应体系及扩增程序
质资源研究所ᤥ 从生长健壮ܦ无病虫害的植株上 下进行 ۪ऊ኏ 扩增ᖔ检验反应体系的稳定性ᤥ

采集幼嫩叶片ᖔ迅速提取 ᧕શዶᖔ冷冻于ͱऐԡ ቩ 冰箱 ϟ঎԰঎࿗ 叶子花种质资源 ᧧୩୩኏ 扩增数据处理与分析
备用ᤥ জ 对扩增产物进行人工读带ᖔ以片段大小为 ጢ ԡԡԡ
ϟ঎ϟ঎԰ 引物的合成与筛选জ 引物序列来自加拿大 ᤦᡱ 的 ᥘᑕʢҴᔀʢ 为标准ᖔ统计重复性好ܦ清晰明亮的
哥伦比亚大学公布的 ϟԡԡ 个 ᧧୩୩኏ 引物ᖔ由苏州金 条带ᖔ有条带出现的位点记为 ᥥϟɼᖔ无条带出现或
唯智生物科技有限公司合成ᖔ从中筛选出多态性 模糊不清的位点记为ᥥԡɼᤥ 将读取的条带信息转
高ᖔ稳定性强ᖔ重复性好的引物用于叶子花品种的 化为 ԡܦϟ 数据矩阵ᖔ利用 ۪ᆍᡱ᥈ᔀႿᔀሕ԰ 软件对供试

亲缘关系分析和指纹图谱构建ᤥ 材 料 的多态性位点百分率 ྉ ᡱᔀʢዹᔀႿᡷᑕ੫ᔀ ᆍ஦
ϓॹԣ 方法 ᡱᆍ᤟ᢃቝᆍʢᡱၤᔽዹ ᤟ᆍዹᔽᖔ ۗۗᒦ ɯܦ 观测等位基因数

ϟ঎԰঎ϟ 叶子花基因组 ᧕શዶ 提取与检测জ 采用快捷 ྉᆍᤦ༁ᔀʢ׹ᑕᡷᔽᆍႿ ᆍ஦ ᑕ᤟᤟ᔀ᤟ᔀ Ⴟࣼቝᤦᔀʢᖔ ટᐹɯܦ有效等位基因
型植物基因组 ᧕શዶ 提取试剂盒ྉ 北京艾德莱生物 数ྉႿࣼቝᤦᔀʢ ᆍ஦ ᔀ஦஦ᔀዹᡷᔽ׹ᔀ ᑕ᤟᤟ᔀ᤟ᔀ༁ᖔ ટᓣɯܦશᔀᔽᆥ༁ 基因多样
科技有限公司ɯ 提取幼嫩叶片的 ᧕શዶᖔ用 ϟ঎԰ᠮ琼 性指数ྉ ੫ᔀႿᔀ ʛᔽ׹ᔀʢ༁ᔽᡷᢃ ᔽႿʛᔀ଴ᖔ ̵ɯܦ୩ၤᑕႿႿᆍႿᆥ ༁ 信息
脂糖凝胶电泳与紫外分光光度计检测 ᧕શዶ 浓度ᤥ 指数ྉ ୩ၤᑕႿႿᆍႿᆥ ༁ ᔽႿ஦ᆍʢቝᑕᡷᔽᆍႿ ᔽႿʛᔀ଴ᖔ ᧇɯܦ遗传距离
ϟ঎԰঎԰ 叶子花 ᧧୩୩኏᥋۪ऊ኏ 反应体系的优化জ 参考李 ྉ੫ᔀႿᔀᡷᔽዹ ʛᔽ༁ᡷᑕႿዹᔀᖔ ᤩᦵɯ及遗传相似系数ྉ ዹᆍᔀ஦஦ᔽዹᔽᔀႿᡷ
房英等ྉ԰ԡϟԡɯᖔ将该实验的原初扩增反应体系定 ᆍ஦ ੫ᔀႿᔀᡷᔽዹ ༁ᔽቝᔽ᤟ᑕʢᔽᡷᢃᖔ ᤩ୒ɯ 等遗传参数进行分析ᖔ并

为 ԰ԡ ဂᓂᖔ 包括᧥԰ ġ ᧕ʢᔀቝ ఋᑕी ቝᔽ଴ ϟԡ ဂᓂܦ ᧧୩୩኏ 基于遗传距 离和遗传相似系数在软件 શఋ୩ɟ୩ᡱዹ
᥋ϟ
۪ʢᔽቝᔀʢྉϟԡ ࣼቝᆍ᤟ኼᓂ ɯϟ ဂᓂܦ኏શᑕ༁ᔀ᥋஦ʢᔀᔀ औᑕᡷᔀʢ ऐ ဂᓂܦ ԰঎ϟྉ኏ᆍၤ᤟஦ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ ԰ԡԡԡɯ 中采用非加权分组算术平
԰ԡ ጲ ሕԡ Ⴟ੫ ఋᔀቝᡱ᤟ᑕᡷᔀ ੫ ᧕શዶ ϟ ဂᓂᤥ 然后ᖔ 对影响 均ྉࣼႿऔᔀᔽ੫ၤᡷᔀʛ ᡱᑕᔽʢ ੫ʢᆍࣼᡱ ቝᔀᡷၤᆍʛ औᔽᡷၤ ዶʢᔽᡷၤቝᔀᡷᔽዹ ᥘᔀᑕႿᖔ