Page 91 - 《广西植物》2023年第6期

６ 期 苏桂军等: 花生铝响应类受体蛋白激酶 ＡｈＰＲＫ４ 的原核表达分析 １ ０ ７ ７

中也发现 ＡｈＰＲＫ４ 是一个铝胁迫响应基因ꎬ进一步
分析 ＡｈＰＲＫ４ 的表达水平发现其在两个铝耐性不
同的花生品种中的表达模式不同ꎬ在不同铝浓度

处理下ꎬＡｈＰＲＫ４ 表达水平均显著提高ꎬ在铝处理 ８
ｈ 后ꎬ在耐铝品种‘９９￣１５０７’中的表达上调更强烈ꎬ
暗示 ＡｈＰＲＫ４ 是花生耐铝相关基因ꎬ在铝胁迫下ꎬ
ＡｈＰＲＫ４ 是否与 ＡｔＰＲＫ１ 功能类似而与应激脯氨

Ｍ. 蛋白 ｍａｒｋｅｒꎻ １. 未诱导的总蛋白ꎻ ２. ＩＰＴＧ 诱导后的总 酸之间有关联? 有待进一步研究ꎮ
蛋白ꎻ ３. ＩＰＴＧ 诱导后裂解液上清ꎻ ４. ＩＰＴＧ 诱导后裂解液 ＡｈＰＲＫ４ 蛋白与其他物种的 ＰＲＫ 成员的激酶
沉淀ꎮ 域具有较高的同源性ꎬ表明此结构域在不同物种
Ｍ. Ｐｒｏｔｅｉｎ ｍａｒｋｅｒꎻ １. Ｔｏｔａｌ ｕｎｉｎｄｕｃｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎꎻ ２. ＩＰＴＧ￣ｉｎｄｕｃｅｄ
ＰＲＫ 以及同一物种不同 ＰＲＫ 成员的保守性ꎮ 系
ｔｏｔａｌ ｐｒｏｔｅｉｎꎻ ３. ＩＰＴＧ￣ｉｎｄｕｃｅｄ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔꎻ ４. ＩＰＴＧ￣ｉｎｄｕｃｅｄ
统进化树中ꎬＡｈＰＲＫ４ 与 ＡｔＰＲＫ４ 以及 ＡｔＰＲＫ１ 在
ｐｅｒｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ.
图 ６ ＡｈＰＲＫ４￣ＣＤ 原核表达蛋白的 ＳＤＳ￣ＰＡＧＥ 电泳分析 同一 大 分 支 上ꎬ 具 有 较 近 的 亲 缘 关 系ꎬ 其 中
Ｆｉｇ. ６ ＳＤＳ￣ＰＡＧＥ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＡｔＰＲＫ４ 与 ＡｔＮＥＴ２Ａ 互作共同参与微管运动来调
ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＡｈＰＲＫ４￣ＣＤ 控花粉管发育(Ｄｕｃｋｎｅｙ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１７)ꎬ ＡｔＰＲＫ１ 可

Ｍ. 蛋白 ｍａｒｋｅｒꎮ Ａ: １. 经 ＩＰＴＧ 诱导后的总蛋白ꎻ ２. ＩＰＴＧ 诱导后裂解液上清ꎻ ３. 流穿液ꎻ ４ꎬ ５. ＰＢＳ 洗脱液ꎻ ６ꎬ ７. 纯化蛋白样
品ꎮ Ｂ: １ꎬ ２. ＧＳＴ￣ＡｈＰＲＫ４￣ＣＤ 纯化蛋白ꎻ ３ꎬ ４. ＧＳＴ 标签蛋白ꎮ
Ｍ. Ｐｒｏｔｅｉｎ ｍａｒｋｅｒ. Ａ: １. ＩＰＴＧ￣ｉｎｄｕｃｅｄ ｔｏｔａｌ ｐｒｏｔｅｉｎꎻ ２. ＩＰＴＧ￣ｉｎｄｕｃｅｄ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔꎻ ３. Ｆｌｏｗｔｈｒｏｕｇｈ ｂｕｆｆｅｒꎻ ４ꎬ ５. ＰＢＳ ｗａｓｈ ｂｕｆｆｅｒꎻ ６ꎬ ７.
Ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ. Ｂ: １ꎬ ２. ＧＳＴ￣ＡｈＰＲＫ４￣ＣＤ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎꎻ ３ꎬ ４. ＧＳＴ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ.
图 ７ ＧＳＴ￣ＡｈＰＲＫ４￣ＣＤ 重组蛋白的纯化和 Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ 检测
Ｆｉｇ. ７ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＧＳＴ￣ＡｈＰＲＫ４￣ＣＤ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ

在水势胁迫下通过脯氨酸响应胁迫( Ｖｅｒｓｌｕｅｓ ｅｔ 作蛋白对探究 ＡｈＰＲＫ４ 在铝胁迫中的响应机制
ａｌ.ꎬ ２０１４) ꎬ故 ＡｈＰＲＫ４ 也可能参与花粉管发育 具有重要意义ꎮ 除此之外ꎬ本研究对 ＡｈＰＲＫ４ 基
和响应胁迫 中ꎮ 以 ＡｈＰＲＫ４ 的 拟 南 芥 同 源 蛋 白 因的启动子元件进行预测ꎬ发现该基因启动子区
ＡｔＰＲＫ４ 的 序 列 在 拟 南 芥 数 据 库 中 筛 选 预 测 域含有生长素和 ＡＢＡ 响应元件ꎮ 生长素在植物
ＡｈＰＲＫ４ 的互作蛋白ꎬ发现互作蛋白中以各类型 铝胁迫响应信号传递途径中发挥作用ꎬ铝胁迫下
激酶最多ꎬ同时预测 ＡｈＰＲＫ４ 具有磷酸化位点ꎬ 植物的生长素在根尖的细胞分布和在细胞的运
故 ＡｈＰＲＫ４ 可能以磷酸化与各类型激酶之间形 输可能会受到影响ꎬ进而导致根长受到抑制( 吴
成调控网络ꎮ 在预测的互作蛋白中ꎬ部分蛋白功 道铭 等ꎬ ２０１４) ꎻ 除 生 长 素 外ꎬ 在 大 豆 铝 胁 迫 与

能已有报道ꎬ其中 ＬＭＫ１ 调控叶片死亡( Ｌｉ ｅｔ ａｌ.ꎬ ＡＢＡ 实验中也发现ꎬ大豆根尖内源 ＡＢＡ 与铝处
２０２０) ꎬＨＡＫ１ 可 与 ＰＢＬ２７ 蛋 白 互 作 参 与 ＨＤＳ 理时间和 铝 处 理 浓 度 呈 正 相 关 关 系ꎬ 并 且 ＡＢＡ
( ｈｅｒｂｉｖｏｒｅ￣ｄｅｒｉｖｅｄ ｄａｎｇｅｒ) 防 御 反 应 ( Ｕｅｍｕｒａ ｅｔ 处 理 可 减 少 铝 胁 迫 下 的 氧 化 伤 害 ( 侯 宁 宁ꎬ
ａｌ.ꎬ ２０２０) ꎬＰＥＰＲ２ 参与 ＢＳＣＴＶ( ｂｅｅｔ ｓｅｖｅｒｅ ｃｕｒｌｙ ２００９) ꎮ 故 ＡＢＡ 和生长素是否也调控花生铝胁
ｔｏｐ ｖｉｒｕｓ) 病 害 防 御 ( Ｚｅｎｇ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２０ ) ꎬ 推 测 迫? 有待进一步研究ꎮ
ＡｈＰＲＫ４ 在胁迫防御中起作用ꎬ进一步验证其互 ＡｈＰＲＫ４ 属于 ＬＲＲ￣ＩＩＩ 类受体蛋白激酶家族