Page 89 - 《广西植物》2020年第5期

５ 期 黄婧等: 基于流式细胞术的乌饭树核 ＤＮＡ 含量(２Ｃ￣值)测定 ６ ８ ５

表 ２ 乌饭树单株的核 ＤＮＡ 含量(２Ｃ￣值)
Ｔａｂｌｅ ２ Ｎｕｃｌｅａｒ ＤＮＡ ｃｏｎｔｅｎｔｓ (２Ｃ￣ｖａｌｕｅ) ｏｆ ｎｉｎｅ Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｂｒａｃｔｅａｔｕｍ ｓａｍｐｌｅｓ

项目 样本 １ 样本 ２ 样本 ３ 样本 ４ 样本 ５ 样本 ６ 样本 ７ 样本 ８ 样本 ９ 平均值
Ｉｔｅｍ Ｓａｍｐｌｅ １ Ｓａｍｐｌｅ ２ Ｓａｍｐｌｅ ３ Ｓａｍｐｌｅ ４ Ｓａｍｐｌｅ ５ Ｓａｍｐｌｅ ６ Ｓａｍｐｌｅ ７ Ｓａｍｐｌｅ ８ Ｓａｍｐｌｅ ９ Ｍｅａｎ
核 ＤＮＡ 含量 １.２５ １.２１ １.２０ １.２５ １.１８ １.２７ １.２２ １.１９ １.２３ １.２２±０.０３
Ｎｕｃｌｅａｒ ＤＮＡ
ｃｏｎｔｅｎｔ(ｐｇ)
基因组大小 １ ２１８.６５ １ １８４.７４ １ １７４.６５ １ ２２１.３３ １ １５０.４９ １ ２３８.４０ １ １９２.９１ １ １６３.０８ １ ２０５.２９ １ １９４.３９±
Ｇｅｎｏｍｅ ｓｉｚｅ(Ｍｂ) ２９.０７

表 ３ 不同地理来源的植物单株的核 ＧＰＢ 解离液ꎬ使用红色或鲜绿色的乌饭树鲜叶制
ＤＮＡ 含量间的方差分析 备细胞悬浮液ꎬ经 ５０ μＬ∙ｍＬ ＰＩ 溶液染色 ５ ｍｉｎ
￣１
Ｔａｂｌｅ ３ ＡＮＯＶＡ ｔｅｓｔｉｎｇ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ ｎｕｃｌｅａｒ 即可上机检测ꎮ 该方法相比于前人对越橘属植物
ＤＮＡ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｓａｍｐｌｅｓ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｒｏｖｉｎｃｅｓ
的测定方法简化了许多ꎬ结果重复性较好ꎬＣＶ 值
种源省份 数量 平均值±标准差 Ｆ 值 Ｐ 值 控制在 ５％ꎬ可为本属其他植物的流式细胞术研究
Ｐｒｏｖｉｎｃｅ ｎ ｘ±ｓ Ｆ ｖａｌｕｅ Ｐ ｖａｌｕｅ
提供参考ꎮ
江苏 １.２３７ ５±
４
Ｊｉａｎｇｓｕ ０.０３９ ４８ 本研究随机挑选了分布在江苏、湖南、江西的
湖南 １.２０５ ０±
２ ０.９４６ ０.４３９ ９ 个单株ꎬ检测结果均为二倍体植株ꎮ 这与越橘属
Ｈｕｎａｎ ０.００７ ０７
江西 １.２１３ ３± 其他植物的基因组特性( 孙海悦和张亚东ꎬ２０１４)
３
Ｊｉａｎｇｘｉ ０.０２０ ８２
有类似之处ꎬ生长在美国东南部温暖湿润地区的
常绿越橘( Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｄａｒｒｏｗｉ)、兔眼越橘( Ｖ. ｖｉｒｇａ￣
ｔｕｍ)、 小 穗 越 橘 ( Ｖ. ｔｅｎｅｌｌｕｍ) 都 是 二 倍 体 植 株
３ 讨论 (２ｎ ＝ ２ｘ ＝ ２４)ꎻ生长在严寒地区的北高丛蓝莓、矮
丛越橘 ( 狭 叶 越 橘 为 主) 品 种 多 是 四 倍 体 植 株
本研究首次利用流式细 胞 术 检 测 乌 饭 树 核 (２ｎ ＝ ４ｘ ＝ ４８)ꎮ 乌饭树与其他越橘属植物的分布
ＤＮＡ 含量(２Ｃ￣值)ꎮ 测试得到乌饭树野生单株核 范围不同ꎬ目前只发现生长在温暖湿润的地区ꎬ尤
ＤＮＡ 含量(２Ｃ￣值) 平均值为(１.２２±０.０３) ｐｇꎬ基因 其是丘陵地带或海拔 ４００ ~ １ ４００ ｍ 的山地( 郝娟
组大小约为(１ １９４.３９± ２９.０７)Ｍｂꎮ 检测单株与越 娟ꎬ２０１０)ꎬ结合本试验的结果ꎬ推测乌饭树可能是

橘二倍体品种的核 ＤＮＡ 含量近似ꎬ且不同省份来 二倍体植物ꎮ 但由于试验检测的乌饭树单株数量
源的野 生 单 株 的 核 ＤＮＡ 含 量 无 显 著 差 异 ( Ｐ > 较少ꎬ尚不能确定乌饭树是否存在三、四、六倍体ꎬ
０.０５)ꎬ推测供试单株均为二倍体植株ꎮ 本研究旨 还需要检测更多植株ꎬ尤其是生长量大、株高较
在为乌饭树基因组学研究、遗传多样性研究和育 高ꎬ以及生长在低温地区的植株ꎮ 同时ꎬ在今后的

种工作奠定基础ꎮ 育种工作中ꎬ可以利用乌饭树的耐热和低冷温需
流式细胞术根据样本的相对荧光强度来分析 要量基因ꎬ对耐冷的北方越橘品种进行改良ꎬ扩大
其 ＤＮＡ 含量ꎬ是一种快速准确鉴定植物基因组大 其种植适应范围ꎮ

小及倍性的方法ꎮ 前人利用流式细胞术检测越橘 越橘属植物种类繁多ꎬ并且经过长期的自然
属植物 ２Ｃ￣值时使用的解离液( Ａｒｕｍｕｇａｎａｔｈａｎ ＆ 选择ꎬ遗传变异丰富ꎬ前人研究发现ꎬ越橘属不同
Ｅａｒｌｅꎬ １９９１ａ) 和 外 标 样 品 ( Ｃｏｓｔｉｃｈ ｅｔ ａｌ.ꎬ １９９３) 倍性植株的核 ＤＮＡ 含量大小存在显著差异( Ｐ <
(虹鳟鱼红细胞)ꎬ目前已不常在植物研究中使用ꎬ ０.０５)ꎬ甚至在二倍体品种之间也存在一定差异
因此本研究自行摸索了乌饭树的流式细胞术试验 (Ｃｏｓｔｉｃｈ ｅｔ ａｌ.ꎬ １９９３)ꎬ这种现象在其他植物中也
方法ꎮ 最 终 采 用 水 稻 ‘ 日 本 晴’ 作 为 内 标ꎬ 选 择 被证实存在( 吴丽萍等ꎬ２０１３ꎻ陈丙以等ꎬ２０１５ꎻ林