Page 125 - 《广西植物》2023年第2期

２ 期 羽健宾等: 粉葛 ＰｔＣＨＩ 基因的克隆、原核表达和亚细胞定位 ３ １ ９

图 ３ 粉葛 ＰｔＣＨＩ 基因的 ｃＤＮＡ 序列及推测的氨基酸序列
Ｆｉｇ. ３ ｃＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ ｄｅｄｕｃｅｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ＰｔＣＨＩ ｇｅｎｅ ｉｎ Ｐｕｅｒａｒｉａ ｍｏｎｔａｎａ ｖａｒ. ｔｈｏｍｓｏｎｉｉ

２.３.４ ＰｔＣＨＩ 的遗传进化树分析 通过 ＭＥＧＡ ７.０
软件构建 ＰｔＣＨＩ 的氨基酸系统发育进化树ꎬ结果表
明 １１ 个物种被分为两大类ꎬ其中粉葛品种‘桂葛 １
号’和野葛品种‘桂葛 ８ 号’、大豆(Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ)、乌
拉尔甘草(Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｕｒａｌｅｎｓｉｓ)、刺毛黧豆(Ｍｕｃｕｎａ
ｐｒｕｒｉｅｎｓ) 和密花豆( Ｓｐａｔｈｏｌｏｂｕｓ ｓｕｂｅｒｅｃｔｕｓ) 为一组ꎬ
而菜豆(Ｐｈａｓｅｏｌｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ)、绿豆(Ｖｉｇｎａ ｒａｄｉａｔａ) 和
豇 豆 ( Ｖ. ｕｎｇｕｉｃｕｌａｔａ ) 为 一 组ꎬ 鸡 母 珠 ( Ａｂｒｕｓ
ｐｒｅｃａｔｏｒｉｕｓ)和拟南芥(Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ) 为一组ꎮ
不同部位不同小写字母表示差异达显著水平 (Ｐ<０.０５)ꎮ 这说明粉葛品种‘ 桂葛 １ 号’ 与野葛品种‘ 桂葛 ８
Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｏｗｅｒｃａｓｅ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐａｒｔｓ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ 号’、大豆和乌拉尔甘草的亲缘关系较近(图 ８)ꎮ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ (Ｐ<０.０５).
２.３.５ ＰｔＣＨＩ 蛋白互作关系预测 利用 ＳＴＲＩＮＧ 在线
图 ４ ＣＨＩ 基因在不同部位的表达量 工具并以大豆蛋白库分析大豆 ＣＨＩ 的互作关系ꎬ预
Ｆｉｇ. ４ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＨＩ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐａｒｔｓ
测结果显示ꎬＣＨＩ 蛋白与黄烷酮 ３￣羟化酶 Ｆ３Ｈ２、
Ｆ３Ｈ(属于铁/ 抗坏血酸依赖的氧化还原酶家族ꎬ与
分分别是 ０.９６９ 和 ０.９６４ꎻ其次是位于 ２９ 位和 ２０３ 植物类黄酮化合物花青素和原花青素的积累相关)
位的丝氨酸ꎬ得分分别为 ０.９０１ 和 ０.９０２ꎻ接着是第 的互作分数较高ꎬ均为 ０.９９４ꎻ其次是 ＣＨＩ 蛋白与对￣
２６ 位的丝氨酸、４４ 位的苏氨酸、１０１ 位的丝氨酸和 香豆酰 ＣｏＡ 连接酶 ４ＣＬ４(属于 ＡＴＰ 依赖的 ＡＭＰ 结
１１２ 位的丝氨酸ꎬ得分分别为 ０.８９４、０.８６３、０.８４４、 合酶家族ꎬ与植物木质素合成密切相关) 的互作分
０.８２７(图 ７)ꎮ 数为 ０.９８０ꎮ 此外ꎬ ＣＨＩ 蛋白与二氢黄酮醇还原酶