Page 128 - 《广西植物》2023年第2期
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３ ２ ２ 广 西 植 物 ４３ 卷
测序结果与目的基因序列一致的菌液进行扩大培
养ꎬ提取其质粒用于拟南芥瞬时表达ꎮ
２.５.２ 亚细胞定位分析 通过 ＰＥＧ￣ＣａＣｌ 法介导
２
ｐＳＡＴ６ ￣ＥＹＦＰ￣Ｎ１￣ＰｔＣＨＩ 重组质粒转化拟南芥原生
质体ꎬ转 化 １６ ｈꎬ 通 过 激 光 共 聚 焦 显 微 镜 观 察ꎬ
ＰｔＣＨＩ 的亚细胞定位结果显示ꎬ在叶绿体周围检测
到由 ＥＹＦＰ 通路发出的绿色荧光( 图 １５:Ａ) 及叶
绿体自发的红色荧光(图 １５:Ｂ)ꎬ这表明 ＰｔＣＨＩ 基
因定位于叶绿体ꎮ
３ 讨论
图 ９ ＰｔＣＨＩ 蛋白互作分析 ３.１ 粉葛和野葛的 ＣＨＩ 基因表达与异黄酮类物质
Ｆｉｇ. ９ ＰｔＣＨＩ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ 积累关系
异黄酮类物质作为葛根的主要活性成分ꎬ 其
Ａ. ＰｔＣＨＩ 基因 ＰＣＲ 扩增ꎻ １－５. 扩增产物ꎮ Ｂ. １. 重组质粒 ｐｅｔ２８ａ￣ＰｔＣＨＩ 的双酶切产物ꎻ ２. ｐｅｔ２８ａ￣ＰｔＣＨＩ 质粒提取ꎮ Ｃ. 重组质粒
ｐｅｔ２８ａ￣ＰｔＣＨＩ 导入 ＢＬ２１ 中的 ＰＣＲ 检验结果ꎻ １－３. 扩增产物ꎮ Ｍ. ＤＬ２０００ ＤＮＡ 标记ꎮ
Ａ. ＰＣＲ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＰｔＣＨＩꎻ １－５. Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｓ. Ｂ. １. Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ ｏｆ ｐｅｔ２８ａ￣ＰｔＣＨＩꎻ ２. Ｐｌａｓｍｉｄ ＤＮＡ. Ｃ. ＰＣＲ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ
ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｌａｓｍｉｄ ｐｅｔ２８ａ￣ＰｔＣＨＩꎻ １－３. Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｓ. Ｍ. ＤＬ２０００ ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ.
图 １０ 原核表达载体 ｐｅｔ２８ａ￣ＰｔＣＨＩ 的构建
Ｆｉｇ. １０ Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ ｐｅｔ２８ａ￣ＰｔＣＨＩ
含量高低是葛根药用价值的评判标准之一ꎮ 前人 总异黄酮含量[０.４６３ ｇ(１００ ｇ) ]ꎬ并且野葛中
￣１
的研究发现ꎬ粉葛和野葛的总黄酮含量差异悬殊ꎬ 的葛根素含量和大豆苷含量也高于粉葛ꎮ 张静等
并且野葛的异黄酮类物质的含量显著高于粉葛ꎮ (２０１７)研究发现ꎬ广西野葛的纤维素、可溶性糖、
王新胜等(２００９)对伏牛山区的野葛和粉葛的药材 总黄酮和葛根素的含量显著高于粉葛ꎮ
质量测评结果表明ꎬ野葛的水浸出物和醇浸出物 查尔酮异构酶作为黄酮生物合成途径中第二
含量均高于粉葛ꎬ总黄酮含量是粉葛的 ３ 倍ꎬ并且 大限速酶ꎬ在异黄酮类物质积累、色素合成、抗逆
野葛中葛根素的平均含量是粉葛的 ２.５ 倍ꎮ 蒙秋 等方面具有重要作用(李琳玲等ꎬ２００８ꎻ周发俊等ꎬ
艳等(２０２０)对广西不同地区的野葛和粉葛总异黄 ２００８)ꎮ Ｚｈａｎｇ 等(２００９) 研究表明ꎬ在乌拉尔甘草
酮含量研究结果表明ꎬ１００ ｇ 野葛粉末中总异黄酮 中过表达其 ＣＨＩ 基因ꎬ对其毛状根中总黄酮含量
￣１
含量[约为 ５.０８ ｇ(１００ ｇ) ] 显著高于粉葛中的 进行检测后发现ꎬ转基因乌拉尔甘草的毛状根中
