Page 129 - 《广西植物》2023年第2期

２ 期 羽健宾等: 粉葛 ＰｔＣＨＩ 基因的克隆、原核表达和亚细胞定位 ３ ２ ３

￣１ ￣１ ￣１ ￣１
Ａ. １６ ℃ ꎬ１００ ｒｍｉｎ ꎬ０.５ ｍｏｌＬ ＩＰＴＧ 诱导下的 ＰｔＣＨＩꎻ Ｂ. ３０ ℃ ꎬ１００ ｒｍｉｎ ꎬ０.５ ｍｏｌＬ ＩＰＴＧ 诱导下的 ＰｔＣＨＩꎻ Ｍ. Ｐｒｏｔｅｉｎ
ｍａｒｋｅｒꎻ １. 未诱导的总蛋白ꎻ ２. ＩＰＴＧ 诱导的总蛋白ꎻ ３. ＩＰＴＧ 诱导的上清液ꎻ ４. ＩＰＴＧ 诱导的沉淀ꎮ
￣１ ￣１ ￣１ ￣１
Ａ. Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ａｒｅ １６ ℃ꎬ １００ ｒｍｉｎ ꎬ ０.５ ｍｏｌＬ ＩＰＴＧ ｏｆ ＰｔＣＨＩꎻ Ｂ. Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ３０ ℃ꎬ １００ ｒｍｉｎ ꎬ ０.５ ｍｏｌＬ
ＩＰＴＧ ｏｆ ＰｔＣＨＩꎻ Ｍ. Ｐｒｏｔｅｉｎ ｍａｒｋｅｒꎻ １. Ｔｏｔａｌ ｕｎｉｎｄｕｃｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎꎻ ２. Ｔｏｔａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ＩＰＴＧꎻ ３. ＩＰＴＧ￣ｉｎｄｕｃｅｄ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔꎻ ４. ＩＰＴＧ￣
ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ.
图 １１ ＰｔＣＨＩ 原核表达蛋白的 ＳＤＳ￣ＰＡＧＥ 电泳分析
Ｆｉｇ. １１ ＳＤＳ￣ＰＡＧＥ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＰｔＣＨＩ

￣１ ￣１ ￣１ ￣１
Ｍ. Ｐｒｏｔｅｉｎ ｍａｒｋｅｒꎻ １. 流出液ꎻ ２. ２０ ｍｍｏｌＬ 咪唑ꎻ ３. ４０ ｍｍｏｌＬ 咪唑ꎻ ４. ８０ ｍｍｏｌＬ 咪唑ꎻ ５. １００ ｍｍｏｌＬ 咪唑ꎻ ６. １２０
￣１ ￣１ ￣１
ｍｍｏｌＬ 咪唑ꎻ ７. １６０ ｍｍｏｌＬ 咪唑ꎻ ８. ２００ ｍｍｏｌＬ 咪唑ꎮ
￣１
￣１
￣１
Ｍ. Ｐｒｏｔｅｉｎ ｍａｒｋｅｒꎻ １. Ｅｌｕａｔｅꎻ ２. ２０ ｍｍｏｌＬ ｉｍｉｄａｚｏｌｅꎻ ３. ４０ ｍｍｏｌＬ ｉｍｉｄａｚｏｌｅꎻ ４. ８０ ｍｍｏｌＬ ｉｍｉｄａｚｏｌｅꎻ ５. １００ ｍｍｏｌＬ ￣１
￣１ ￣１ ￣１
ｉｍｉｄａｚｏｌｅꎻ ６. １２０ ｍｍｏｌＬ ｉｍｉｄａｚｏｌｅꎻ ７. １６０ ｍｍｏｌＬ ｉｍｉｄａｚｏｌｅꎻ ８. ２００ ｍｍｏｌＬ ｉｍｉｄａｚｏｌｅ.
图 １２ ＰｔＣＨＩ 重组蛋白的纯化
Ｆｉｇ. １２ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＰｔＣＨＩ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ
总黄酮含量[１.３９４ ｇ(１００ ｇ) ]显著高于野生型 在 ２％ ＰＥＧ８０００ 和 ０.１％酵母提取物共处理下能显
￣１
毛状根中的含量[０.８４２ ｇ(１００ ｇ) ]ꎻ同时ꎬ发现 著提高转基因乌拉尔甘草毛状根中的总黄酮含量
￣１