Page 78 - 《广西植物》2023年第7期

１ ２ ４ ６ 广 西 植 物 ４３ 卷
茅苍术( Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ ｌａｎｃｅａ) ( 吕立新等ꎬ ２０１４) 等 孢子悬浮液备用ꎬ另一组连续振荡培养 ６ ~ ７ ｄꎮ 将
药材中分离出具有不同生理活性的内生菌ꎬ并通 已发酵的菌液在－７０ ℃ 下冻融 ３ 次后ꎬ用超声波细
过对活性代谢物组分分析ꎬ筛选出一批有新颖化 胞破碎仪破壁( 宁波新芝ꎬｓｃｉｅｎｔｚ￣ＩＩＤ)ꎬ以释放胞
学结构的潜在先导物ꎬ为抗氧化、抗肿瘤、抗菌药 内产物ꎮ 过滤去除菌丝体ꎬ 滤液冷冻干燥ꎬ 甲醇

物的研发开辟了新途径ꎮ 浸提ꎬ配成母液备用ꎮ
内生菌与宿主互作间产生的小分子次生代谢 １.３ 接种
物对宿主的生长发育、系统防御以及宿主代谢产 青枯菌接种参考刘丹等(２０１１) 的伤根浸泡方

物的 合 成 起 着 关 键 的 调 控 作 用 ( Ｆｒａｇｏｓｏ ｅｔ ａｌ.ꎬ 法ꎮ 内生真菌接种采用拇指蘸取含石英砂的孢子
２０１４ꎻ Ｊｉａ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１６)ꎮ 活性内生菌能够产生与 悬浮液轻轻涂抹在组培苗叶片的正面ꎬ于饱和湿
宿主植物相同或相似的活性代谢物ꎬ这些活性物 度下 ２５ ℃ 暗培养 ２４ ｈꎮ 待侵染成功后将广藿香
质通过调控宿主防御酶合成关键基因的表达而增 苗放回光照培养箱( 上海一恒ꎬＭＧＣ￣４５０ＢＰ) 照光
强宿主的抗性反应( 彭淑萍等ꎬ２０２１)ꎮ 前期该文 培养ꎬ光照强度 １０ ０００ ｌｘꎬ照光时长 １２ ｈｄ ꎮ 同
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ＰＩ 团队对 ２ 种广藿香栽培品种牌香( Ｐｏｇｏｓｔｅｍｏｎ 时ꎬ将内生真菌提取液母液用无菌水稀释成 ２.５、
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ｃａｂｌｉｎ ｃｖ. ｓｈｉｐａｉｅｎｓｉｓ ) 和 湛 香 ( Ｐ. ｃａｂｌｉｎ ｃｖ. ５.０、１０.０ ｍｇｍＬ ꎬ于接种保湿结束后喷施在组
ｚｈａｎｊｉａｎｇｅｎｓｉｓ)内生真菌群落结构组成进行了研究 培苗叶片上ꎬ隔天再喷施 １ 次ꎮ 实验设对照组ꎬ对
(王利国等ꎬ ２０２２)ꎬ从牌香中分离出 １ 株具有活 照组为 同 一 批 广 藿 香 组 培 苗ꎬ 但 未 接 种 青 枯 菌
性的 内 生 真 菌 ＧＨＸ￣Ｐ１７ꎬ 鉴 定 为 链 格 孢 属 真 菌 (Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ)和喷施 ＧＨＸ￣Ｐ１７ 代谢物ꎮ
(Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｐ.)ꎮ 通过室内平板对峙实验ꎬ发现该 实验重复 ３ 次ꎬ每次每浓度处理 ２０ 株ꎮ
菌株产生的代谢产物有较明显的抑菌活性ꎮ 为进 １.４ 调查方法与数据处理
一步了解 Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｐ. ＧＨＸ￣Ｐ１７ 菌株及其代谢物 接种后于 ８４、１２０、１５６、１８０、２０４ ｈ 调查广藿香
对植物病害的防治作用机理ꎬ探究内生菌与宿主 青枯 病 发 病 率 (％) 和 严 重 度ꎬ 计 算 病 情 指 数
防御酶基因表达之间的关系ꎬ本文通过室内人工 (ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎｄｅｘꎬ ＤＩ)ꎮ 发病率(％) ＝ 发病株数 / 调
接种孢子悬浮液和喷施代谢产物粗提物两种方 查总株数´１００ꎮ 病情指数(％) ＝ ∑( 各级病株数´
法ꎬ测定处理后不同时间 ＳＯＤ、ＰＯＤ 和 ＰＡＬ ３ 种酶 各级严重度) / ( 调查总株数´最高严重度) ´１００ꎮ
活性的变化方式及对广藿香青枯病的防治效果ꎮ 广藿香青枯病严重度划分标准参考中华人民共和
国国家标准 ＧＢ / Ｔ ２３２２２—２００８ 关于烟草青枯病
１ 材料与方法 分级调查方法及芝麻青枯病严重度分级标准( 李

信申等ꎬ２０１９)ꎮ 广藿香青枯病标准如下:０ 级为全
１.１ 样品来源 株无病ꎻ１ 级为茎基部病斑散射状、病斑不连续ꎬ呈
供试材料选用广藿香组培苗ꎬ移栽于花盆室 狭长型ꎬ叶片不凋萎ꎻ３ 级为茎基部病斑合并ꎬ环绕
内培养至 １５ ｃｍ 以上ꎮ 接种用青枯菌菌株 ＨＸ￣６ 茎围不超过 １ / ３ꎬ１ / ３ 的叶片轻度凋萎ꎬ下部少数
由广州中医药大学贺红教授提供ꎬ菌株购自广东 叶片出现青枯ꎻ５ 级为病斑超过茎围的 １ / ２ꎬ但未
省科学院微生物研究所菌种保藏中心ꎮ 供试内生 全部环绕茎围ꎬ１ / ２ 叶片青枯ꎻ７ 级为茎部病斑环
真菌菌株 ＧＨＸ￣Ｐ１７ 由广州中医药大学中药种质 绕茎围ꎬ２ / ３ 以上叶片凋萎或青枯ꎻ９ 级为病株青

资源与分子鉴定 ＰＩ 团队从牌香上分离获得ꎮ 枯死亡ꎮ
１.２ 菌株活化与样品提取 用 ＳＰＳＳ ２２.０软件中的皮尔森相关系数(ｐｅａｒｓｏｎ
青枯菌 ＨＸ￣６ 菌株活化采用平板划线培养ꎬ培 ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ) 法对处理组和对照组发病率

养基 为 营 养 琼 脂 培 养 基 ( ｎｕｔｒｉｅｎｔ ａｇａｒ ｍｅｄｉｕｍꎬ 和病情指数相关性进行分析ꎬ采用单因素方差分析
ＮＡ)(北京奥博星)ꎮ 内生真菌 ＧＨＸ￣Ｐ１７ 代谢产 (ｏｎｅ￣ｗａｙ ＡＮＯＶＡ)中的 Ｔｕｒｋｅｙ ＨＳＤ 检验进行差异
物采用悬浮液振荡培养ꎬ用内径 ６ ｍｍ 的打孔器切 显著性分析ꎮ 当 Ｐ<０.０５ 时ꎬ差异显著ꎮ

取 ＰＤＡ 平板上产孢的内生真菌菌块放于 ５０ ｍＬ １.５ ＳＯＤ、ＰＯＤ 及 ＰＡＬ 活性测定
ＰＤＢ 液体培养基中振荡培养ꎬ其中ꎬ一组培养液振 接 种 后 定 时 取 样 测 定 超 氧 化 物 歧 化 酶
荡培养 ２４ ｈ 后ꎬ配成孢子数达 １×１０ ＣＦＵｍＬ 的 ( ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅꎬ ＳＯＤ )、 过 氧 化 物 酶
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