Page 79 - 《广西植物》2023年第7期
P. 79
７ 期 程小卿等: 内生真菌 Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｐ. ＧＨＸ￣Ｐ１７ 代谢产物防治广藿香青枯病及保护酶的变化 １ ２ ４ ７
( ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅꎬ ＰＯＤ ) 和 苯 丙 氨 酸 解 氨 酶 后处理组 ＰＡＬ 活性开始缓慢升高ꎻ到 １３２ ｈ 时ꎬ５
(ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ ａｍｍｏｎｉａｌｙａｓｅꎬ ＰＡＬ) 活性ꎮ ＰＡＬ 测 ｍｇｍＬ 和 １０ ｍｇｍＬ 处理的 ＰＡＬ 活性明显高
￣１
￣１
￣１
定参照李合生等(２０００) 的方法ꎬ以 ２９０ ｎｍ 下 ＯＤ 于对照组和 ２.５ ｍｇｍＬ 处理ꎻ到 １６８ ｈ 时ꎬ活性
值变化 ０.０１ 为 １ 个酶活性单位( Ｕ)ꎬ活性大小以 升高 值 达 到 最 大ꎬ 此 时 升 高 幅 度 比 对 照 高 出
每克蛋白的酶单位( Ｕｇ ｐｒｏｔ) 表示ꎻＰＯＤ 活性采 ９０.２３％ꎬ之后活性略有下降ꎬ但仍维持在一个较高
￣１
￣１
用愈创 木 酚 法 进 行 测 定ꎬ 以 每 分 钟 每 克 蛋 白 的 的水平ꎮ ２.５ ｍｇｍＬ 处理的 ＰＡＬ 活性始终和对
￣１
ＯＤ 值 ( ＯＤ ｇ ｐｒｏｔ) 表 示ꎻ ＳＯＤ 活 性 以 抑 制 照相差不大ꎬ表明低浓度的菌株提取液未能激发
４７０ ｎｍ
ＮＢＴ 光还原 ５０％为 １ 个酶活性单位ꎬ以每克蛋白 提高广藿香的防卫反应(图 ２)ꎮ
的单位数( Ｕｇ ｐｒｏｔ) 表示ꎮ 使用日本岛津公司 ２.３.２ ＰＯＤ ＧＨＸ￣Ｐ１７ 提取液对 ＰＯＤ 活性变化的
￣１
的 ＵＶ￣２４５０ 型紫外可见分光光度计测定 ＯＤ 值ꎻ以 影响与 ＰＡＬ 不同ꎮ 由图 ３ 可知ꎬ接种后 ２４ ｈꎬ对照
标准牛血清蛋白为对照计算总可溶性蛋白含量ꎻ 组和处理组 ＰＯＤ 活性迅速升高ꎬ但是处理组 ＰＯＤ
以未接种和未喷施 ＧＨＸ￣Ｐ１７ 的广藿香为空白对 活性升 高 速 率 明 显 快 于 对 照ꎮ ６０ ｈ 时ꎬ 处 理 组
照ꎮ 实验重复 ３ 次ꎮ ＰＯＤ 活性到达第 １ 个高峰ꎬ比对照高 ４９.５４％ꎬ之
后开始下降ꎻ在 ９６ ｈ 至 １３２ ｈ 期间ꎬ处理组 ＰＯＤ 活
２ 结果与分析 性一直维持在较低水平ꎻ到 １６８ ｈ 时ꎬ处理组 ＰＯＤ
活性再次升高到达第 ２ 个高峰ꎬ升高幅度与第 １ 峰
２.１ 青枯病严重度变化 持平ꎬ之后逐渐下滑ꎮ 第 １ 次升高应该与清除广
接种青枯菌 ８４ ｈ 后ꎬ对照广藿香靠近茎基部开 藿香体内过度积累的活性氧有关ꎬ因为青枯菌侵
始出现少量褪色斑ꎬ病斑呈散点状ꎬ达到严重度 １ 级 染 会 引 起 寄 主 释 放 大 量 活 性 氧ꎬ 即 氧 爆 发
(图 １:Ａ)ꎻ到 １５６ ｈ 时ꎬ严重度为 ５ 级的广藿香达到 (ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｂｕｒｓｔ)ꎻ第 ２ 峰出现的时间和 ＰＡＬ 活性
５０％ꎬ症状显示为茎基部病斑向上延伸扩大ꎬ环绕茎 峰值达到时间相近ꎬ表明 ＰＯＤ 参与了细胞壁木质
围超过 １ / ２ꎬ下部叶片出现少量青枯死亡(图 １:Ｂ)ꎻ 素的合成ꎬ以加强细胞壁木质化程度ꎮ
到 ２０４ ｈ 时ꎬ病斑连片绕茎ꎬ呈黑褐色ꎬ大部分广藿 ２.３.３ ＳＯＤ 接种青枯菌 ２４ ｈ 后ꎬ处理组和对照组
￣１
香青枯死亡ꎬ严重度为 ７~９ 级(图 １:Ｃ)ꎮ 广藿 香 的 ＳＯＤ 活 性 开 始 升 高ꎬ ５ ｍｇ ｍＬ 、 １０
２.２ 代谢产物对青枯病的防治作用 ｍｇｍＬ 处理的广藿香 ＳＯＤ 升高幅度明显高于对
￣１
由表 １ 可知ꎬ不同浓度处理的广藿香与对照比 照组ꎻ到 ６０ ｈ 时ꎬ处理组和对照 ＳＯＤ 活性同时升
较ꎬ青枯病发病率变化不大ꎬＴｕｒｋｅｙ 检验表明处理 到最高ꎬ之后开始下降ꎻ１３２ ｈ 后ꎬＳＯＤ 活性下降了
组与对照组无显著性差异(Ｐ<０.０５)ꎮ ８４ ｈ 后平均 １１.３２％ꎻ到 １６８ ｈ 时ꎬＳＯＤ 几乎回到了 ２４ ｈ 的活性
发病率为 １０.４２％ꎬ到 ２０４ ｈ 时ꎬ处理组发病率为 值ꎬ但仍维持在一个较高水平( 图 ４)ꎮ ＳＯＤ 作为
９４.６５％ꎬ对照组发病率为 １００％ꎮ 植物抗氧化剂ꎬ主要用于清除过度积累的氧自由
随着处理时间的延长ꎬＧＨＸ￣Ｐ１７ 提取液可以 基ꎮ ＳＯＤ 活性变化趋势表明ꎬ接种后 ６０ ｈ 氧自由
有效减缓广藿香青枯病发病程度ꎬ表现为青枯病 基的大量产生ꎬ激发了 ＳＯＤ 活性ꎬ有利于消除氧自
严重度降低ꎬＤＩ 减少ꎮ 由表 ２ 可知ꎬ随着喷施浓度 由基过度积累对细胞造成的伤害ꎬ从而保证细胞
增加和时间的延长ꎬ防治效果开始显现ꎮ 处理后 内正常代谢功能的运转ꎮ
￣１
１５６ ｈꎬ喷施了浓度为 ５.０ ｍｇｍＬ 和 １０.０ ｍｇ
￣１ ３ 讨论与结论
ｍＬ 的广藿香ꎬ青枯病 ＤＩ 显著低于对照组和 ２.５
￣１
ｍｇｍＬ 处理组ꎬＴｕｒｋｅｙ 检验呈显著性差异( Ｐ <
￣１ ￣１ 植物内生菌具有物种多 样 性 和 多 重 生 理 活
０.０５)ꎻ到 ２０４ ｈ 时ꎬ５.０ ｍｇｍＬ 和 １０.０ ｍｇｍＬ
处理组的广藿香平均 ＤＩ 为 ６７.７８％ꎬ而对照组为 性ꎬ其对宿主生长的影响多样且复杂ꎮ 目前ꎬ已从
９８.１０％ꎬ防效达 ３０.９０％ꎮ 多种植物中分离出有活性的内生菌ꎬ这些内生菌
２.３ 保护酶活性变化 除自身分泌的代谢小分子物质具有抗氧化( 杨明
２.３.１ ＰＡＬ 广藿香接种青枯菌后ꎬ处理组和对照 俊等ꎬ２０２０)、抗菌( 王沫等ꎬ２０１６)、抗肿瘤( 缪莉
组 ＰＡＬ 活性普遍升高ꎬ但升高幅度相差不大ꎻ９６ ｈ 等ꎬ ２０２０)等作用外ꎬ 其与宿主长期共生过程中还
