Page 85 - 《广西植物》2023年第7期

７ 期 程璐瑶等: 古树大理茶优势内生真菌 １ 个新四氢￣β￣咔啉二酮哌嗪的分离鉴定 １ ２ ５ ３

Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ ｏｆ Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ ｔｅｃｔｏｎｉｇｅｎａꎬ ａ ｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｕｓ ｉｎ ｔｈｅ
ａｎｃｉｅｎｔ ｔｅａ ｔｒｅｅ ｏｆ Ｃａｍｅｌｌｉａ ｔａｌｉｅｎｓｉｓꎬ ｔｈｅ ｒｉｃｅ ｓｏｌｉｄ￣ｓｔａｔｅ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｅｘｔｒａｃｔ ｗａｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｂｙ ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌꎬ
Ｄｉａｉｏｎ ＨＰ２０ ａｎｄ Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｅｓꎬ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｗｅｒｅ ｅｌｕｃｉｄａｔｅｄ ｂｙ ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ
１ １３
ＨＲＭＳꎬ Ｈ￣ＮＭＲꎬ Ｃ￣ＮＭＲꎬ ＨＳＱＣꎬ ＨＭＢＣ ａｎｄ ＣＯＳＹ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｉｃ ａｎａｌｙｓｅｓ. Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｗｅｒｅ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ: (１) Ｆｏｕｒ
ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｒｉｃｅ ｓｏｌｉｄ￣ｓｔａｔｅ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｅｘｔｒａｃｔ ｏｆ Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ ｔｅｃｔｏｎｉｇｅｎａꎬ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ａ ｎｅｗ
ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏ￣β￣ｃａｒｂｏｌｉｎｅ ｄｉｋｅｔｏｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ ａｌｋａｌｏｉｄ ｎａｍｅｄ ｔｅｃｔｏｎｉｃｇｅｎａｚｉｎｅ Ａ (１). (２) Ｔｈｒｅｅ ｋｎｏｗｎ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓꎬ ｔｒａｎｓ￣
ｃｙｃｌｏ￣(Ｄ￣ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎｙｌ￣Ｌ￣ｔｙｒｏｓｙｌ) (２)ꎬ １Ｈ￣ｉｎｄｏｌｅ￣３￣ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ ａｃｉｄ￣２ꎬ３￣ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ ｅｓｔｅｒ (３) ａｎｄ Ｎ￣ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ￣
２￣ａｃｅｔｙｌｐｙｒｒｏｌｅ (４) ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄꎬ ａｎｄ Ｃｏｍｐｏｕｎｄ ３ ｗａｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｎａｔｕｒｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ｔｉｍｅ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ｃａｍｅｌｌｉａ ｔａｌｉｅｎｓｉｓꎬ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｕｓꎬ Ｄｉａｐｏｒｔｈｅꎬ ｓｏｌｉｄ￣ｓｔａｔｅ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎꎬ ｄｉｋｅｔｏｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ

云南省野生茶树资源种类繁多ꎬ被世界公认为 ｇｒａｎｄｉｓ)(Ｄｏｉｌｏｍ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１７)中分离得到ꎬ并鉴定
茶树的原产地和起源中心ꎬ其中大理茶( Ｃａｍｅｌｌｉａ 为新种ꎬ随后高雅慧等(２０１７)、Ｚｈａｏ 等(２０２２) 先
ｔａｌｉｅｎｓｉｓ)主要分布于云南西部和西南部ꎬ是云南省 后从大豆(Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ) 及云南产小叶茶( Ｃａｍｅｌｌｉａ
野生茶树资源中分布最广、面积最大、适应性最强 ｓｉｎｅｎｓｉｓ ｖａｒ. ｓｉｎｅｎｓｉｓ)中分离得到ꎮ 目前为止ꎬ关于
的一个茶树种群资源 ( 侯宽昭ꎬ１９９８ꎻ 段志芬等ꎬ 该内生真菌 Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ ｔｅｃｔｏｎｉｇｅｎａ 的研究主要集中
２０１９ꎻ王新超等ꎬ２０２２ꎻ唐小艳等ꎬ２０２２)ꎮ 作为栽培 于种类鉴定ꎬ对其次生代谢产物的研究未见报道ꎮ
茶树的重要野生近缘植物ꎬ大理茶具有进化上原 本研究采用硅胶、大孔吸附树脂 Ｄｉａｉｏｎ ＨＰ２０、葡聚
始、抗逆性强、含有特异生化成分等特性ꎬ是极为宝 糖凝胶 ＬＨ￣２０ 等柱层析方法ꎬ结合 ＭＳ 和 ＮＭＲ 波
贵的茶树遗传资源ꎬ对于茶树品种的遗传改良等具 谱技术手段ꎬ对香竹箐 １ 号古树大理茶“ 锦秀茶
有重要意义(杨盛美等ꎬ２０２０ꎻ李荣姣等ꎬ２０２０)ꎮ 云 祖”健康枝条中优势内生真菌 Ｄ. ｔｅｃｔｏｎｉｇｅｎａ 大米
南省凤庆县小湾镇香竹箐 １ 号古茶树“锦秀茶祖” 固态发酵提取物中的次生代谢产物进行分离鉴
是优质的大理茶资源ꎬ被认为是世界上现存最古 定ꎬ以期为该菌株活性天然产物的进一步挖掘和
老、最粗大的栽培型古茶树(杨崇仁等ꎬ２０２１)ꎮ “锦 开发利用提供参考依据ꎮ
秀茶祖”至今常年枝繁叶茂ꎬ提示其体内可能拥有
较为完备的微生态系统ꎬ对增强其环境适应性发挥 １ 材料与方法
着重要作用ꎮ 研究发现源自“锦秀茶祖” 健康枝叶
的内生真菌群落表现出较高的物种丰富度、多样性 １.１ 实验材料
和均匀度ꎬ且大多数内生真菌普遍具有较强的植物 供试内生真菌菌株分离自云南省凤庆县小湾
病原 真 菌 拮 抗 活 性 ( 陈 肖 学ꎬ ２０１９ꎻ Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ 镇香竹箐 １ 号古树大理茶健康无症状的幼嫩枝
２０１９ꎻ陈建英等ꎬ２０２０)ꎬ 同时也发现 间 座 壳 菌 科 条ꎬ经形态鉴别和分子生物学鉴定为间座壳菌科

(Ｄｉａｐｏｒｔｈａｃｅａｅ ) 间 座 壳 属 ( Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ ) 真 菌 Ｄ. 间座壳属 Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ ｔｅｃｔｏｎｉｇｅｎａ(Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１９)ꎬ
ｔｅｃｔｏｎｉｇｅｎａ 为“锦秀茶祖”枝条中的优势内生真菌之 冻存于实验室－８０ ℃ 超低温冰箱中ꎮ

一(陈肖学ꎬ２０１９ꎻＣｈｅｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１９)ꎮ １.２ 实验试剂和仪器
已有研究表明ꎬ间座壳属真菌在世界范围内 试剂:甲醇( 天津市大茂化学试剂厂ꎬ中国)、
分布广泛(杨琴ꎬ２０１９ꎻ龙慧ꎬ２０２０)ꎬ从该属真菌中 氯仿(天津市富宇精细化工有限公司ꎬ中国)、乙酸
已发现有聚酮类、生物碱类、萜类、蒽醌类等结构 乙酯(云南汕滇药业有限公司ꎬ中国)ꎬ以上试剂均
新颖的次生代谢产物ꎬ它们具有显著的抗肿瘤、抗 为 化 学 纯ꎻ Ｄｉａｉｏｎ ＨＰ２０ ( Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ Ｃｈｅｍｉｃａｌ

菌、抗 高 脂 血 症 等 生 物 活 性 ( 蔡 佳 等ꎬ ２０２１ꎻ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ)ꎻ２００ ~ ３００ 目柱层析硅胶( 青岛海洋化
Ｎａｇａｒａｊａｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２１ꎻＳｕｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２１ꎻＸｕ ｅｔ ａｌ.ꎬ 工 有 限 公 司ꎬ 中 国 )ꎻ Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０ ( ＧＥ
２０２１)ꎮ 此 外ꎬ 该 属 真 菌 还 可 用 于 瑞 香 科 Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅꎬ 美 国 )ꎮ 仪 器: Ｂｒｕｋｅｒ ＤＲＸ￣４００ 和
(Ｔｈｙｍｅｌａｅａｃｅａｅ) 土沉香( Ａｑｕｉｌａｒｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ) 木材的 Ｂｕｒｋｅｒ ＤＲＸ￣５００ 超导核磁共振仪( Ｂｒｕｋｅｒ 公司ꎬ德
菌纹形 成 ( 何 海 珊 等ꎬ２０１９)ꎮ ２０１７ 年ꎬ Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ 国 )ꎻ ＡＰＩ ＱＳＴＡＲ Ｐｕｌａｒ￣１ 质 谱 仪 ( Ａｐｐｌｉｅｄ
ｔｅｃｔｏｎｉｇｅｎａ 首 次 从 泰 国 北 部 的 柚 木 ( Ｔｅｃｔｏｎａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓꎬ 美 国 )ꎻ Ａｇｉｌｅｎｔ Ｇ６２３０ ＴＯＦ 质 谱 仪