Page 86 - 《广西植物》2023年第7期
P. 86
１ ２ ５ ４ 广 西 植 物 ４３ 卷
(Ａｐｐｌｉｅｄ Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓꎬ美国)ꎻ超净工作台
(苏净集团苏州安泰空气技术有限公司ꎬ中国)ꎻ ２ 结果与分析
ＨＶＥ￣５０ＫＢ 高压蒸汽灭菌锅( 华粤行仪器有限公
司ꎬ中国)ꎻＰＱＸ￣３０８Ｄ 多段可编程人工气候箱( 宁 从内生真菌 Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ ｔｅｃｔｏｎｉｇｅｎａ 大米固态发
波东南仪器有限公司ꎬ中国)ꎻＣＰ２２４Ｃ 型电子天平 酵提取物中分离得到 ４ 个化合物ꎬ经 １Ｄ￣ＮＭＲ、２Ｄ￣
[奥豪斯仪器( 上海) 有限公司ꎬ中国]ꎻ超纯水仪 ＮＭＲ 和 ＨＲＭＳ 分析ꎬ化合物 １ 鉴定为新的四氢￣β￣
(Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅꎬ德国)ꎻ电热恒温水浴锅( 山西省 咔啉二酮哌嗪ꎬ３ 个已知化合物分别鉴定为 ｔｒａｎｓ￣
水文医疗器械厂ꎬ中国)ꎻＮ￣１００１ 型 ＥＹＥＬＡ 旋转蒸 ｃｙｃｌｏ￣(Ｄ￣ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎｙｌ￣Ｌ￣ｔｙｒｏｓｙｌ)(２)( Ｉｖａｎｏｖａ ｅｔ ａｌ.ꎬ
发仪(日本东京理化器械有限公司ꎬ日本)ꎮ ２０１３)、 １Ｈ￣吲 哚￣３￣羧 酸￣２ꎬ ３￣二 羟 基 丙 酯 ( １Ｈ￣
１.３ 实验方法 ｉｎｄｏｌｅ￣３￣ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ ａｃｉｄ￣２ꎬ ３￣ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ ｅｓｔｅｒ )
将菌株 Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ ｔｅｃｔｏｎｉｇｅｎａ 接到 ＰＤＡ 培养基 (３) ( Ｓｕｖｏｒｏｖ ＆ Ｇｏｌｕｂｅｖꎬ １９６７) 和 Ｎ￣羟乙基￣２￣乙
上进行活化ꎬ用灭菌后的打孔器切取菌饼接入 １００ 酰基吡咯( Ｎ￣ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ￣２￣ａｃｅｔｙｌｐｙｒｒｏｌｅ) (４) ( Ｚｏｕ
ｍＬ ＰＤＢ 培养基置于摇床上ꎬ在 ２７ ℃ 、１４０ ｒｍｉｎ ￣１ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１３)ꎮ
＋
条件下培养 ７ ｄꎮ 吸取 ５ ｍＬ 发酵液加至 ２５０ ｍＬ 化合物 １ 为无定形白色粉末ꎬＥＳＩ ￣ＭＳ 质谱显
＋
＋
发酵瓶中ꎬ每瓶大米固体培养基( 大米 ３０ ｇꎬ蒸馏 示其准分子离子峰 ｍ / ｚ ３８２ [ Ｍ ＋Ｎａ] ꎬＨＲ￣ＥＳＩ ￣
水 ４５ ｍＬ)合计 １６ ｋｇ 于 ２７ ℃ 条件下静止培养 ４０ ＭＳ 质谱显示准分子离子峰 ｍ / ｚ ３８２.１５２ ７ [ Ｍ ＋
１３
＋
ｄꎮ 将已发酵的大米发酵物转移至适当容器中ꎬ用 Ｎａ] (ｃａｌｃｄꎬ ３８２.１５２ ６)ꎮ 经 Ｃ￣ＮＭＲ 和 ＤＥＰＴ 分
适量乙酸乙酯浸泡并超声辅助提取 ５ 次ꎬ合并滤 析ꎬ化合物 １ 中 ２２ 个碳信号ꎬ其中包括 １ 个伯碳
液ꎬ浓缩得到乙酸乙酯提取物(２９７.８２ ｇ)ꎻ滤渣用 (ＣＨ )、２ 个仲碳( ＣＨ )、１２ 个叔碳( ＣＨ)、７ 个季
３
２
适量甲醇浸提 ３ 次ꎬ合并滤液浓缩得到甲醇提取 碳(Ｃ)ꎬ推测化合物 １ 的分子量为 ３５９ꎬ分子式为
物(２ ０２９.１４ ｇ)ꎮ Ｃ Ｈ Ｎ Ｏ ꎬ不饱和度为 １４ꎮ
２２
３
２１
２
１ Ｈ￣ＮＭＲ 谱显示ꎬ化合物 １ 含有 １ 个 １ꎬ２￣二取
乙酸乙酯部分经硅胶柱层析(６３ ｃｍ×９.５ ｃｍ)ꎬ
用石油醚 ∶ 乙酸乙酯(８０ ∶ １→１ ∶ １)、氯仿 ∶ 甲醇 代苯 [ δ: ７. １６ ( １ＨꎬｄꎬＪ ＝ ７. ８ ＨｚꎬＨ￣１２)ꎬ ６. ９５
(８０ ∶ １→０ ∶ １)进行梯度洗脱ꎬ经 ＴＬＣ 检测合并相 (１ＨꎬｔꎬＪ ＝ ７.０ ＨｚꎬＨ￣１３)ꎬ ７.０８(１ＨꎬｍꎬＨ￣１４)ꎬ
同组 分ꎬ 得 到 Ｆｒ. １ ~ Ｆｒ. １６ꎮ Ｆｒ. １５ ( １９. ８７ ｇ) 经 ７.２５(１ＨꎬｄꎬＪ ＝ ８.１ ＨｚꎬＨ￣１５)] 和 １ 个 Ａ Ｂ 偶合
２ ２
Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０ 柱(５０ ｃｍ×８ ｃｍ) 层析ꎬ以 １００％甲 系统的单取代苯质子信号 [δ: ７.０８(５ＨꎬｍꎬＨ￣１８ꎬ
醇作 为 洗 脱 剂 进 行 洗 脱ꎬ 合 并 后 得 到 ３ 个 组 分 １９ꎬ２０ꎬ２１ꎬ２２)]ꎬ３ 个次甲 基 质 子 信 号 [ δ: ５. ７４
(Ｆｒ.１５－１~ Ｆｒ.１５－３)ꎮ Ｆｒ.１５－２(１５.２５ ｇ) 经硅胶柱 (１ＨꎬｄｄꎬＪ ＝ ７.０ꎬ３.８ ＨｚꎬＨ￣３)ꎬ４. ４５ ( １ＨꎬｔꎬＪ ＝
(５０ ｃｍ×４.８ ｃｍ)层析ꎬ用氯仿 ∶ 甲醇 ∶ 水(６０ ∶ １ ∶ ０ ３.８ ＨｚꎬＨ￣６)ꎬ ４.１１(１ＨꎬｄｄꎬＪ ＝ １１.８ꎬ４.１ ＨｚꎬＨ￣
→８ ∶ ２ ∶ ０.２)进行洗脱ꎬ合并得到 ８ 个组分(Ｆｒ.１５－２ ９)]ꎬ２ 个亚甲基质子信号 [ δ: ２.７０(２ＨꎬｄｄꎬＪ ＝
－１~ Ｆｒ.１５－２－８)ꎮ Ｆｒ.１５－２－２(２.２８ ｇ) 经 Ｓｅｐｈａｄｅｘ １４.８ꎬ４.２ ＨｚꎬＨ￣１０)ꎬ２. ９７ ( ２ＨꎬｄｄꎬＪ ＝ １３. ９ꎬ４. ９
ＬＨ￣２０ 柱(４５ ｃｍ×４ ｃｍ)层析ꎬ用 １００％甲醇洗脱ꎬ得 ＨｚꎬＨ￣１６)]ꎬ１ 个与叔碳相连的甲基质子信号 [ δ:
１３
到化合物 １(９.０ ｍｇ)ꎮ 组分 Ｆｒ.１５－２－４(６.９０ ｇ) 经 １.４８(３ＨꎬｄꎬＪ ＝ ６.９ ＨｚꎬＨ￣１′)]ꎮ Ｃ￣ＮＭＲ 谱除显
Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０ 柱(５５ ｃｍ×４ ｃｍ) 层析ꎬ用 １００％甲 示除两组苯环碳信号外ꎬ还显示有 ２ 个羰基季碳
醇洗脱ꎬ得到化合物 ２(１１.０ ｍｇ)和 ３(１３.０ ｍｇ)ꎮ [δ: １６４.５(Ｃ￣５)ꎬ１６７.９(Ｃ￣８)]ꎬ２ 个双键季碳 [ δ:
甲醇部分经 Ｄｉａｉｏｎ ＨＰ２０ 柱(６０ ｃｍ× ７.５ ｃｍ) １３２.５(Ｃ￣２)ꎬ１０５.２(Ｃ￣１１)]ꎬ３ 个叔碳 [δ: ４５.８(Ｃ￣
层析ꎬ水洗除杂后依次用 ４０％、６０％、８０％、１００％甲 ３)ꎬ５６.１( Ｃ￣６)ꎬ ５２.２( Ｃ￣９)]ꎬ２ 个仲碳 [ δ: ２５.９
醇进行 洗 脱ꎬ 合 并 得 到 ４ 个 组 分 ( Ｆｒ. １ ~ Ｆｒ. ４)ꎮ (Ｃ￣１０)ꎬ３９.６( Ｃ￣１６)] 和 １ 个甲基碳信号 δ １７.５
Ｃ
１
１
Ｆｒ.１ 经 Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０ 柱 层 析ꎬ 用 １００％ 甲 醇 洗 (Ｃ￣１′)ꎮ 通过 ＨＳＱＣ 和 Ｈ￣ Ｈ ＣＯＳＹ 谱分析ꎬ将化
脱ꎬ得到 ３ 个组分(Ｆｒ.１－１ ~ Ｆｒ.１－３)ꎮ 其中 Ｆｒ.１－２ 合物 １ 的质子信号与碳信号进行一一归属(表 １)ꎬ
(９.３９ ｇ)经硅胶柱(５０ ｃｍ× ４ ｃｍ) 层析ꎬ用氯仿 ∶ 进一步确定了结构中含有 １ 个 １ꎬ２￣二取代苯环和
甲醇(３０ ∶ １、２０ ∶ １) 和 １００％甲醇梯度洗脱ꎬ得到 １ 个单取代苯环ꎬ并观察到 δ ４.１１ / δ ５２.２( ＣＨ￣９)
Ｈ
Ｃ
化合物 ４(５.０ ｍｇ)ꎮ 与 δ ２.７０ / δ ２５.９(ＣＨ ￣１０)相连ꎬ δ ４.４５ / δ ５６.１
Ｃ
Ｈ
Ｃ
Ｈ
２
