Page 62 - 广西植物2024年1期

５ ８ 广 西 植 物 ４４ 卷
切片技术观察花芽分化不同阶段形态结构ꎬ采用 微镜观察并拍照记录ꎮ
酶联免疫吸附法对四季花金花茶同一时间不同花 同时ꎬ对花芽分化至花朵开放的时间及枝条
发育时期叶片及年生长周期有花芽和无花芽叶片 上各叶腋的成花规律进行观测ꎮ
内源激素含量进行测定ꎬ拟探讨以下问题:(１) 四 １.２.２ 叶片内源激素的测定 同一时间不同花发
季花金花茶花芽分化进程如何ꎻ(２) 叶片内源激素 育时期叶片采样:春季四季花金花茶花芽陆续开
含量与花发育之间存在何种关系ꎮ 本研究结果可 始分化ꎬ主要集中在顶芽ꎮ 于 ２０２１ 年 ６ 月 １５ 日分
为该物种持续开花机理的阐明提供参考依据ꎮ 同 别对同一植株枝条顶部着生花芽或花的叶片进行
时ꎬ该物种可以在同一个时间点取不同花发育阶 采样ꎬ分为 ５ 个时期:(Ｉ)前分化期ꎻ( Ⅱ) 花芽形态
段的材料ꎬ确保环境因子一致ꎬ对于花器官发育与 分化期ꎻ( Ⅲ) 花蕾期ꎻ( Ⅳ) 开花期ꎻ( Ⅴ) 凋谢期

叶片内源激素关系的探讨更具有参考意义ꎮ (图 １)ꎬ每株采集叶片 ４ ~ ６ 片ꎬ重复 ３ 次ꎮ 采集的
叶片放在冰盒里带回实验室ꎬ立即用液氮冷冻ꎬ存
１ 材料与方法 放在－８０ ℃ 超低温冰箱保存ꎬ用于测定内源激素

含量ꎮ
１.１ 试验材料 年生长周期有花芽叶片 和 无 花 芽 叶 片 的 采
试验地位于中国科学院桂林植物园金花茶种 样:四季花金花茶成年植株每年 １０ 月抽梢ꎬ翌年
质资源圃(１１０°１８′１″ Ｅ、２５°４′１２″ Ｎ )ꎬ该区域属于中 ３—４ 月新生枝条开始着生花芽ꎮ 试验于 ２０２０ 年 ４
亚热带季风气候ꎬ年平均温度为 １９.１２ ℃ꎬ年均降水 月至 ２０２１ 年 ３ 月每月月初ꎬ对同一植株一年生枝
量为 １ ８９０ ｍｍꎬ年日照时数平均为 １ ４８７ ｈꎮ 上层乔 条上着生花芽的叶片(有花芽叶片) 和相同位置未
木树种主要有马尾松( Ｐｉｎｕｓ ｍａｓｓｏｎｉａｎａ)、三角枫 着生花芽的叶片( 无花芽叶片) 分别进行采样ꎬ每
( Ａｃｅｒ ｂｕｅｒｇｅｒｉａｎｕｍ ) 和 中 华 杜 英 ( Ｅｌａｅｏｃａｒｐｕｓ 个处理采集叶片 ４ ~ ６ 片ꎬ重复 ３ 次ꎮ 采集的样品
ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ)等ꎮ 试验材料为引种栽培的四季花金花 放在冰盒带回实验室ꎬ立即用液氮冷冻ꎬ存放在－
茶成年植株ꎬ１５ ~ ２０ 年生ꎬ长势良好ꎮ 四季花金花 ８０ ℃ 超低温冰箱保存ꎬ用于测定内源激素含量ꎮ
茶一年都有花芽分化ꎬ其中 ３—５ 月(花芽分化主要 叶片内源激素的测定:采用酶联免疫吸附法
集中在顶芽) 和 ７—８ 月( 花芽分化主要集中在侧 测定同一时间不同花发育时期及年生长周期有花
芽)为 ２ 个花芽分化较为集中阶段ꎬ以 ３—５ 月分化 芽和无 花 芽 叶 片 内 的 脱 落 酸 ( ＡＢＡ)、 吲 哚 乙 酸
的花芽数最多ꎬ１１ 月至翌年 ２ 月可见零星花芽ꎮ 选 (ＩＡＡ)、赤霉素( ＧＡ ) 和玉米素核苷( ＺＲ) 含量ꎮ
３
择苗圃内生长健壮、树势一致、无病虫害的 １０ 株四 试验步骤如下:(１)准确称取存放在－８０ ℃ 超低温
季花金花茶作为观测和采样对象ꎬ每株分别选取 冰箱保存的冷冻样品 ０.５ ｇꎬ加入 ２ ｍＬ ８０％甲醇溶
东、南、西、北 ４ 个不同方位具有代表性的枝条ꎬ对枝 液ꎬ在冰浴条件下研磨成匀浆ꎬ转入 １０ ｍＬ 的离心
条上的顶芽和侧芽进行挂牌标记ꎬ观察其发育过 管ꎬ用 １ ｍＬ 提取液将研钵冲洗干净ꎬ一并转入离
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程ꎬ并应试验要求进行采样ꎮ 心管中摇匀ꎬ４ ℃ 静置提取 ４ ｈꎬ３ ５００ ｒｍｉｎ 离心
１.２ 试验方法 ８ ｍｉｎꎬ取上清液ꎮ 沉淀中再次加入 １ ｍＬ 提取液ꎬ
￣１
１.２.１ 花芽分化形态结构观察 石蜡切片法观察: 摇匀ꎬ４ ℃ 静置提取 １ ｈꎬ３ ５００ ｒｍｉｎ 离心 ８ ｍｉｎꎬ
从 ２０２１ 年 ２ 月 ２７ 日开始ꎬ对 １ 年生枝条顶端刚刚 合并两次的上清液ꎬ并记录总体积ꎮ (２) 上清液过
开始分化的花芽挂牌标记ꎬ每 ７ ｄ 采集不同发育阶 Ｃ￣１８ 固相萃取柱ꎬ将过柱后的样品转入 ５ ｍＬ 离心
段的花芽 ３０ 个ꎬ２０２１ 年 ４ 月 ３ 日花芽分化完成后 管ꎬ氮气吹干后ꎬ用样品稀释液定容至 ２ ｍＬꎮ (３)
停止 采 集ꎮ 采 集 的 花 芽 放 置 于 装 有 ＦＡＡ 溶 液 样品测定步骤按照 ＥＬＩＳＡ 试剂盒说明书操作ꎬ用
(７０％乙醇 ∶ 福尔马林 ∶ 冰醋酸 ＝ ９０ ∶ ５ ∶ ５) 的 酶标仪(Ｂｉｏ Ｔｅｋ ＥＬＸ ８０８)测定标准品和各样品在

玻璃瓶中固定 ２４ ｈ 以上ꎬ后置于 ４ ℃ 冰箱保存ꎮ ４５０ ｎｍ 处的光密度( ｏｐｔｉｃａｌ ｄｅｎｓｉｔｙꎬＯＤ) 值ꎬ根据
参照李和平(２００９) 的常规石蜡切片制作方法ꎬ首 标准曲线计算各样品内源激素含量ꎮ
先对采集的样品进行乙醇逐级脱水、透明、浸蜡、 １.３ 数据统计与分析
包埋、切片、展片、粘片及烤片ꎬ然后脱蜡、复水、番 利用 Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ ２０１０ 及 Ｏｒｉｇｉｎ ２０１５ 软件
红－固绿染色、脱水、透明、封片ꎬ最后使用光学显 进行数据处理及作图ꎬ 采用单因素方差分析法比