Page 103 - 《广西植物》2024年第7期

７ 期 李雅暄等: 不同山茶种质组培条件下染色体倍性的维持与变化 １ ３ ０ ３

表 ２ 山茶种质染色体倍性流式鉴定
Ｔａｂｌｅ ２ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ｐｌｏｉｄｙ ｏｆ Ｃａｍｅｌｌｉａ ｇｅｒｍｐｌａｓｍ ｂｙ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ
编号 种质名称 倍性
ＦＣＭ￣１ ＦＣＭ￣２ ＦＣＭ￣３
Ｎｕｍｂｅｒ Ｎａｍｅ ｏｆ ｇｅｒｍｐｌａｓｍ Ｐｌｏｉｄｙ
１ 耐冬(对照) Ｃａｍｅｌｌｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ (ｃｏｎｔｒｏｌ) — — — 二倍体 Ｄｉｐｌｏｉｄ
２ 单体红山茶 Ｃ. ｕｒａｋｕ ２.０９ ２.１１ ２.０６ 四倍体 Ｔｅｔｒａｐｌｏｉｄ
３ 浙江红山茶 Ｃ. ｃｈｅｋｉａｎｇｏｌｅｏｓａ ０.９６ ０.９９ １.０３ 二倍体 Ｄｉｐｌｏｉｄ
４ 滇山茶 Ｃ. ｒｅｔｉｃｕｌａｔａ １.０８ １.０６ １.１０ 二倍体 Ｄｉｐｌｏｉｄ
５ 大花红山茶 Ｃ. ｍａｇｎｉｆｌｏｒａ ３.３０ ３.２２ ３.３４ 六倍体 Ｈｅｘａｐｌｏｉｄ
６ 峨眉红山茶 Ｃ. ｏｍｅｉｅｎｓｉｓ １.０９ １.０２ １.１２ 二倍体 Ｄｉｐｌｏｉｄ
７ 全缘红山茶 Ｃ. ｓｕｂｉｎｔｅｇｒａ ０.９８ ０.９６ １.０１ 二倍体 Ｄｉｐｌｏｉｄ
８ 南山茶 Ｃ. ｓｅｍｉｓｅｒｒａｔａ ４.９０ ５.１１ ５.０３ 十倍体 Ｄｅｃａｐｌｏｉｄ
９ 尖萼红山茶 Ｃ. ｅｄｉｔｈａｅ １.１７ １.１９ １.０９ 二倍体 Ｄｉｐｌｏｉｄ
１０ 山手 Ｃ. ｊａｐｏｎｉｃａ ‘Ｓｈａｎｓｈｏｕ’ １.２４ １.３１ １.３３ 二倍体 Ｄｉｐｌｏｉｄ
１１ 金蝶飞叶 Ｃ. ｊａｐｏｎｉｃａ ‘Ｊｉｎｄｉｅｆｅｉｙｅ’ ２.２１ ２.３１ ２.３３ 四倍体 Ｔｅｔｒａｐｌｏｉｄ

表 ３ 不同浓度和不同时间处理下耐冬的死亡率 比ꎬ流式细胞术由于准确性较高、检测速度较快等

Ｔａｂｌｅ ３ Ｄｅａｔｈ ｒａｔｉｏ ｏｆ Ｃａｍｅｌｌｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ ｕｎｄｅｒ 特性被广泛推广ꎬ适用于大规模组织样品的倍性
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｔｉｍｅ 检测分析ꎬ有利于高效获得染色体倍性的变化信

秋水仙素浓度 处理时间 处理个数 死亡个数 半致死条件 息(瑞菲尔努纳兹等ꎬ ２００５ꎻ李靖等ꎬ ２００８)ꎮ 山
Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｈａｌｆ￣ｄｅａｔｈ
Ｔｒｅａｔｅｄ Ｄｅａｔｈ 茶属植物的组织中含有多种次生代谢物质ꎬ其中
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ
￣１ ｎｕｍｂｅｒ ｃｏｕｎｔ
(ｍｇＬ ) (ｄ) (ｄ) 单宁化合物在流式分析过程中能够跟荧光染料
１０ １０ ３２ ３ ~ ４８ (如碘化丙啶)结合ꎬ造成较强的背景信号( Ｈｕａｎｇ
ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１３)ꎮ 在山茶属植物中ꎬ通过优化细胞核
１５ ３２ ４
裂解液和选取次生代谢物含量低的幼嫩组织ꎬ流
２０ ３２ ３
２０ １０ ３２ ４ ~ ３５ 式细胞分析通常能解决背景信号的问题(Ｈｕａｎｇ ｅｔ
ａｌ.ꎬ ２０１３)ꎮ 但是ꎬ一些山茶属植物材料( 油茶、茶
１５ ３２ ７
２０ ３２ ９ 梅等)的单宁类物质含量较高ꎬ使得在流式分析的
重复性不高( 贾文庆ꎬ２０１５)ꎮ Ｗｅｂｅｒ 等(２００８) 研
３０ １０ ３２ ７ ~ ２７
究发现ꎬ植物愈伤组织均为未分化的、较为幼嫩的
１５ ３２ ９
细胞团ꎬ其中次生代谢物含量较少ꎬ有利于开展流
２０ ３２ １１
式细胞仪检测ꎮ 本试验使用脱分化的愈伤组织进
行流式细胞仪分析ꎬ能获得重复性较高的细胞核
倍体ꎬ大部分愈伤组织和芽组织中倍性呈现出非
分离效果ꎬ增强了检测的稳定性ꎮ 因此ꎬ本研究方
整倍性的梯度性变化( 图 ２:Ｂ)ꎬ其中最小倍性为 案减少了杂质对山茶倍性测定的影响ꎬ避免了山
１.２ 倍ꎬ最大倍性为 ３.２ 倍ꎮ 这说明秋水仙素处理 茶新鲜组织中单宁等物质的背景荧光ꎬ提高了实
造成了耐冬染色体倍性的不稳定变异ꎬ但是整倍
验的准确性与可重复性ꎮ
性加倍或者减少的事件出现的情况较低ꎮ Ｓｙｅｅｄ 等(２０２１)研究表明组织培养及其再生
的过程能够造成染色体的断裂、重组等ꎬ从而影响
３ 讨论与结论 染色 体 倍 性 的 变 异ꎮ 如 Ａｌｉ 等 ( ２０１７ ) 在 香 芹
(Ｃｏｒｉａｎｄｒｕｍ ｓａｔｉｖｕｍ) 中的研究发现ꎬ基因组大小
３.１ 山茶属植物组培再生和染色体倍性维持 在体胚诱导组织与种子萌发苗之间存在较大变
在染色体倍性的鉴定中ꎬ与核型鉴定方法相 异ꎬ说明培养基条件能够影响基因组的稳定性ꎮ