Page 92 - 《广西植物》2024年第7期
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１ ２ ９ ２ 广 西 植 物 ４４ 卷
表 １ ｑＲＴ￣ＰＣＲ 引物序列
Ｔａｂｌｅ １ Ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｑＲＴ￣ＰＣＲ
基因 上游引物 (５′￣３′) 下游引物 (５′￣３′)
Ｇｅｎｅ Ｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒ (５′￣３′) Ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ (５′￣３′)
Ｇｍβ￣Ｔｕｂｕｌｉｎ ＧＧＡＡＧＧＣＴＴＴＣＴＴＧＣＡＴＴＧＧＴＡ ＡＧＴＧＧＣＡＴＣＣＴＧＧＴＡＣＴＧＣ
ＧｍＥＸＰＢ５ ＧＣＴＣＣＣＴＴＣＣＴＣＴＴＧＴＴＴＣＡＡＴＣＣＣ ＣＡＡＧＣＡＣＣＡＣＣＴＴＣＡＣＴＴＣＣＡＴＣＣ
ＧｍＥＸＰＢ７ ＧＡＡＧＧＧＴＧＴＧＧＴＧＣＧＴＧＣＴＡＣ ＡＧＡＴＣＧＡＡＧＴＧＴＧＴＴＴＧＧＴＣＡＧＡＧＧ
表 ２ 大豆 ＧｍＥＸＰＢ５ 和 ＧｍＥＸＰＢ７ 基本信息及特征
Ｔａｂｌｅ ２ Ｂａｓｉｃ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｓｏｙｂｅａｎ ＧｍＥＸＰＢ５ ａｎｄ ＧｍＥＸＰＢ７
氨基酸数 分子量
染色体位置 等电点 不稳定系数 亲水性指数 亚细胞定位
基因 Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ Ｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃ Ｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ Ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ Ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ
Ｇｅｎｅ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ｗｅｉｇｈｔ
ｌｏｃａｔｉｏｎ ｐｏｉｎｔ ｉｎｄｅｘ ｉｎｄｅｘ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ
(ａａ) (ｋＤ)
ＧｍＥＸＰＢ５ ｃｈｒ１０ ２７２ ２９.０７ ７.５１ ２９.２８ －０.０１３ 细胞壁
Ｃｅｌｌ ｗａｌｌ
ＧｍＥＸＰＢ７ ｃｈｒ１２ ２６７ ２９.０９ ８.６６ ３１.０８ －０.１３２ 细胞壁
Ｃｅｌｌ ｗａｌｌ
氨基酸ꎮ ＧｍＥＸＰＢ５ 蛋白分子量为 ２９.０７ ｋＤꎬ理论 它们 位 于 ＧｍＥＸＰＢ５ 蛋 白 序 列 Ｎ 端ꎻ Ｍｏｔｉｆ ８ 和
等 电 点 为 ７. ５１ꎻ ＧｍＥＸＰＢ７ 蛋 白 分 子 量 为 ２９. ０９ Ｍｏｔｉｆ ６ 为 ＧｍＥＸＰＢ７ 蛋白所特有ꎬ它们同样也位于
ｋＤꎬ理论等电点为 ８.６６ꎮ ＧｍＥＸＰＢ５ 和 ＧｍＥＸＰＢ７ ＧｍＥＸＰＢ７ 蛋白序列 Ｎ 端ꎮ
蛋白的不稳定系数均小于 ４０ꎬ亲水性指数均为负 ２.１.３ 植物 ＥＸＰＢ 蛋白系统进化分析 将 １６ 种植
值ꎬ表明它们均为稳定的亲水蛋白ꎮ 亚细胞定位 物中的 ３６ 个 ＥＸＰＢ 蛋白构建系统进化树ꎮ 由图 ３
预测结果显示ꎬＧｍＥＸＰＢ５ 和 ＧｍＥＸＰＢ７ 蛋白均定 可知ꎬＧｍＥＸＰＢ５ 蛋白与鹰嘴豆 ＣａＥＸＰＢ１５ 蛋白亲
位于细胞壁中ꎮ 缘关系最近ꎬＧｍＥＸＰＢ７ 蛋白则与密花豆、赤豆和豇
２.１.２ ＧｍＥＸＰＢ５ 和 ＧｍＥＸＰＢ７ 蛋白保守结构域及 豆的 ＥＸＰＢ３ 蛋白有着较高的亲缘关系ꎮ 此外ꎬ除拟
保守基 序 ( Ｍｏｔｉｆ) 分 析 ＧｍＥＸＰＢ５ 和 ＧｍＥＸＰＢ７ 南芥外其他双子叶植物 ＥＸＰＢ１ 蛋白均处于同一分
蛋白的氨基酸序列如图 １ 所示ꎬ它们的同源性为 支ꎬ说明同一基因在不同物种中仍具有较高同源
４５.７９％ꎮ 在 ＧｍＥＸＰＢ５ 和 ＧｍＥＸＰＢ７ 蛋白序列的 性ꎬ但相同植物中的 ＥＸＰＢ 蛋白则存在较大差异ꎬ如
Ｎ 端均含有一段信号肽序列[ＧｍＥＸＰＢ５(第 １ 到第 ＧｍＥＸＰＢ５ 蛋白和 ＧｍＥＸＰＢ７ 蛋白亲缘关系较远ꎮ
２９ 位氨 基 酸)ꎻ ＧｍＥＸＰＢ７ ( 第 １ 到 第 ３１ 位 氨 基 ２.２ ＧｍＥＸＰＢ５ 和 ＧｍＥＸＰＢ７ 在大豆根、茎和叶中
酸)]ꎬ它们能够引导 ＥＸＰＢ 蛋白定位于细胞壁ꎮ 的表达分析
此外ꎬＧｍＥＸＰＢ５ 和 ＧｍＥＸＰＢ７ 蛋白均含有一个保 ｑＲＴ￣ＰＣＲ 结 果 ( 图 ４ ) 显 示ꎬ ＧｍＥＸＰＢ５ 和
守的由 ８１ 个氨基酸残基组成的 ＤＰＢＢ＿１ 结构域 ＧｍＥＸＰＢ７ 在大豆根、茎和叶中均有表达ꎬ但它们
[ＧｍＥＸＰＢ５(第 ８３ 到第 １６３ 位氨基酸)ꎻＧｍＥＸＰＢ７ 在根和叶中的表达量显著高于茎中的表达量ꎮ
(第 ７８ 到第 １５８ 位氨基酸)]ꎬ此结构域是 ＥＸＰ 家 ２.３ ＧｍＥＸＰＢ５ 和 ＧｍＥＸＰＢ７ 非生物胁迫表达分析
族蛋白的共有结构域ꎮ 对大豆幼苗分别进行盐、干旱和低温胁迫处
蛋白保守基序( Ｍｏｔｉｆ) 分析结果如图 ２ 所示ꎬ 理ꎮ ｑＲＴ￣ＰＣＲ 检测结果如图 ５ 所示ꎬ盐胁迫处理
ＧｍＥＸＰＢ５ 和 ＧｍＥＸＰＢ７ 蛋白共含有 １０ 个 Ｍｏｔｉｆꎮ 后ꎬＧｍＥＸＰＢ５ 的表达量先升高ꎬ处理 １ ｈ 时达到最
其中ꎬ Ｍｏｔｉｆ ３、 Ｍｏｔｉｆ １、 Ｍｏｔｉｆ ５、 Ｍｏｔｉｆ ２、 Ｍｏｔｉｆ ７ 和 大值ꎬ为对照 ０ ｈ 表达量的 ６.９ 倍ꎬ之后下降ꎬ处理
Ｍｏｔｉｆ ４ 为 ＧｍＥＸＰＢ５ 和 ＧｍＥＸＰＢ７ 蛋白共有ꎬ并且 ２４ ｈ 时 与 对 照 ０ ｈ 时 的 表 达 量 已 无 明 显 差 异ꎻ
它们在两个蛋白序列中的分布位置和顺序基本相 ＧｍＥＸＰＢ７ 的表达量在处理后的 １、５、２４ ｈ 时均显
同ꎻＭｏｔｉｆ １０ 和 Ｍｏｔｉｆ ９ 为 ＧｍＥＸＰＢ５ 蛋白所特有ꎬ 著高于对照 ０ ｈ 时的表达量且 ２４ ｈ 时的表达量达
