Page 171 - 《广西植物》2023年第6期
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６ 期 任文静等: 北豆根化学成分及其抗炎活性研究 １ １ ５ ７
１、 ５０ ∶ １、２０ ∶ １、２０ ∶ １、０ ∶ １ꎬＶ/ Ｖ) 梯度洗脱得到
１ 材料与仪器 Ｆｒ. Ｅ１－Ｅ１７ꎮ Ｆｒ. Ｅ６ 经甲醇重结晶得到化合物 １３
(４０.１８ ｍｇ)和化合物 １４(４０.１８ ｍｇ)ꎮ Ｆｒ. Ｈ(３.５ ｇ)
１.１ 药材 经硅胶柱层析ꎬ以石油醚 － 乙酸乙酯系统(１ ∶ ０、
实验用北豆根药材于 ２０１８ 年 １０ 月购自百味 ５０ ∶ １、２０ ∶ １、１０ ∶ １、５ ∶ １、１ ∶ １、０ ∶ １ꎬＶ/ Ｖ)梯度洗
堂 中 药 饮 片 科 技 有 限 公 司 ( 产 地 山 东ꎬ 批 号: 脱得到 Ｆｒ. Ｈ１ －Ｈ２０ꎮ Ｆｒ. Ｈ９ 经高压反相色谱法ꎬ
１８０５０６)ꎬ经山东中医药大学李佳教授鉴定为防己 ４５％甲醇－水系统等度洗脱得化合物 １１(１９.６５ ｍｇꎬ
科蝙蝠葛属植物蝙蝠葛的干燥根茎ꎬ药材标本保 ｔ ＝ １６.０ ｍｉｎ)ꎮ Ｆｒ. Ｉ(０.７ ｇ)通过正相硅胶柱色谱ꎬ
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存于山东中医药大学天然药物实验室ꎮ 采用二氯甲烷－甲醇系统(２００ ∶ １、１５０ ∶ １、１００ ∶ １、
１.２ 仪器和试剂 ５０ ∶ １、２０ ∶ １、１０ ∶ １、０ ∶ １ꎬ Ｖ/ Ｖ) 梯度洗脱得到
Ｂｒｕｋｅｒ ＡＶ￣４００ ( ６００ ＭＨｚ) 核 磁 共 振 波 谱 仪 Ｆｒ. Ｉ１－Ｉ１７ꎮ Ｆｒ. Ｉ１０ 中析出白色片状固体经甲醇反
(德国 Ｂｒｕｋｅｒ 公司)ꎻ６５４０ ＵＨＤ Ｑ￣ＴＯＦ￣ＭＳ 液相色 复重结晶得到化合物 １５(１５.１２ ｍｇ)ꎮ
谱质谱联用仪(美国安捷伦公司)ꎻＡｇｉｌｅｎｔ １２９０ 型 取乙酸乙酯部位浸膏 ２０.０ ｇ 进行硅胶柱色谱
高效液相色谱仪( 美国安捷伦公司)ꎻ艾杰尔 ＦＬ￣ 纯化ꎬ用二氯甲烷－甲醇系统(１ ∶ ０、５０ ∶ １、３０ ∶ １、
Ｈ０５０Ｇ 高压液相制备色谱仪ꎬＩｎｎｏｖａｌ ＯＤＳ￣２ 制备 １５ ∶ １、１０ ∶ １、０ ∶ １ꎬＶ / Ｖ)梯度洗脱ꎬ经 ＴＬＣ 检识ꎬ
柱(１０ ｍｍ × ２５０ ｍｍꎬ５ μｍ) ( 天津博纳艾杰尔科 合并流分得 Ｆｒ. Ｌ－Ｑꎮ Ｆｒ. Ｎ(２.４ ｇ) 通过高压制备
技有限公司)ꎻＡＢ￣８ 型大孔吸附树脂( 上海源叶生 液相色谱(甲醇 ∶ 水 ＝ ３３ ∶ ６７)分离纯化得化合物
物科技有限公司)ꎻＳａｒｔｏ￣ｒｉｕｓ ＢＰ２１１Ｄ 型电子天平 ５(２.０３ ｍｇꎬｔ ＝ ３７.０ ｍｉｎ) 和化合物 ６(１２.７４ ｍｇꎬ
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(德国赛托利斯集团)ꎻ柱层析硅胶、薄层层析硅胶 ｔ ＝ ２２.０ ｍｉｎ)ꎮ Ｆｒ. Ｏ(１２.４ ｇ)经硅胶柱以二氯甲
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(青岛海洋化工厂)ꎻ氘代试剂(萨恩化学技术有限 烷－甲醇系统(１ ∶ ０、１００ ∶ １、８０ ∶ １、５０ ∶ １、４０ ∶ １、
公司)ꎻＮＯ、ＩＬ￣６ 试剂盒( 上海酶联生物科技有限 ３０ ∶ １、０ ∶ １ꎬＶ / Ｖ)梯度洗脱得 Ｆｒ. Ｏ１－Ｏ９ꎮ Ｆｒ. Ｏ２
公司)ꎻ小鼠巨噬细胞 ＲＡＷ２６４.７( 北纳创联生物 (０.３ ｇ) 经过高压制备液相色谱ꎬ以 ３５％甲醇－水
科技有限公司ꎬＢＮＣＣ １０１０２０)ꎮ 系统等度洗脱获得化合物 １(２. ０５ ｍｇꎬｔ ＝ ２６. ０
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ｍｉｎ)、化合物 ３(１.９１ ｍｇꎬｔ ＝ ３０.０ ｍｉｎ)、化合物 ７
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２ 实验方法 (１.８７ ｍｇꎬｔ ＝ １０.０ ｍｉｎ)ꎬ以 ６０％甲醇－水等度洗
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脱获得化合物 １０(１.６３ ｍｇꎬｔ ＝ ３５.０ ｍｉｎ)ꎮ 经高
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２.１ 提取和分离 压反相色谱法(甲醇 ∶ 水 ＝ ２３ ∶ ７７)从 Ｆｒ. Ｏ３(０.４
将 ９.２ ｋｇ 的北豆根药材粉碎成粗粉后ꎬ１０ 倍 ｇ)中分离出化合物 ２(１６.７２ ｍｇꎬｔ ＝ ２７.５ ｍｉｎ) 和
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量甲醇冷浸 ２ 次ꎬ每次 １５ ｄꎮ 将浸提液减压浓缩ꎬ 化合物 ４(１.０１ ｍｇꎬｔ ＝ ３５.９ ｍｉｎ)ꎮ Ｆｒ. Ｏ４(０.６ ｇ)
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得浸膏约 ７００.０ ｇꎬ加适量蒸馏水悬浮ꎬ依次用正己 经高压制备液相色谱( 甲醇 ∶ 水 ＝ ７０ ∶ ３０) 纯化获
烷(４.５ Ｌ)、 乙酸乙酯(４.０ Ｌ)、正丁醇(３.５ Ｌ) 进 得化合物 ９(２.７６ ｍｇꎬｔ ＝ １２.０ ｍｉｎ)ꎮ
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行萃取ꎬ将各级萃取液减压浓缩分别得到正己烷 取正丁醇部位浸膏 ９０.０ ｇꎬ经 ＡＢ￣８ 型大孔吸附
部位 ４９. ８ ｇ、乙 酸 乙 酯 部 位 ２３. ７ ｇ、正 丁 醇 部 位 树脂(１０％、３０％、５０％、７０％、９０％乙醇依次洗脱至接
１２４.７ ｇ 和水部位 ４１７.８ ｇꎮ 近无色)并收集流分ꎬ经减压浓缩得 Ｆｒ. Ｒ－Ｖꎮ Ｆｒ. Ｖ
取正己烷部位浸膏 ４０.０ ｇꎬ经正相硅胶柱色谱ꎬ (０.６ ｇ)经高压制备液相色谱(甲醇 ∶ 水 ＝ ７７ ∶ ２３)
采用正己烷－乙酸乙酯流动相(１ ∶ ０、５０ ∶ １、２０ ∶ １、 纯化获得化合物 ８(３.３５ ｍｇꎬｔ ＝ ３４.０ ｍｉｎ)ꎮ
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１０ ∶ １、５ ∶ １、１ ∶ １、１ ∶ ４、０ ∶ １ꎬＶ/ Ｖ)进行梯度洗脱ꎮ 化合物 １－１５ 的化学结构如图 １ 所示ꎮ
收集的流分经 ＴＬＣ 检识ꎬ合并得 １２ 个组分 Ｆｒ. Ａ－ ２.２ 体外抗炎活性测试
Ｋꎮ 化合物 １２(９.８３ ｍｇ) 经过甲醇反复重结晶从 将 ＲＡＷ２６４.７ 细胞以 １ × １０ 个ｍＬ 密度接
￣１
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Ｆｒ. Ｃ(３.０ ｇ) 中获得ꎮ Ｆｒ. Ｅ(３.０ ｇ) 经过硅胶柱色 种于 ９６ 孔板中ꎬ每孔 １００ μＬꎬ培养 ２４ ｈꎬ加入含药
谱ꎬ以二氯甲烷－甲醇系统(２００ ∶ １、１５０ ∶ １、１００ ∶ 培养基ꎮ 实验组别设置为正常组( 不做处理) 、模
