Page 92 - 《广西植物》2023年第6期

１ ０ ７ ８ 广 西 植 物 ４３ 卷
原核表达的技术成功诱导得到 ＡｈＰＲＫ４￣ＣＤ 纯化
蛋白ꎬ并验证其可以发生磷酸化修饰ꎬ为探究该
蛋白在花生铝胁迫中的调控功能奠定了基础ꎮ

参考文献:

ＢＲＥＤＯＷ Ｍꎬ ＢＥＮＤＥＲ ＫＷꎬ ＪＯＨＮＳＯＮ ＤＡꎬ ｅｔ ａｌ.ꎬ
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化抗体ꎻ ａｎｔｉ￣ｐＴ. 苏氨酸磷酸化抗体ꎻ ａｎｔｉ￣ＧＳＴ. ＧＳＴ 标签 ＲＯＰ１ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｖｉａ ＲｏｐＧＥＦｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｐｏｌａｒｉｚｅｄ
抗体ꎮ 蛋白 ｍａｒｋｅｒ 处蓝色条带表示 ７０ ｋＤ 蛋白位置ꎮ
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ＤＩＮＧ ＹＬꎬ ＬＩ Ｈꎬ ＺＨＡＮＧ ＸＹꎬ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１５. ＯＳＴ１ ｋｉｎａｓｅ
Ｐｈｏｓｐｈｏ￣ｔｙｒｏｓｉｎｅ ａｎｔｉｂｏｄｙꎻ ａｎｔｉ￣ｐＴ. Ｐｈｏｓｐｈｏ￣ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ ａｎｔｉｂｏｄｙꎻ
ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ｆｒｅｅｚｉｎｇ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｂｙ ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ＩＣＥ１ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｉｎ
ａｎｔｉ￣ＧＳＴ. ＧＳＴ￣Ｔａｇ ｍｏｕｓｅ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ. Ｔｈｅ ｂｌｕｅ ｂａｎｄ ｏｆ
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ｔｈｅ ｍａｒｋｅｒ ｉｎｄｉｃａｔｅｓ ｔｈｅ ｌｏｃａｔｉｏｎ ｏｆ ７０ ｋＤ ｐｒｏｔｅｉｎ.
ＤＲＥＲＵＰ ＭＭꎬ ＳＣＨＬÜＣＫＩＮＧ Ｋꎬ ＨＡＳＨＩＭＯＴＯ Ｋꎬ ｅｔ ａｌ.ꎬ
图 ８ ＧＳＴ￣ＡｈＰＲＫ４￣ＣＤ 重组蛋白自磷酸化检测
２０１３. Ｔｈｅ ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ Ｂ￣ｌｉｋｅ ｃａｌｃｉｕｍ ｓｅｎｓｏｒｓ ＣＢＬ１ ａｎｄ
Ｆｉｇ. ８ Ａｕｔｏ￣ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＧＳＴ￣
ＣＢＬ９ ｔｏｇｅｔｈｅｒ ｗｉｔｈ ｔｈｅｉｒ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ＣＩＰＫ２６
ＡｈＰＲＫ４￣ＣＤ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ
ｒｅｇｕｌａｔｅ ｔｈｅ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ＮＡＤＰＨ ｏｘｉｄａｓｅ ＲＢＯＨＦ [Ｊ]. Ｍｏｌ
Ｐｌａｎｔꎬ ６(２): ５５９－５６９.
的成员之一ꎬ具丝氨酸 / 苏氨酸激酶域ꎬ并经预测 ＤＵＣＫＮＥＹ Ｐꎬ ＤＥＥＫＳ ＭＪꎬ ＤＩＸＯＮ ＭＲꎬ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１７. Ａｃｔｉｎ￣
具有磷酸化位点ꎬ为了验证 ＡｈＰＲＫ４ 是否可发生 ｍｅｍｂｒａｎｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ＮＥＴＷＯＲＫＥＤ２ ｉｎ
Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｐｏｌｌｅｎ ｔｕｂｅｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ｐｏｌｌｅｎ
磷酸化及探究 ＡｈＰＲＫ４ 的活性ꎬ本研究采用原核
ｒｅｃｅｐｔｏｒ￣Ｌｉｋｅ ｋｉｎａｓｅ ４ ａｎｄ ５ [Ｊ]. Ｎｅｗ Ｐｈｙｔｏｌꎬ ２１６(４):
表达和亲和柱层析的方法获得 ＡｈＰＲＫ４￣ＣＤ 重组
１１７０－１１８０.
蛋白来探究其生物功能ꎬ在蛋白诱导过程中ꎬ１６ ＨＯＵ ＮＮꎬ ２００９. Ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ａｂｓｃｉｓｉｃ
℃ 条件下可获得较好的诱导效果ꎮ 本研究已成 ａｃｉｄ ａｎｄ ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｙｓｔｅｍ ｏｎ ａｌｕｍｉｎｕｍ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｉｎ
功诱导并纯化得到 ＧＳＴ￣ＡｈＰＲＫ４￣ＣＤ 重组蛋 白ꎬ ｓｏｙｂｅａｎ ( Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ Ｌ.) [ Ｄ ]. Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ: Ｊｉｌｉｎ
体外磷酸化抗体孵育检测 ＡｈＰＲＫ４￣ＣＤ 重组蛋白 Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ. [侯宁宁ꎬ ２００９. 脱落酸和抗氧化系统对大豆
耐铝性的调控机制 [Ｄ]. 长春: 吉林大学.]
可以发生磷酸化修饰ꎬ但在酪氨酸位点的磷酸化
ＨＵＡＮＧ ＷＪꎬ ＬＩＵ ＨＫꎬ ＭＣＣＯＲＭＩＣＫ Ｓꎬ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１４.
修饰水平极低ꎬ由于我们使用的磷酸化苏氨酸抗
Ｔｏｍａｔｏｐｉｓｔｉｌ ｆａｃｔｏｒ ＳＴＩＧ１ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｉｎ ｖｉｖｏ ｐｏｌｌｅｎ ｔｕｂｅ ｇｒｏｗｔｈ
体( Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬ９３８１) 对 磷 酸 化 丝 ｂｙ ｂｉｎｄｉｎｇ ｔｏ ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ ３￣ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ａｎｄ ｔｈｅ
氨酸残 基 也 有 一 定 的 识 别 能 力ꎬ 所 以 我 们 认 为 ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｏｍａｉｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐｏｌｌｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｋｉｎａｓｅ ＬｅＰＲＫ２
ＡｈＰＲＫ４￣ＣＤ 的磷 酸 化 修 饰 主 要 发 生 在 丝 / 苏 氨 [Ｊ]. Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌꎬ ２６(６): ２５０５－２５２３.
ＨＵＡＮＧ ＷＪꎬ ＯＯ ＴＬꎬ ＨＥ ＨＹꎬ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１４. Ａｌｕｍｉｎｕｍ ｉｎｄｕｃｅｓ
酸残基上ꎮ 在本研究中ꎬ我们未检测到 ＡｈＰＲＫ４￣
ｒａｐｉｄｌｙ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ￣ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｉｎ Ａｌ￣
ＣＤ 的自磷酸化活性ꎬ一方面ꎬ可能是 ＡｈＰＲＫ４ 蛋
ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｐｅａｎｕｔ ｒｏｏｔ ｔｉｐｓ [Ｊ]. Ｂｏｔ Ｓｔｕｄꎬ ５５(１): ６７.
白的自磷酸化活性较低ꎬ需要采用更灵敏的检测 ＬＩ ＱＫꎬ １９８３. Ｒｅｄ ｓｏｉｌ ｏｆ Ｃｈｉｎａ [Ｍ]. Ｂｅｉｊｉｎｇ: Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｒｅｓｓ. [李
手段ꎬ如同位素标记等方法来进行检测ꎻ另一方 庆逵ꎬ １９８３. 中国红壤 [Ｍ]. 北京: 科学出版社.]
面ꎬＡｈＰＲＫ４ 也可能是一种需要被其他因子磷酸 ＬＩ ＸＷꎬ ＳＡＮＡＧＩ Ｍꎬ ＬＵ Ｙꎬ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２０. Ｐｒｏｔｅｉｎ
化来共同发挥作用的辅助蛋白ꎬ仍需要进一步实 ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｄｙｎａｍｉｃｓ ｕｎｄｅｒ ｃａｒｂｏｎ/ ｎｉｔｒｏｇｅｎ￣ｎｕｔｒｉｅｎｔ
ｓｔｒｅｓｓ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ￣ｒｅｌａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ￣ｌｉｋｅ
验探究ꎮ
ｋｉｎａｓｅ ｉｎ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ [Ｊ]. Ｆｒｏｎｔ Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉꎬ １１: ３７７.
综上所述ꎬＡｈＰＲＫ４ 为铝胁迫应答基因ꎬ该基
ＬＩ ＸＹꎬ ＨＵＡＮＧ ＱＹꎬ ＨＵ ＨＱꎬ ｅｔ ａｌ.ꎬ １９９５. Ｆｏｒｍｓ ｏｆ ａｃｔｉｖｅ
因启动子区域含有胁迫激素应答元件ꎬ预测的互
ａｌｕｍｉｎｕｍ ｉｎ ａｃｉｄ ｓｏｉｌｓ ａｎｄ ａｌｕｍｉｎｕｍ ｐｈｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ [ Ｊ]. Ｊ
作蛋白也可在胁迫下起作用ꎮ 在此基础上ꎬ采用 Ｈｕａｎｚｈｏｎｇ Ａｇｒｉｃ Ｕｎｉｖꎬ (４): ３５６－３６１. [李学垣ꎬ 黄巧云ꎬ