Page 109 - 《广西植物》2024年第7期
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７ 期 王果等: 多胺对荔枝胚性愈伤组织增殖与体胚发生的影响 １ ３ ０ ９
胺)则显著促进 ＥＣ 增殖及体胚发生ꎻ在体胚发生 后ꎬ这些处理的 ＥＣ 再分别转接于 Ｔ３ 培养基上诱
阶段中添加 Ｐｕｔ、Ｓｐｍ 或环己胺抑制荔枝体胚发生 导体胚ꎮ 各项指标统计同 １.２.１ꎮ
及萌发ꎬ而 Ｄ￣精氨酸或 Ｓｐｄ 则促进体胚发生及萌 以上各处理培养基 ｐＨ 值均调至 ５.８ꎮ ＥＣ 增
发( 王果等ꎬ２０２１ｂ)ꎮ 这些结果表明 ＰＡｓ 在荔枝 殖及萌发培养基均添加蔗糖 ３０ ｇＬ –１ 和琼脂 ７
ＥＣ 增殖及体胚发生中发挥着重要作用ꎬ但其机制 ｇＬ –１ ꎬ体 胚 诱 导 和 成 熟 培 养 基 均 添 加 蔗 糖 ６０
尚不清晰ꎮ 本研究以“妃子笑”荔枝 ＥＣ 为材料ꎬ采 ｇＬ –１ 和琼脂 １０ ｇＬ –１ ꎮ 如无特殊说明ꎬ均为
用单因素法ꎬ通过在增殖培养基中添加不同 ＰＡｓꎬ (２５±２) ℃ 下黑暗培养ꎮ
拟探讨以下问题:(１)进一步证实不同 ＰＡｓ 是否会 １.２.３ ＥＣ 形态与结构观察 取少量上述各处理培养 ３
影响荔枝 ＥＣ 的增殖及体胚发生能力ꎻ( ２) 外源 周后的 ＥＣ 轻放在载玻片上ꎬ滴清水ꎬ采用牙签轻搅
ＰＡｓ 影响 ＥＣ 增殖及体胚发生的作用机制ꎮ 混匀ꎬ盖上盖 玻 片 后ꎬ在 超 景 深 显 微 镜 ( ＫＥＹＥＮＧ
ＶＨＸ￣５０００ꎬ大阪ꎬ日本)下观察 ＥＣ 细胞形态ꎮ
１ 材料与方法 石蜡切片的制作主要参照吉训志(２０１９) 的方
法ꎬＥＣ 采用 Ｅｈｒｌｉｃｈ 苏木素染色ꎬ制片后在超景深
１.１ 材料 三维显微系统下观察记录ꎮ
“妃子笑”荔枝 ＥＣ 于 ２０１５ 年 ３ 月采用花药诱 １.２.４ ＥＣ 中 ＰＡｓ 含量及 ＰＡｓ 代谢酶活性测定 取
导获得ꎬ在 Ｍ３( ＭＳ 为基本培养基ꎬ附加 ２ꎬ４￣Ｄ １ 在 Ｍ３、Ｐ３、Ｓ２、Ｓ７ 及 Ｍ３Ｍ３、Ｐ３Ｍ３、Ｓ２Ｍ３ 和 Ｓ７Ｍ３
ｍｇＬ )和 Ｍ４ 培养基上(ＭＳ 为基本培养基ꎬ附加 共 ８ 种培养基上培养 ３ 周的 ＥＣꎬ液氮速冻后置于
￣１
￣１
￣１
２ꎬ４￣Ｄ １ ｍｇＬ 、ＫＴ ０.５ ｍｇＬ 和 ＡｇＮＯ ５ ｍｇ －８０ ℃ 保存ꎮ
３
￣１ 称取 ０. １ ｇ 上 述 各 处 理 ＥＣꎬ 参 考 吉 训 志
Ｌ )以 ３０ ｄ 为 １ 个周期交替继代保存( 李焕苓ꎬ
２００９)ꎮ (２０１９)的方法ꎬ提取 ＰＡｓ 并采用液相串联质谱仪
１.２ 方法 (Ｔｈｅｒｍｏ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃꎬ Ｅｘａｃｔｉｖｅ ｐｌｕｓꎬ马 萨 诸 塞 州ꎬ 美
１.２.１ 含 ＰＡｓ 的培养基对 ＥＣ 增殖、体胚发生及萌发 国)测定 ＰＡｓ 含量ꎮ
的影响 将在 Ｍ４ 培养基上继代 ３０ ｄ 的 ＥＣꎬ分别转 称取 ２ ｇ 上述各处理 ＥＣꎬ参照吉训志(２０１９)、
接于 Ｍ３ ( ＣＫ)、Ｐ３ ( Ｍ３ 培养基附加 Ｐｕｔ １５ ｍｇ 赵福庚和刘友良(２０００) 的方法ꎬ提取粗蛋白ꎬ测定
￣１ ￣１
Ｌ )、Ｓ２(Ｍ３ 培养基附加 Ｓｐｄ １０ ｍｇＬ )和 Ｓ７(Ｍ３ ＰＡＯ、ＤＡＯ、精氨酸脱羧酶 ( ａｒｇｉｎｉｎｅ ｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅꎬ
￣１
培养 基 附 加 Ｓｐｍ １５ ｍｇ Ｌ ) 培 养 基 ( 王 果 等ꎬ ＡＤＣ) 和 鸟 氨 酸 脱 羧 酶 ( ｏｒｎｉｔｈｉｎｅ ｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅꎬ
２０２１ｂ)ꎬ称重初始接种量( Ｇ )ꎮ 培养 ３ 周后称重 ＯＤＣ)的活性ꎮ
０
ＥＣ 重量(Ｇ )ꎬＥＣ 增殖率 ＝ (Ｇ －Ｇ ) / (Ｇ )ꎮ １.２.５ 数据统计分析 １.２.１ 和 １.２.２ 均重复 ２ 批
１ １ ０ ０
将在上述 ４ 种培养基上增殖的 ＥＣꎬ分别接种 次ꎮ 每批次每处理各 １５ 皿ꎬ以每 ５ 皿为 １ 个重复ꎬ
于体胚诱导培养基 Ｔ３ ( ＭＳ 为基本培养基ꎬ附加 重复 ３ 次ꎮ 结果用 ２ 批次 ６ 次重复的平均值表示ꎮ
–１ –１ ) 上ꎬ培养 ７ 周
ＮＡＡ ０.１ ｍｇＬ 及 ＫＴ ５ ｍｇＬ １.２.４ 用第二批次 ＥＣ 进行测定ꎬ重复 ３ 次ꎮ 采用
后记录体胚发生情况ꎬ计算每克 ＥＣ 诱导获得的体 ＤＰＳ 软 件 对 数 据 进 行 单 因 素 方 差 分 析 ( ｏｎｅ￣ｗａｙ
胚总量和双子叶体胚数量ꎮ ＡＮＯＶＡ)和 Ｄｕｎｃａｎ’ｓ 多重比较(唐启义ꎬ２０１０)ꎮ
上述获得的所有乳白色体胚接种在 Ｃ１９ 培养
–１ ２ 结果与分析
基(ＭＳ 为基础培养基ꎬ附加 ＡＢＡ １ ｍｇＬ 和 ＩＡＡ
–１ ) 上进行成熟ꎬ８ 周后转接于 Ｒ７ 萌发
０.５ ｍｇＬ
培养基(１ / ２ ＭＳ 为基础培养基ꎬ附加 ＧＡ １ ｍｇ ２.１ 不同 ＰＡｓ 对 ＥＣ 增殖率及细胞形态与结构的影响
３
–１ )ꎬ１２ ｈ / １２ ｈ 光暗交替培养ꎬ８ 周后统计每克
Ｌ ２.１.１ 培养基添加 ＰＡｓ 对 ＥＣ 增殖的影响 含 ＰＡｓ
ＥＣ 体胚的萌发数量及形态等ꎮ 培养基 ＥＣ 增殖率都显著高于对照( Ｍ３) ( 表 １)ꎮ
１.２.２ 恢复培养对 ＥＣ 增殖、体胚发生及萌发的影 其中ꎬＳ２ 处理上的 ＥＣ 增殖率最高ꎬ是初始接种量
响 将在 Ｍ３、Ｐ３、Ｓ２ 和 Ｓ７ 上培养 ３ 周的 ＥＣꎬ分别 的 １４.１４ 倍ꎻ其次分别为 Ｓ７ 及 Ｐ３ꎬＥＣ 增殖率分别
转接到不含 ＰＡｓ 的 Ｍ３ 培养基上 [ 处理编号分别 是初始接种量的 １２.４７ 和 １０.７９ 倍ꎻＭ３ 处理上的
为 Ｍ３Ｍ３(ＣＫ)、Ｐ３Ｍ３、Ｓ２Ｍ３ 和 Ｓ７Ｍ３]ꎮ 培养 ３ 周 ＥＣ 增殖率最低ꎬ是初始接种量的 ９.７１ 倍ꎮ
