Page 110 - 《广西植物》2024年第7期

１ ３ １ ０ 广 西 植 物 ４４ 卷
表 １ 含不同 ＰＡｓ 培养基对 ＥＣ 增殖、体胚发生及萌发的影响
Ｔａｂｌｅ １ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ＰＡｓ ｏｎ ＥＣ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎꎬ ｓｏｍａｔｉｃ ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
双子叶胚数量
增殖率 体胚数量 Ｎｏ. ｏｆ 萌发数量
处理 腐胺 亚精胺 精胺
Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｒａｔｅ Ｎｏ. ｏｆ ｅｍｂｒｙｏｓ ｄｉｃｏｔｙｌｅｄｏｎｏｕｓ Ｎｏ. ｏｆ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｓ
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｐｕｔ Ｓｐｄ Ｓｐｍ
￣１
￣１
(ｆｏｌｄ) (ｉｎｄ.ｇ ＦＷ) ｅｍｂｒｙｏｓ (ｐｌａｎｔｇ ＦＷ)
￣１
(ｉｎｄ.ｇ ＦＷ)
Ｍ３ ０ ０ ０ ９.７１±０.０７ｄ ２２６±１１.９３ａ ２６±４.６６ｂ １４±１.７３ａ
Ｐ３ １５ ０ ０ １０.７９±０.２５ｃ ７８±６.９３ｂ ４０±０.８５ａ ３±０.５１ｂ
Ｓ２ ０ １０ ０ １４.１４±０.５９ａ ３２±４.００ｄ ７±１.３１ｃ １±０.６２ｂ
Ｓ７ ０ ０ １５ １２.４７±０.１７ｂ ５６±７.２１ｃ ８±１.７３ｃ １±１.１０ｂ
注: 同一列数据后的不同字母表示 Ｄｕｎｃａｎ’ｓ 新复极差法测验差异显著(Ｐ<０.０５)ꎮ 下同ꎮ
Ｎｏｔｅ: Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｃｏｌｕｍｎ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ Ｄｕｎｃａｎ’ ｓ ｎｅｗ ｃｏｍｐｌｅｘ ｒａｎｇｅ ｔｅｓｔ ( Ｐ < ０. ０５). Ｔｈｅ ｓａｍｅ
ｂｅｌｏｗ.

含 ＰＡｓ 培养基的 ＥＣ 颗粒较细小ꎬ仅在 ＥＣ 顶 乳白(图 ２:Ａꎬ黄箭头)或者透明的原胚(图 ２:Ｂꎬ红
部或者边缘部位分化个别原胚及非胚性愈伤组织 箭头) 数量增多ꎬＰ３Ｍ３ 及 Ｓ２Ｍ３ 处理的 ＥＣ 分化的

(ｎｏｎ￣ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｃａｌｌｕｓꎬＮＥＣ)ꎻ而 Ｍ３ 处理上的 ＥＣ 原胚较多(图 ２:Ａꎬ红箭头)ꎮ Ｍ３Ｍ３、Ｐ３Ｍ３ 及 Ｓ７Ｍ３
颗粒稍粗且混杂较多原胚及 ＮＥＣꎬ较难挑出 ＥＣ 处理的 ＥＣ 细胞多为圆形或椭圆形ꎬ分裂分化交织
(图 １:ＡꎬＭ３)ꎮ 成团ꎬ细胞聚集ꎬ夹杂多细胞原胚( 图 ２:Ｂꎬ黄框)ꎻ
Ｍ３ 处理的 ＥＣ 细胞多为椭圆或圆形ꎬ处于同 Ｓ２Ｍ３ 处理的 ＥＣ 细胞呈椭圆形ꎬ细胞质体较多(图
时分裂分化状态ꎻＳ２ 及 Ｓ７ 处理的 ＥＣ 细胞多为长 ２:ＢꎬＳ２Ｍ３)ꎮ 切片观察发现ꎬＰＡｓ 来源的 ＥＣ 恢复
圆形ꎬ分裂旺盛ꎻＰ３ 处理的 ＥＣ 细胞几乎都为圆形 培养后ꎬ原胚形成层细胞裂解凋亡ꎬ无体胚发生ꎬ胚
且细胞外缘较厚(图 １:Ｂꎬ红色箭头)ꎮ 性细胞染色均匀ꎬ大小一致ꎬ与含 ＰＡｓ 培养基上的
切片观察发现含 ＰＡｓ 培养基的 ＥＣ 细胞大多数 ＥＣ 以细胞分裂为主的现象一致ꎮ 而 Ｍ３Ｍ３ 处理的
分裂旺盛ꎬ含有早期子叶胚等ꎮ Ｍ３ 处理的 ＥＣ 细胞 ＥＣ 分化较多早期体胚(图 ２:Ｃꎬ黄框)ꎮ
分裂分化同时进行ꎬ分化较多多细胞原胚或者早期 ２.２ 不同 ＰＡｓ 培养基对体胚发生及萌发的影响
球形胚(图 １:Ｃꎬ红框)ꎻＰ３ 处理的 ＥＣ 染色较浓且 ２.２.１ 培养基添加不同 ＰＡｓ 对体胚发生及萌发的
均匀ꎬＮＥＣ 染色较浅ꎬ极易区分ꎻＳ２ 处理的 ＥＣ 有早 影响 含 ＰＡｓ 培养基上增殖的 ＥＣ 体胚诱导效率
期子叶胚等分化(图 １:Ｃꎬ黄框)ꎻＳ７ 处理的内部 ＥＣ 显著降低(表 １)ꎬ尤其是 Ｓ２ 处理的体胚诱导效率
胚性细胞染色较深(图 １:Ｃꎬ黄箭头)ꎬ分裂旺盛ꎬ外 最低ꎬ每克 ＥＣ 仅诱导出约 ３２ 个体胚ꎬ远远低于对
缘非胚性细胞染色较浅(图 １:Ｃꎬ绿箭头)ꎮ 照(２２６ 个体胚)ꎮ 其次为 Ｓ７ 及 Ｐ３ 处理ꎬ每克 ＥＣ
２.１.２ 恢复培养对 ＥＣ 增殖的影响 将上述 ４ 种培 仅分别获得 ５６ 个、７８ 个体胚ꎮ
养基上培养 ３ 周获得的 ＥＣ 分别重新转接到不含 ＰＡｓ 均显著降低了体胚诱导效率ꎬ但对双子叶
ＰＡｓ 的 Ｍ３ 培养基ꎬ培养 ３ 周后发现ꎬＳ２Ｍ３ 处理的 胚诱导效应不同( 表 １)ꎮ Ｐｕｔ 显著提高了双子叶

ＥＣ 增殖率最高ꎬ是初始接种量的 １０.７５ 倍ꎻＳ７Ｍ３ 胚的诱导效率ꎬＰ３ 处理的每克 ＥＣ 可诱导 ４０ 个双
和 Ｐ３Ｍ３ 处理的 ＥＣ 增殖率分别为初始接种量的 子叶胚ꎻＳ２ 和 Ｓ７ 处理的双子叶胚诱导效率显著低
９.７０、９.６７ 倍ꎻＭ３Ｍ３ 的 ＥＣ 增殖率仍最低ꎬ为初始 于对照ꎬ每克 ＥＣ 仅分别产生 ７ 个、８ 个双子叶胚ꎮ

接种量 的 ８. ７２ 倍ꎮ 增 殖 率 由 高 到 低 为 Ｓ２Ｍ３、 Ｍ３ 处理的 ＥＣ 诱导获得的多数为球形胚(图 ３:
Ｓ７Ｍ３、Ｐ３Ｍ３ꎬ增殖趋势与 Ｓ２、Ｓ７、Ｐ３ 的相同且恢复 Ｍ３ꎬ蓝框)、子叶形胚(图 ３:Ｍ３ꎬ绿框) 等较多不同
培养(Ｐ３Ｍ３、Ｓ２Ｍ３ 及 Ｓ７Ｍ３) 的 ＥＣ 增殖率仍显著 步体胚ꎬＰ３ 处理的 ＥＣ 仅分化少量簇生球形胚(图
高于 对 照 Ｍ３Ｍ３ ( 表 ２)ꎬ 低 于 含 ＰＡｓ 的 培 养 基 ３:Ｐ３ꎬ蓝框)及子叶胚(图 ３:Ｐ３ꎬ绿框)ꎬ而 Ｓ２ 及 Ｓ７
(Ｐ３、Ｓ２ 及 Ｓ７)ꎬ说明添加的外源 ＰＡｓ 对 ＥＣ 增殖 处理的 ＥＣ 分化的几乎都为簇生的鲜亮乳白球形胚
的促进作用ꎬ在培养基中去掉 ＰＡｓ 后被部分削弱ꎮ (图 ３:Ｓ２ 及 Ｓ７ꎬ蓝框)ꎮ 含 ＰＡｓ 培养基上的 ＥＣ 诱
与含 ＰＡｓ 培养基相比较ꎬ恢复培养的 ＥＣ 分化 导的体胚饱满ꎬ胚体呈现部分红色(图 ４:蓝框)ꎮ