Page 140 - 《广西植物》2024年第7期

１ ３ ４ ０ 广 西 植 物 ４４ 卷
测、峰过滤、峰对齐处理ꎬ得到物质定量列表ꎮ 主 培养时间的菌丝体代谢物组间差异不明显ꎬ但是
成分分析(ｐｒｉｎｃｉｐａｌ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓꎬＰＣＡ)、正交 这种趋势仅限于培养时间相近的组ꎬ如培养 １０ ｄ
偏 最 小 二 乘 判 别 分 析 ( ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｐａｒｔｉａｌ ｌｅａｓｔ 与 ２０ ｄ、２０ ｄ 与 ３０ ｄꎬ培养时间不相近的组之间的
ｓｑｕａｒｅｓ ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓꎬ ＯＰＬＳ￣ＤＡ) 使用 Ｒ 软 差异较为明显ꎮ 阴离子模式下ꎬ培养 １０ ｄ 聚为一
件包 Ｒｏｐｌ 进行分析ꎻ物质的鉴定利用公共数据库 个分支ꎬ其他培养时间聚为一个分支ꎬ与 ＰＣＡ 得分
ＨＭＤＢ、ｍａｓｓｂａｎｋ、 ＬｉｐｉｄＭａｐｓ、 ｍｚｃｌｏｕｄ、 ＫＥＧＧ 及 自 图推测一样ꎮ
建物质库ꎮ 根据统计检验计算 Ｐ 值、ＯＰＬＳ￣ＤＡ 降 ２.３ 灰 树 花 菌 丝 体 代 谢 物 正 交 偏 最 小 二 乘 法
维方法计算变量投影重要度( ＶＩＰ 值)ꎻ统计学意 (ＯＰＬＳ￣ＤＡ)分析

义(Ｐ 值)使用 ｔ 检验来计算ꎬ当 Ｐ 值<０.０５ 和 ＶＩＰ 为了消除随机误差ꎬ采用 ＯＰＬＳ￣ＤＡ 法进一步
值>１ 时ꎬ认为代谢物分子具有统计学意义ꎮ 分析 培 养 １０、２０、３０ ｄ 菌 丝 体 的 差 异 代 谢 产 物
(Ｗａｎｔ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１３)ꎬ结果在正离子和负离子模式
２ 结果与分析 下 Ｒ Ｙ(ｃｕｍ)和 Ｑ ( ｃｕｍ) 都接近于 １ꎬ表明本研究
２
２
的 ＯＰＬＳ￣ＤＡ 模型可以展示灰树花菌丝体不同培养
２.１ 灰树花菌丝体鉴定分析 时期代谢产物的差异和区别ꎮ
将自测序列在 ＧｅｎＢａｎｋ 数据库中进行 ＢＬＡＳＴ 利用 ＯＰＬＳ￣ＤＡ 对鉴定出的代谢物进行分析ꎬ
比对ꎬ结果显示培养 １０、２０、３０ ｄ 的菌丝体比对结 结果(图 ５) 显示ꎬ消除无关的组内误差和与研究
果靠前的均为灰树花ꎮ 将所取灰树花菌丝体样品 目的无关的随机误差后ꎬ其组间分离的效果明显
(ＧＰＳ１０ ｄ、ＧＰＳ２０ ｄ、ＧＰＳ３０ ｄ) 与树花孔菌属内物 优于 ＰＣＡꎮ 除培养 ２０ ｄ 外ꎬ组内分布集中ꎬ组内样
种 ＩＴＳ 序列构建系统发育树ꎬ获得的系统树如图 ２ 本重复性较好ꎮ 此外ꎬＯＰＬＳ￣ＤＡ 模型的置换检验
所示ꎮ 由图 ２ 可知ꎬ３ 个培养时间的菌株与灰树花 显示ꎬＱ 的回归直线与 ｙ 轴的交点在负半轴ꎬ正离
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菌株聚为一支ꎬ支持率为 １００ꎬ表明所培养的菌丝 子模式 Ｒ (０ꎬ０.９６)、Ｑ (０ꎬ０.１３)ꎬ负离子模式 Ｒ ２
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体为灰树花菌丝体ꎮ (０ꎬ０.９６)、Ｑ (０ꎬ０.１３)ꎬ从左到右的蓝色 Ｑ 点都低
２.２ 灰树花不同生长时期菌丝体代谢物主成分分 于最右的原始绿色 Ｒ 点且 Ｑ <０ꎬ说明所建立模型
２
２
析(ＰＣＡ) 可靠性良好ꎬ不存在过拟合现象ꎮ
为初步分析灰树花菌丝体不同生长时期代谢 ２.４ 灰树花菌丝体差异代谢物鉴定
物积累的差异ꎬ对灰树花菌丝体代谢物进行主成 利用 ＨＰＬＣ￣ＭＳ / ＭＳ 技术对灰树花不同培养阶
分分析( ＰＣＡ)ꎮ ＰＣＡ 中ꎬ正离子和负离子模式下 段的菌丝体化学组分在正、负离子模式下进行分
Ｒ 分别为 ０.５１５ 和 ０.５１７ꎬ均大于 ０.５ꎬ说明实验建 析ꎬ经鉴定的灰树花菌丝体在不同培养时期中正
２
立的 ＰＣＡ 模型稳定ꎬ可以用于代谢差异分析ꎮ 正 离子模式下有 ３１ ３８２ 个差异代谢物ꎬ负离子模式
负离子模式下ꎬ菌丝体培养 １０、２０、３０ ｄ 由主成分 下有２６ ６５９个代谢物ꎮ ３ 个培养阶段的灰树花菌
１( ＰＣ １ ＝ ３５. １％ / ３０. ６％) 和 主 成 分 ２ ( ＰＣ ２ ＝ 丝体共筛选出 ５８４ 种差异代谢物ꎬ根据标样的质
１６.４％ / ２１.１％)建立的得分图上有分离趋势ꎬ说明 谱信息ꎬ对差异化合物进行了鉴定分析( 图 ６)ꎬ按

不同培养时间的代谢产物存在一定差异ꎮ 其中ꎬ 一级分类分属于 ４２ 个类别(表 １)ꎮ
培养 １０ ｄ 分别与培养 ２０、３０ ｄ 的菌丝体样本差异 ２.５ 差异代谢物分析
较大ꎬ而培养 ２０ ｄ 与 ３０ ｄ 样本差异较小ꎬ并且存 ２.５.１ 不同培养时间共有差异代谢物分析 由表 １
在部分重叠现象ꎬ但总体分离趋势仍然比较明显 可知ꎬ不同培养时间的共有差异代谢物中ꎬ其他类
(图 ３)ꎮ 因此ꎬ我们推测这是由灰树花菌丝体在 的组分最多ꎬ有 １０８ 种ꎻ在剩余的组分中ꎬ羧酸及其
培养 ２０ ｄ 和 ３０ ｄ 时 体 内 代 谢 物 变 化 不 明 显 而 衍生物的种类最多ꎬ有 １０４ 种ꎻ紧随其后为脂肪酸

造成ꎮ (６８ 种)、有机氧化合物(５１ 种)、苯和取代衍生物
图 ４ 为差异代谢物的聚类热图ꎬ可以用来推测 (３１ 种)、类固醇和类固醇衍生物(２９ 种) 等ꎮ 由此
灰树花菌丝体已知或未知代谢物的生物学功能ꎮ 可见ꎬ灰树花菌丝体中含有丰富的羧酸及其衍生物
由图 ４ 可知ꎬ在正离子模式下ꎬ培养 ２０ ｄ 的 ３ 个生 (氨基酸类化合物)ꎬ并且培养前期氨基酸的种类比
物学重复分别与培养 １０、３０ ｄ 聚成两个分支ꎬ不同 培养后期的种类多ꎮ 除此之外ꎬ核苷酸及其衍生