Page 67 - 《广西植物》2023年第1期

１ 期 刘芳等: 婆婆纳抗黑色素瘤物质基础的初步研究 ６ ３

３７ ℃ 、５％ ＣＯ 的细胞培养箱中进行培养ꎬ待细胞 表 １ 婆婆纳各样品对黑色素瘤细胞的抑制作用
２
贴壁生长融合到 ８５％左右时ꎬ采用胰酶消化传代ꎬ Ｔａｂｌｅ １ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓａｍｐｌｅｓ ｏｆ
Ｖｅｒｏｎｉｃａ ｄｉｄｙｍａ ｏｎ ｍｅｌａｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ
继续培养ꎮ
２.４ 用 ＣＣＫ８ 法检测婆婆纳样品对 Ｂ１６ 和 Ａ３７５ 不同肿瘤细胞的
抑制率 半抑制浓度
的增殖抑制作用 浓度 Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｕｍｏｒ ＩＣ ５０
样品 Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｃｅｌｌ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ (ｍｇｍＬ )
￣１
取处于对数生长期的细胞ꎬ用胰酶消化后离 Ｓａｍｐｌｅ (ｍｇ ｒａｔｅ (％)
￣１
ｍＬ )
￣１
心得细胞沉淀ꎬ用培养基稀释成 １×１０ 个ｍＬ 的
４
Ｂ１６ Ａ３７５ Ｂ１６ Ａ３７５
单细胞悬液接种于 ９６ 孔板中ꎬ每孔 １００ μＬꎬ置于
婆婆纳醇提物 １ ３３.９５± —
３７ ℃ 、５％的 ＣＯ 培养箱中培养 １２ ｈ 后ꎬ将培养液
２ Ｅｔｈａｎｏｌ ｅｘｔｒａｃｔ ５.４４
换成含有婆婆纳提取物或单体化合物的培养液继 ４ ５９.３０± －１６.２２±
６.００ ２.２９
续培养ꎬ每孔 １００ μＬꎻ用含药培养基继续培养 ２４
８ ９３.５５± ２５.８９± １.９５５
ｈꎬ换新鲜培养液ꎬ同时每孔加 １０ μＬ ＣＣＫ８ꎬ振摇混 ３.２１ ３.４０
合均匀ꎬ继续培养 ４ ｈꎬ用多功能酶标仪测吸光度 水层 １ ０.２９± —
Ｗａｔｅｒ ｌａｙｅｒ ３.９７
值ꎬ测定波长为 ４５０ ｎｍꎮ 设置给药孔( Ａ１)、细胞
４ ５.２５± －１３.６０±
空白孔(Ａ２)、无细胞空白孔(Ａ０)ꎬ５ 个复孔ꎮ ５.４２ ５.８２
正丁醇层 １ －６.４２± —
细胞 增 殖 的 抑 制 率 (％) ＝ { [( Ａ２ － Ａ０) －
ｎ￣Ｂｕｔａｎｏｌ ｌａｙｅｒ ６.２１
(Ａ１－Ａ０)] / (Ａ２－Ａ０)} ×１００ꎮ
４ ４.５２± －２２.４３±
３.６７ ６.０３
３ 结果与分析 乙酸乙酯层 １ ９１.５７± ２０.０４±
Ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｌａｙｅｒ １.５０ ４.１７
４ ９７.９０± ５９.１５±
３.１ 对婆婆纳乙醇浸提物及不同萃取部位的抗黑 ０.８４ ３.３２
色素瘤活性评价 ８ ９９.９２± ７９.５５± ０.１７７ ２.８２２
１.４４ １.２６
婆婆纳乙醇浸提物及不同溶剂萃取部位对黑 石油醚层 １ ３５.４９± １４.８９± ４.２４８
色素瘤细胞 Ｂ１６ 和 Ａ３７５ 增殖的抑制结果如表 １ 所 Ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ １.９１ ５.２２
ｅｔｈｅｒ ｌａｙｅｒ
４ ９２.７０± ５５.２５±
示ꎮ 从整体上来看:(１) 婆婆纳样品对 Ｂ１６ 细胞增 ４.８０ ３.０３
殖的抑制作用强于 Ａ３７５ 细胞ꎻ(２)乙酸乙酯部位的 ８ ９６.６７± ６１.９７± １.３１６
０.９０ １.９１
￣１
抑制黑色素瘤的作用最强(样品浓度为 ８ ｍｇｍＬ
￣１
时ꎬ其 Ｂ１６ 细胞的 ＩＣ 值为 ０.１７７ ｍｇｍＬ )ꎬ石油
５０
醚层次之ꎻ(３) 婆婆纳乙醇提取物有抑制黑色素瘤 β￣Ｄ￣ａｌｌｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ￣(１→２)￣β￣Ｄ￣ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅꎬ化合
的作用ꎬ尤其是对 Ｂ１６ 细胞的抑制作用较强(样品 物 ５ 为 ６￣Ｏ￣ｖｅｒａｔｒｏｙｌｃａｔａｌｐｏｓｉｄｅꎬ 化 合 物 ６ 为
￣１
浓度为 ８ ｍｇｍＬ 时ꎬ其 Ｂ１６ 细胞的 ＩＣ 值为 １.９５５ ｖｅｒｏｎｉｃｏｓｉｄｅꎬ化 合 物 ７ 为 ｉｓｏｓｃｕｔｅｌｌａｒｅｉｎ ４′￣ｍｅｔｈｙｌ
５０
ｍｇｍＬ )ꎬ其他水层、正丁醇层抑制黑色素瘤的作 ｅｔｈｅｒ ７￣Ｏ￣(６‴￣Ｏ￣ａｃｅｔｙｌ)￣ｂａｌｌｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ (１‴ →２″)￣β￣
￣１
用较弱或基本无抑制作用ꎮ 由此可见ꎬ乙酸乙酯部 ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅꎮ 其化学结构如图 ３ 所示ꎬ化合物
位是婆婆纳抑制黑色素瘤细胞增殖的活性部位ꎬ婆 的 Ｃ￣ＮＭＲ 数据如表 ２ 所示ꎮ 化合物 ２、５、６ 属于
１３
婆纳抗黑色素瘤的活性成分主要分布在乙酸乙酯 环烯醚萜苷类化合物ꎬ化合物 ３、４、７ 属于黄酮苷
部位和石油醚部位ꎬ尤其是乙酸乙酯部位ꎮ 类化合物ꎮ
３.２ 婆婆纳乙酸乙酯萃取部位(ＰＰＮＥ)的化学成分 化合物 １ 白色粉末ꎬ易溶于 甲 醇ꎬ Ｈ￣ＮＭＲ
１
通过系统的分离纯化ꎬ我们从乙酸乙酯层分 (５００ ＭＨｚꎬ ＤＭＳＯ￣ｄ ) δ: １０.９４(１Ｈꎬ ｓꎬ －ＣＨＯ)ꎬ
６
离得到了 ７ 个化合物ꎬ鉴定结果:化合物 １ 为对羟 ７.７８(２Ｈꎬ ｄꎬ Ｊ ＝ ８.５ Ｈｚꎬ Ｈ￣２ꎬ ６)ꎬ ６.８１(２Ｈꎬ ｄꎬ
基苯甲醛ꎬ化合物 ２ 为胡黄连苷 ＩＩꎬ化合物 ３ 为 Ｊ ＝ ８.５ Ｈｚꎬ Ｈ￣３ꎬ ５)ꎻ １３ Ｃ￣ＮＭＲ (１２５ ＭＨｚꎬ ＤＭＳＯ￣

ｉｓｏｓｃｕｔｅｌｌａｒｅｉｎ ７￣Ｏ￣( ６‴￣Ｏａｃｅｔｙｌ )￣β￣ａｌｌｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ ｄ ) δ: １３１.９９(Ｃ￣１)ꎬ １３１.９５(Ｃ￣２ꎬ ６)ꎬ １１５.５３(Ｃ￣
６
３ꎬ ５)ꎬ １６１.９８( Ｃ￣４)ꎬ １８９.２９(￣ＣＨＯ)ꎮ 以上数据
(１‴ → ２″)￣β￣ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅꎬ 化 合 物 ４ 为 ３′￣
与文献(黄宇飞等ꎬ２０２０)报道一致ꎬ化合物 １ 鉴定
ｈｙｄｒｏｘｙ￣４′￣Ｏ￣ｍｅｔｈｙｌｉｓｏｓｃｕｔｅｌｌａｒｅｉｎ ７￣Ｏ￣[６‴￣Ｏ￣ａｃｅｔｙｌ￣