Page 130 - 《广西植物》2023年第6期
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１ １ １ ６ 广 西 植 物 ４３ 卷
Ｖａｒｉｏｓｋａｎ ＬＵＸ 多功能酶标仪(美国 Ｔｈｅｒｍｏ 公司)ꎻ Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＨＷ￣４０Ｆ ( 甲 醇 )、 Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０ ( 甲
ＴＳ１００ 倒置显微镜(日本 Ｎｉｋｏｎ 公司)ꎮ 醇)ꎬ得化合物 ６ ( １０. ０ ｍｇ)ꎮ Ｆｒ. ５. ５ 过 Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ
１.３ 试剂 ＨＷ￣４０Ｆ(甲醇)ꎬ得化合物 ７(１７.０ ｍｇ)ꎮ
Ｄ￣１０１ 型大孔树脂( 天津市海光化工有限公 Ｆｒ.６ 过 Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０(甲醇)ꎬＴＬＣ 检测合并
司)ꎻ柱层析硅胶、薄层层析硅胶( 青岛海洋化工有 后浓缩ꎬ得到 ５ 个组分(Ｆｒ.６.１－６.５)ꎮ 其中ꎬＦｒ.６.２
限 公 司 )ꎻ 葡 聚 糖 凝 胶 Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０ ( 瑞 士 过 Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＨＷ￣４０Ｃ ( 甲 醇)、 Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＨＷ￣４０Ｆ
Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ 公司)ꎻＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＨＷ￣４０Ｃ 凝胶、 (甲醇)、Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０(５０％丙酮水)、ＯＤＳ 柱色
Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＨＷ￣４０Ｆ 凝胶(日本东曹株式会社)ꎻＯＤＳ 谱(２０％ ~ ５０％ 甲醇水)ꎬ得化合物 ８ ( １１. ０ ｍｇ)ꎮ
(日本 ＹＭＣ 公司)ꎻ试剂均为分析纯ꎮ Ｆｒ.６.４ 过 Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＨＷ￣４０Ｃ(甲醇)、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＨＷ￣
胎牛 血 清 ＦＢＳ、 ＤＭＥＭ 高 糖 培 养 基 ( 美 国 ４０Ｆ(甲醇)、Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０( 甲醇)ꎬ得化合物 ９
Ｇｉｂｃｏ 公司)ꎻ脂多糖( ＬＰＳ)、青链霉素混合液、二 (８０.０ ｍｇ)ꎮ Ｆｒ.６.５ 过 Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＨＷ￣４０Ｆ( 甲醇)ꎬ
甲基亚砜、ＰＢＳ 缓冲液( 北京 Ｓｏｌａｒｂｉｏ 科技有限公 得化合物 １０(８７.０ ｍｇ)ꎮ
司)ꎻＣＣＫ￣８ 试剂盒(美国 Ｇｌｐｂｉｏ 公司)ꎻＮＯ 试剂盒 Ｆｒ.８ 过正相硅胶ꎬ以二氯甲烷－甲醇(２０ ∶ １→
(南京建成生物工程研究所)ꎻ地塞米松( ＤＥＸꎬ上 ３ ∶ １)进行梯度洗脱ꎬ得到 ６ 个组分(Ｆｒ.８.１－８.６)ꎮ
海甄准生物科技有限公司)ꎮ Ｆｒ.８.４ 过 Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＨＷ￣４０Ｃ(甲醇)、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＨＷ￣
４０Ｆ( 甲 醇)、 Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＨＷ￣４０Ｆ( 二 氯 甲 烷 － 甲 醇
２ 实验方法 １ ∶ １)、ＯＤＳ 柱色谱(２０％ ~ ４０％甲醇水)、Ｓｅｐｈａｄｅｘ
ＬＨ￣２０( 甲醇)、Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０(５０％ 丙酮水)ꎬ得
２.１ 提取与分离 化合物 １１(１５０.０ ｍｇ)、化合物 １２(４４.０ ｍｇ)、化合
取干燥的杏叶防风全草(１２ ｋｇ) 切成粗段ꎬ用 物 １３(３６.４ ｍｇ)ꎮ Ｆｒ.８.５ 过 Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＨＷ￣４０Ｃ( 甲
７０％乙醇加热回流提取 ３ 次ꎬ合并提取液ꎬ减压回 醇)、 Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＨＷ￣４０Ｆ ( 甲 醇 )、 ＯＤＳ 柱 色 谱
收溶剂得浸膏(１.３ ｋｇ)ꎬ过 Ｄ￣１０１ 大孔吸附树脂ꎬ (２０％ ~ ６０％ 甲 醇 水)、 Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０ ( 甲 醇)、
用水(２ 倍柱体积)、８０％乙醇(５ 倍柱体积) 依次洗 Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０(５０％ 丙酮水)ꎬ得化合物 １４ ( ５. ２
脱ꎬ得水段浸膏(９７２ ｇ)、８０％乙醇段浸膏(５３０ ｇ)ꎮ ｍｇ)、化合物 １５(３.７ ｍｇ)、化合物 １６(７.０ ｍｇ)、化
８０％乙醇段经正相硅胶柱层析ꎬ以二氯甲烷－甲醇 合物 １７(２.７ ｍｇ)ꎮ
(７ ∶ ３→６ ∶ ４)进行等度洗脱ꎬ回收溶剂ꎬ浓缩后得 Ｆｒ.９ 过 Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０(甲醇)ꎬ得到 ２ 个组分
干浸膏 ２９０ ｇꎬ经正相硅胶柱层析ꎬ以石油醚－乙酸 (Ｆｒ.９.１－９.２)ꎮ 其中ꎬＦｒ.９.２ 过 Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＨＷ￣４０Ｃ
乙酯(１０ ∶ ０→０ ∶ １０)、乙酸乙酯－甲醇(１０ ∶ ０→７ (甲醇)、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＨＷ￣４０Ｆ( 甲 醇)、Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣
∶ ３)进行梯度洗脱ꎬ分段收集ꎬ各段进行 ＴＬＣ 检测 ２０( ５０％ 丙 酮 水)、正 相 硅 胶 柱、二 氯 甲 烷 － 甲 醇
合并后浓缩ꎬ得到 １０ 个组分(Ｆｒ.１－１０)ꎮ (８.５ ∶ １.５)ꎬ得化合物 １８(２６.０ｍｇ)、１９(２５.０ ｍｇ)、
Ｆｒ.４ 过 正 相 硅 胶 柱ꎬ 以 石 油 醚 － 二 氯 甲 烷 化合物 ２０(８７.０ ｍｇ)ꎮ
(３ ∶ １→０ ∶ １)、二氯甲烷－甲醇(７０ ∶ １→２０ ∶ １) ２.２ 抗炎活性评价
梯度洗脱ꎬＴＬＣ 检测合并后浓 缩ꎬ得 到 ７ 个 组 分 取对数生长期的 ＲＡＷ２６４.７ 细胞ꎬ调整细胞
５
(Ｆｒ.４.１－４.７)ꎮ 其中ꎬＦｒ.４.３ 反复过 Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣ 浓度为每毫升 ３×１０ 个ꎬ每孔 １００ μＬ 接种于 ９６ 孔
２０(二氯甲烷－甲醇 １ ∶ １)、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＨＷ￣４０Ｆ( 甲 板中ꎬ置于 ３７ ℃ 、５％ ＣＯ 的培养箱中培养 ２４ ｈꎮ
２
醇)ꎬ得化合物 １( １０.５ ｍｇ)、化合物 ２( ７.０ ｍｇ)ꎮ 实验设置空白组、模型组、阳性对照组和给药组ꎬ
Ｆｒ.４.５ 反复过正相硅胶、Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０( 二氯甲 每组设置 ３ 个复孔ꎬ阳性对照为地塞米松( ＤＥＸ)ꎮ
烷－甲醇 １ ∶ １)、Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０( 甲醇)、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ 空白组和模型组加入完全培养基ꎬ阳性对照组加
￣１
ＨＷ￣４０Ｆ(甲醇)ꎬ得化合物 ３(３０.０ ｍｇ)ꎮ 入终浓度为 ２５ μｍｏｌＬ ＤＥＸꎬ给药组加入安全浓
Ｆｒ. ５ 过 Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０ ( 二 氯 甲 烷 － 甲 醇 度范围内的化合物ꎮ 培养 ３ ｈ 后ꎬ除空白组外ꎬ其
１ ∶ １)ꎬ ＴＬＣ 检 测 合 并 后 浓 缩ꎬ 得 到 ５ 个 组 分 他组均加入终浓度为 ０.２５ μｇｍＬ 的 ＬＰＳꎬ培养
￣１
(Ｆｒ.５.１－５.５)ꎮ 其中ꎬＦｒ.５.２ 反复过 Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＨＷ￣ ２４ ｈ 后收集上清液ꎬ按 ＮＯ 检测试剂盒说明书测定
４０Ｆ(甲醇)、Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０( 甲醇)ꎬ得化合物 ４ 上清液 ＮＯ 水平ꎬ重复 ３ 次实验ꎮ 按公式(１) 计算
(１０. ０ ｍｇ )、 化 合 物 ５ ( ２４. ４ ｍｇ )ꎮ Ｆｒ. ５. ４ 过 ＮＯ 含量ꎬ按公式(２)计算 ＮＯ 抑制率ꎮ
