Page 179 - 《广西植物》2023年第6期

６ 期 刘亚男等: 苦橙不同部位挥发油成分及抗氧化与抗菌活性分析 １ １ ６ ５

１.２ 仪器 １.３.３ 体外抗氧化活性研究
Ａｇｌｉｅｎｔ７８９０Ｂ￣５９７７Ｂ 型气相色谱－质谱联用仪 １.３.３.１ ＡＢＴＳ 自由基清除率的测定 根据孔钰
(美国安捷伦公司)ꎻＵＶ￣ＰＣ１８００ 型紫外 －可见分 婷等(２０２１) 的方法ꎬ精密称取 ６.６２ ｍｇ Ｋ Ｓ Ｏ 于
２ ２ ８
光光度计(上海美谱达科学仪器有限公司)ꎻＤＬＳＢ￣ １０ ｍＬ 棕色容量瓶中ꎬ用蒸馏水溶解并定容至刻
５Ｌ / ３０ 低温冷却循环泵( 巩义市予华仪器有限责 度ꎬ摇匀后得 ２.４５ ｍｍｏｌＬ Ｋ Ｓ Ｏ 溶液ꎮ 另精
￣１
２ ２ ８
任公司)ꎻＢＴ２２４Ｓ 型电子分析天平( 北京 Ｓａｔｏｒｉｕｓ 密称取 ３８.４１ ｍｇ ＡＢＴＳ 于 １０ ｍＬ 棕色容量瓶中ꎬ
天平有限公司)ꎻＫＱ￣５００ＤＥ 型数控超声波清洗器 用蒸馏水溶解并定容至刻度ꎬ摇匀后得 ７ ｍｍｏｌ

(昆山市超声仪器有限公司)ꎮ Ｌ ＡＢＴＳ 溶液ꎮ 将以上两种溶液按 １ ∶ １ 体积混
￣１
１.３ 方法 合定容至 ２５ ｍＬ 棕色容量瓶中ꎬ室温下暗处反应
１.３.１ 苦橙不同部位挥发油的提取 １３ ｈ 后ꎬ用无水乙醇稀释至其在 ７３４ ｎｍ 处吸光
１.３.１.１ 苦橙叶挥发油的提取 依照 ２０２０ 年版«中 度为 ０.７０±０.０２ꎮ 在具塞试管中加入 １ ｍＬ 不同
国药典»四部通则中 ２２０４ 挥发油测定法提取苦橙 浓度挥发油乙醇溶液和 ５ ｍＬ ＡＢＴＳ 工作液ꎬ涡旋

叶挥发油(Ｌ.Ｏ)ꎮ 取干燥苦橙叶 ８０ ｇ 于 １ ０００ ｍＬ 混匀ꎬ置于室温下避光反应 ６ ｍｉｎ 后于 ７３４ ｎｍ 处
￣１
圆底烧瓶中ꎬ按料液比 １ ∶ １０( ｇｍＬ ) 加入 ８００ 测量样品吸光度( Ａ ) ꎻ用无水乙醇代替样品溶液
ｉ
ｍＬ 蒸馏水ꎬ置于电炉上加热使微沸ꎬ连续提取 ５ 按上述方法测定对照品溶液吸光度( Ａ ) ꎻ用无水
ｃ
ｈꎬ得微黄绿色油状物ꎬ冷却后收集得 ０.７８０ ２ ｇ 挥
乙醇代替 ＡＢＴＳ 工作液按上述方法测定空白吸光
发油ꎮ 连续提取 ５ 次后得到苦橙叶挥发油供试品
度( Ａ ) ꎻ以 ＢＨＴ 为阳性对照ꎬ平行试验 ３ 次取平
ｏ
３.８０４ ｇꎬ密封ꎬ于 ４ ℃ 冰箱中避光保存ꎬ挥发油单
均值ꎬ按式(１) 计算ꎮ
次提取率为 ０.９５％ꎮ
Ａ －Ａ ｏ
ｉ
１.３.１.２ 苦橙花挥发油的提取 取盐浸苦橙花 ２８０ ＡＢＴＳ 自由基清除率(％)＝ (１－ ) ×１００
Ａ ｃ
ｇ 于 １ ０００ ｍＬ 圆底烧瓶中ꎬ按料液比 １ ∶ ３ ( ｇ
(１)
￣１
ｍＬ )加入 ８４０ ｍＬ 蒸馏水ꎬ按“１.３.１.１” 中方法提
１.３.３.２ ＤＰＰＨ 自由基清除率的测定 根据王定美
取苦橙花挥发油( Ｆ.Ｏ)ꎬ连续提取 ４ 次ꎬ待冷却后
等(２０２１)的方法ꎬ精密称取 ＤＰＰＨ 标准品 ４ ｍｇ 于
收集苦橙花挥发油供试品 ３.０５６ ｇꎬ密封ꎬ置于 ４ ℃
５０ ｍＬ 棕色容量瓶中ꎬ用无水乙醇溶解并定容至刻
冰箱中 避 光 保 存ꎬ 苦 橙 花 挥 发 油 单 次 提 取 率 为
度ꎬ摇匀后得到 ０.２ ｍｍｏｌＬ ＤＰＰＨ 母液ꎬ置于冰
￣１
０.２７％ꎮ
箱中冷藏保存ꎮ 准确量取 ＤＰＰＨ 母 液 １０ ｍＬ 于
１.３.１.３ 苦橙幼果挥发油的提取 取干燥苦橙幼果
１００ ｍＬ 棕色容量瓶中ꎬ用无水乙醇稀释并定容ꎬ摇
粉末 ２００ ｇ 于 １ ０００ ｍＬ 圆底烧瓶中ꎬ按料液比 １ ∶
匀后得到 ０.０２ ｍｍｏｌＬ 的 ＤＰＰＨ 工作液ꎮ 在具
￣１
４(ｇｍＬ )加入 ８００ ｍＬ 蒸馏水ꎬ按“１.３.１.１” 中方
￣１
塞试管中依次加入不同浓度的挥发油乙醇溶液
法提取苦橙幼果挥发油( ＹＦ.Ｏ)ꎬ连续提取 ４ 次得
２.０ ｍＬ 和 ＤＰＰＨ 工作液 ４.０ ｍＬꎬ涡旋混匀ꎬ于暗处
黄绿色油状物ꎬ冷却后收集得 ２.７０８ ｇ 苦橙幼果挥
发油供试品ꎬ密封ꎬ于 ４ ℃ 冰箱中避光保存ꎬ苦橙 反应 ３０ ｍｉｎ 后在 ５１７ ｎｍ 处测定样品吸光度(Ａ )ꎻ
ｉ
用无水乙醇代替样品溶液按上述方法测定对照品
幼果挥发油单次提取率为 ０.３４％ꎮ
溶液吸光度(Ａ )ꎻ用无水乙醇代替 ＡＢＴＳ 工作液按
１.３.２ ＧＣ￣ＭＳ 分析条件 ｃ
１.３.２.１ ＧＣ 条件 气相色谱条件:ＨＰ￣５ＭＳ 石英毛 上述方法测定空白吸光度( Ａ )ꎻ以 ＢＨＴ 为阳性对
ｏ
照ꎬ平行试验 ３ 次ꎬ按式(２)计算ꎮ
细柱(３０ ｍ × ０.２５ ｍｍ × ０.２５ μｍ)ꎻ柱温 ４５ ~ ２００
￣１ Ａ －Ａ
℃ ꎬ４５ ℃ 维持 ３ ｍｉｎꎬ２０ ℃ ｍｉｎ 升温至 ２００ ℃ ꎬ ｉ ｏ
ＤＰＰＨ 自由基清除率(％)＝ (１－ ) ×１００
维持 １０ ｍｉｎꎻ柱流量为 １.２ ｍＬｍｉｎ ꎻ进样口温度 Ａ ｃ
￣１
为 ２５０ ℃ ꎻ柱前压 ９.４６６ ７ ｐｓｉꎬ进样量 １ μＬꎻ不分 (２)
流ꎻ载气为高纯氦气ꎮ １.３.４ 抑菌实验
１.３.２.２ ＭＳ 条件 质谱条件:电离方式 ＥＩꎻ电子能 １.３.４.１ 抗菌活性评估 选用桂林医学院基础医
量 ７０ ｅＶꎻ传输线温度 ２５０ ℃ ꎻ离子源温度 ２３０ ℃ ꎻ 学院微生物实验室提供的 ３ 种致病菌ꎬ即大肠杆
四级杆温度 １５０ ℃ ꎻ质量范围 ５０ ~ ５５０ ａｍｕꎮ 菌 ( ＡＴＣＣ ２５９２２ ) 、 金 黄 色 葡 萄 球 菌 ( ＡＴＣＣ