Page 123 - 《广西植物》2023年第7期

７ 期 熊泽浩等: 甜荞花青素合成相关基因 ＦｅＲ２Ｒ３￣ＭＹＢ 的克隆与表达分析 １ ２ ９ １

Ｍ. ＤＮＡ 标 准 物 ２０００ꎻ １. 引 物 ＦｅＲ２Ｒ３￣ＭＹＢ￣Ｆ/ ＦｅＲ２Ｒ３￣
ＭＹＢ￣Ｒ 的扩增产物ꎮ
Ｍ. ＤＮＡ Ｍａｋｅｒ ２０００ꎻ １. Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｏｆ ｐｒｉｍｅｒｓ ＦｅＲ２Ｒ３￣ 图 ２ ＦｅＲ２Ｒ３￣ＭＹＢ 蛋白三级结构预测
ＭＹＢ￣Ｆ/ ＦｅＲ２Ｒ３￣ＭＹＢ￣Ｒ.
Ｆｉｇ. ２ Ｔｅｒｔｉａｒｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ＦｅＲ２Ｒ３￣ＭＹＢ ｐｒｏｔｅｉｎ
图 １ ＦｅＲ２Ｒ３￣ＭＹＢ 基因扩增产物电泳图
Ｆｉｇ. １ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｏｇｒａｍ ｏｆ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔ ｆｏｒ ＦｅＲ２Ｒ３￣ＭＹＢ
控制元件( ｃｉｒｃａｄｉａｎ)ꎻ含有 １２ 个 ＭＹＢ 转录因子
结合 位 点 ( １ 个 ＭＲＥ、５ 个 ＭＹＢ、２ 个 ＭＹＢ￣ｌｉｋｅ
在细胞核、细胞质、细胞膜上均有荧光分布ꎬ但是
ｓｅｑｕｅｎｃｅ、２ 个 Ｍｙｂ、２ 个 Ｍｙｂ￣ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ)ꎻ含有 １
转化 ３５Ｓ∷ＦｅＲ２Ｒ３￣ＭＹＢ￣ＧＦＰ 重组质粒的烟草细 个低温响应元件( ＬＴＲ)、 １ 个防御和应力响应元
胞ꎬ只有细胞核分布荧光ꎬ说明 ＦｅＲ２Ｒ３￣ＭＹＢ 定位 件( ＴＣ￣ｒｉｃｈ ｒｅｐｅａｔｓ) 和 ２ 个 厌 氧 诱 导 响 应 元 件
在细胞核上ꎬ具有典型的转录因子蛋白的特征ꎮ (ＡＲＥ)ꎻ 含 有 ２ 个 水 杨 酸 反 应 响 应 元 件 ( ＴＣＡ￣
２.６ ＦｅＲ２Ｒ３￣ＭＹＢ 基因的启动子顺式作用元件预测 ｅｌｅｍｅｎｔ)ꎮ
从荞麦基因库中调取 ＦｅＲ２Ｒ３￣ＭＹＢ 翻译起始 ２.７ ＦｅＲ２Ｒ３￣ＭＹＢ 基因在红花甜荞( ＨＨＴＱ) 和北
位点上游 ２ ３００ ｂｐ 的启动子序列ꎬ使用 ＰｌａｎｔＣａｒｅ 早生不同部位的表达模式
在线网站对其进行分析预测ꎬ同时使用 ＴＢｔｏｏｌｓ 对 初步分析 ＦｅＲ２Ｒ３￣ＭＹＢ 基因在 ＨＨＴＱ 和北早
顺式 作 用 元 件 进 行 可 视 化ꎮ 结 果 如 图 ６ 所 示: 生中的功能ꎬ利用 ｑＲＴ￣ＰＣＲ 定量分析甜荞叶片和
ＦｅＲ２Ｒ３￣ＭＹＢ 启动子序列中含有 ４９ 个真核生物转 花序中的表达情况(图 ７)ꎮ 结果显示ꎬＨＨＴＱ 叶片
录起始必需的 ＴＡＴＡ 框和 ３８ 个控制转录起始频 中 ＦｅＲ２Ｒ３￣ＭＹＢ 基因的表达量是北 早 生 的 ３. ０３
率的 ＣＡＡＴ 框ꎻ含 有 ８ 个 光 响 应 元 件 ( ２ 个 ＡＥ￣ 倍ꎻＨＨＴＱ 花序中 ＦｅＲ２Ｒ３￣ＭＹＢ 基因的表达量是北
ｂｏｘ、 ２ 个 ＧＴ１￣ｍｏｔｉｆ、 ２ 个 ＴＣＴ￣ｍｏｔｉｆ、 １ 个 ｃｈｓ￣ 早生的 ４.５５ 倍ꎮ 证明 ＦｅＲ２Ｒ３￣ＭＹＢ 基因可以正向
ＣＭＡ１ａ、１ 个 ３￣ＡＦ１ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ) 和 １ 个昼夜节律 调节甜荞花青素生物合成ꎮ