Page 56 - 《广西植物》2023年第7期

１ ２ ２ ４ 广 西 植 物 ４３ 卷
健康等方面发挥重要作用ꎬ另一方面其自身新陈 虎生长的主要生境ꎮ
代谢所产生的产物反过来可以促进或抑制植物的 于果实采收季节ꎬ分别在 ３ 个样地选取生长多
生长( Ｂｏｎｆａｎｔｅ ＆ Ａｎｃａꎬ ２００９ꎻ Ｆｉｅｒｅｒꎬ ２０１７)ꎮ 而 年、藤蔓高度木质化的健康植株ꎬ用铲子去除地表
同为木兰科的五味子内生真菌研究有一些报道ꎬ 植被和杂质ꎬ使用小锄头轻轻刨开土壤ꎬ寻找主根
五味子属植物中含有丰富的内生真菌ꎬ从不同来 周边的细根(直径≤２ ｍｍ)ꎬ挖取少量带土的细根
源、不同组织中分离的内生菌具有抗氧化、拮抗植 (Ｂｅｒｈｏｎｇａｒａｙ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１３)ꎮ 每 ３ 株 样 品 合 并 为

物病 原 菌 等 功 能 ( 潘 争 艳 等ꎬ ２００７ꎻ Ｇａｏ ｅｔ ａｌ.ꎬ １ 个生物学重复ꎬ每个样本设置 ３ 个生物学重复ꎬ
２０２０ꎻ张誉荠等ꎬ２０２１)ꎮ 此外ꎬ从五味子中陆续分 将样品收集至无菌采样袋中并密封保存ꎬ迅速置
离的一些内生真菌能够产生与宿主植物类似的木 于冷链箱内ꎬ于 ４ ｈ 内带回实验室处理ꎮ
脂素及三萜类ꎬ或具有转化宿主次生代谢物的功 将黑老虎根部的土壤抖落ꎬ留存附着在根部

能(Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１７ꎻＱｉｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１９ꎻＱｉｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ 无 法 抖 落 的 为 根 际 土 ( ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ ｓｏｉｌꎬ Ｒｈ )
２０２０)ꎮ 刘涛等(２０２３) 利用高通量测序技术对黑 (Ｅｄｗａｒｄｓ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１５)ꎬ将根系样品转移至无菌 ５０
老虎不同组织内生真菌进行了分析ꎬ明确了不同 ｍＬ 离心管中(含 ２０ ｍＬ 无菌 １０ ｍｍｏｌＬ ＰＢＳ 溶
￣１
组织内生真菌群落的结构和功能特征ꎮ 植物内生 液)ꎬ置于摇床 ( 苏州培英实验设备有限公司ꎬ培
真菌和根际真菌群落组成和结构受物种、地理环 英ꎬ型号:ＴＨＺ￣Ｃ￣１)ꎬ１２０ ｒｍｉｎ ꎬ室温下振荡 ２０
￣１
境、气候 和 土 壤 特 性 等 多 种 因 素 影 响 ( Ｐａｔｔｅｎ ＆ ｍｉｎ( Ｙｕ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１３)ꎮ 使用无菌镊子挑除根系ꎬ
Ｇｌｉｃｋꎬ２００２ꎻ Ｃｈａｐａｒｒｏ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１３ꎻ 王艳等ꎬ ２０１９)ꎮ 剩余悬浮液高速离心 (６ ０００ ｇꎬ４ ℃ ) ２０ ｍｉｎꎬ沉淀
目前ꎬ对黑老虎及南五味子属的研究多集中于营 即为根际土样品ꎬ液氮速冻后ꎬ置于－８０ ℃ 冰箱备
养成分和药理学研究ꎬ而对黑老虎根际真菌和内 用ꎮ 剩余的根系样品( ｒｏｏｔꎬＲ) 用自来水冲去表面
生真菌组成和多样性研究尚不多见ꎮ 多余的 根 际 土ꎬ进 行 表 面 消 毒 ( ７５％ 乙 醇 浸 泡 ２
本研究采用 ＩＴＳ 高通量测序技术研究了栽培 ｍｉｎꎬ５％次氯酸处理 ３ ｍｉｎꎬ无菌水清洗 ３ 次) 获得
和野生生境下多年生成熟黑老虎根际真菌和根部 表面消毒的根组织样品ꎬ液氮速冻后ꎬ置于－８０ ℃
内生真菌群落结构、组成和多样性ꎬ并开展了真菌 冰箱用于 ＤＮＡ 提取ꎮ
多样性和土壤理化因子的相关性分析ꎬ以期为黑 １.２ 土壤理化指标测定
老虎资源保护、土壤根际微生态环境研究及有益 土壤 ｐＨ 值测定:称取 ３ ｇ 土壤样品于 ５０ ｍＬ 烧
微生物的发掘和利用提供基础ꎮ 杯中ꎬ加入 ７.５ ｍＬ 去除 ＣＯ 的蒸馏水(水土比 ２.５ ∶
２
１)ꎬ用水平振荡器剧烈振荡 ２ ｍｉｎꎬ使土粒充分分散
１ 材料与方法 后ꎬ放置 ３０ ｍｉｎ 后用 ｐＨ 计测定ꎬ１ ｈ 内完成测定ꎮ

每个样品测定 ３ 次ꎬ计算平均值ꎮ 土壤总氮( ｔｏｔａｌ
１.１ 采样地点及样品处理 ｎｉｔｒｏｇｅｎꎬ ＴＮ) 采用半微量凯氏定氮法ꎬ总磷( ｔｏｔａｌ
选取贵州省 ３ 个黑老虎代表性研究样地(３ 个 ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓꎬ ＴＰ)采用 ＮａＯＨ 碱熔－钼锑抗分光光度
样地)ꎮ 贵阳(ＧＹ)样地ꎬ贵阳市贵州果树研究所黑 法ꎬ土壤总钾(ｔｏｔａｌ ｐｏｔａｓｓｉｕｍꎬ ＴＫ) 测定采用 ＮａＯＨ

老虎种质资源圃 ( １０６° ３９′３８. ３３″ Ｅ、２６° ２９′５９. ００″ 熔融法ꎬ土壤速效氮(ａｖａｌｉａｂｌｅ ｎｉｔｒｏｇｅｎꎬ ＡＮ)的测定
Ｎ)ꎬ海拔 １ ０５１ ｍꎬ为多年生人工管理种质资源圃ꎬ 采用碱解扩散法ꎬ土壤速效磷(ａｖａｉｌａｂｌｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓꎬ
土壤类型为中厚层红黄壤ꎻ榕江(ＲＪ) 样地ꎬ黔东南 ＡＰ)的测定采用分光光度法ꎬ土壤速效钾(ａｖａｉｌａｂｌｅ

苗族侗族自治州榕江县古州镇(１０８°２９′１５.１８″ Ｅ、 ｐｏｔａｓｓｉｕｍꎬ ＡＫ)的测定采用乙酸铵浸提法ꎬ土壤有
２５°５５′５２.４３″ Ｎ)ꎬ海拔 ３６１ ｍꎬ为野生样地ꎬ土壤类 机质(ｓｏｉｌ ｏｒｇａｎｉｃ ｍａｔｔｅｒꎬ ＳＯＭ) 的测定采用重铬酸
型为中厚层红黄壤为主ꎬ富含有机质ꎻ福泉(ＦＱ) 样 钾容量法ꎮ 每个样品重复 ３ 次ꎮ
地ꎬ 黔 南 布 依 族 苗 族 自 治 州 福 泉 市 金 山 街 道 １.３ ＤＮＡ 提取及高通量测序
(１０７°２４′１５.４８″ Ｅ、２６°４４′３６.６２″ Ｎ)ꎬ海拔 ９２８ ｍꎬ为 根系样品 ＤＮＡ 提取采用植物基因组 ＤＮＡ 提
野生样地ꎬ土壤类型以石灰石为主ꎬ富含 Ｐꎬ福泉有 取试剂盒( 货号:ＤＰ３０５ꎬ天根生化科技有限公司ꎬ
“亚洲磷都”之美誉ꎮ ３ 个样地分别代表不同栽培生 北京)ꎮ 根际土壤样品 ＤＮＡ 提取采用土壤 ＤＮＡ
境、不同土壤类型和不同酸碱度ꎬ代表了贵州黑老 提取试剂盒( 货号:ＤＰ３３６ꎬ天根生化科技有限公