Page 57 - 《广西植物》2023年第7期

７ 期 刘涛等: 不同生境黑老虎根际和内生真菌多样性分析 １ ２ ２ ５

司ꎬ北京)ꎮ ＩＴＳ 引物:ｆＩＴＳ７(５′￣ＧＴＧＡＲＴＣＡＴＣＧＡＡ 表 １ ３ 个样地黑老虎根际土壤理化特性
ＴＣＴＴＴＧ￣３′)和 ＩＴＳ４(５′￣ＴＣＣＴＣＣＧＣＴＴＡＴＴＧＡＴＡＴＧ Ｔａｂｌｅ １ Ｐｈｙｓｉｃａｌ ａｎｄ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｉｎｄｉｃｅｓ ｏｆ ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ
ｓｏｉｌ ｏｆ Ｋａｄｓｕｒａ ｃｏｃｃｉｎｅａ ｉｎ ｔｈｒｅｅ ｓａｍｐｌｅ ｐｌｏｔｓ
Ｃ￣３′)ꎮ 反应体系 (２５ μＬ):２ ×Ｐｈａｎｔａ Ｍａｘ ｍａｓｔｅｒ
￣１
ｍｉｘ １２.５ μＬꎬ正、反 向 引 物 ( １ μｍｏｌ Ｌ ) 各 ２. ５ 理化指标 贵阳 榕江 福泉
Ｐｈｙｓｉｃａｌ ａｎｄ ｃｈｅｍｉｃａｌ
μＬꎬＤＮＡ μＬ (５０ ｎｇ)ꎬｄｄＨ Ｏ ６.５ μＬꎮ ＰＣＲ 反应条 ＧＹ ＲＪ ＦＱ
２ ｉｎｄｉｃｅｓ
件:９４ ℃ / １ ｍｉｎ－(９４ ℃ / １０ ｓ－５０ ℃ / ３０ ｓ－７２ ℃ / 酸碱度 ４.６６±０.０６ｂ ４.６３±０.０６ｂ ７.２２±０.０４ａ
ｐＨ
４５ ｓ) ×３２ 个循环－７２ ℃ / １０ ｍｉｎꎮ ＰＣＲ 产物经 ２％
总氮 １.８２±０.０２ｃ ３.４４±０.０６ａ ２.４８±０.０２ｂ
琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 确 证ꎬ 用 ＡＭＰｕｒｅ ＸＴ ｂｅａｄｓ
￣１
ＴＮ (ｇｋｇ )
(Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｇｅｎｏｍｉｃｓꎬ Ｄａｎｖｅｒｓꎬ ＭＡꎬ ＵＳＡ)
总磷 ０.２３±０.０２ｃ ０.５４±０.０２ｂ １.５２±０.０３ａ
纯化ꎬＱｕｂｉｔ(Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎꎬ ＵＳＡ)定量ꎮ 扩增子文库的 ＴＰ (ｇｋｇ )
￣１
大小 和 数 量 分 别 用 Ａｇｉｌｅｎｔ ２１００ 生 物 分 析 仪 总钾 １３.４９±０.０８ｃ １７.１５±０.１９ｂ ２１.６２±１.３６ａ
￣１
ＴＫ (ｇｋｇ )
( Ａｇｉｌｅｎｔꎬ ＵＳＡ ) 和 Ｉｌｌｕｍｉｎａ ( Ｋａｐａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ
速效氮 １８１.４６±３.４４ｃ ３４０.６５±８.２６ａ ２４５.８８±４.９６ｂ
Ｗｏｂｕｒｎꎬ ＭＡꎬＵＳＡ)文库定量试剂盒进行评估ꎮ 高 ＡＮ (ｍｇｋｇ )
￣１
通量测序委托杭州联川生物技术有限公司完成ꎬ 速效钾 １２３.９７±５.２１ｃ １５４.０５±５.６６ｂ ４０８.６７±１０.９４ａ
￣１
所用平台 为 高 通 量 二 代 测 序 仪 ( Ｉｌｌｕｍｉｎａꎬ ＨｉＳｅｑ ＡＫ(ｍｇｋｇ )
４０００ꎬＵＳＡ)ꎮ 测序原始数据已提交至 ＮＣＢＩ 数据 速效磷 １.４２±０.０８ｃ ８.０２±０.１１ｂ ６６.２±０.３４ａ
￣１
ＡＰ (ｍｇｋｇ )
库 ( 项 目 号 为 ＰＲＪＮＡ８５５２９６ꎬ 样 品 编 号 为
有机质 ３２.８３±０.４９ｃ ６８.８５±１.０６ａ ４１.６８±０.９９ｂ
ＳＡＭＮ２９４８７９３０￣ＳＡＭＮ２９４８７９４７)ꎮ ＳＯＭ (ｇｋｇ )
￣１
１.４ 数据处理及分析
注: 不同小写字母表示在 Ｐ<０.０５ 水平上存在显著差异ꎮ
高通量测序获得的下机数据根据 Ｂａｒｃｏｄｅ 拆 Ｎｏｔｅ: Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｏｗｅｒｃａｓｅ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ (Ｐ<
分后ꎬ去除 Ｂａｒｃｏｄｅ 和接头序列ꎬ并进行质控、过 ０.０５).
滤ꎬ得到 Ｃｌｅａｎ ｄａｔａꎮ 使用 ＰＥＡＲ( ｖ０.９.６) 软件对
ｒｅａｄｓ 进行拼接合并获得原始 Ｔａｇｓꎮ 用 Ｆｑｔｒｉｍ 筛选 境(ＧＹꎬ ｐＨ ＝ ４. ６６) 和 榕 江 野 生 生 境 ( ＲＪꎬ ｐＨ ＝
Ｑ２０>２０ 的序列ꎮ 利用 Ｖｓｅａｒｃｈ( ｖ２.３.４) 去除嵌合 ４.６３)下的根际土壤为酸性( ｐＨ<６.５)ꎬ福泉野生
生境下的根际土壤 ｐＨ 呈中性( ＦＱꎬｐＨ ＝ ７.２２)ꎬ主
体获得最终有效数据用于进一步分析ꎮ 样本的 α
要是由于福泉土壤类型以石灰土最多ꎬ土壤 ｐＨ 呈
多样性指数采用 ｍｏｔｈｕｒ( ｈｔｔｐ: / / ｗｗｗ. ｍｏｔｈｕｒ. ｏｒｇ /
ｗｉｋｉ/ Ｓｃｈｌｏｓｓ＿ＳＯＰ＃Ａｌｐｈａ＿ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ) 软件计算ꎮ 应 中性ꎬ福泉素有“ 亚洲磷都” 之美誉ꎬ土壤富含 Ｐꎬ
此外 Ｋ 含 量 也 较 多ꎮ ＲＪ 根 际 土 壤 的 ＴＮ、 ＡＮ 和
用 Ｕｓｅａｒｃｈ 软 件 ( ｖｅｓｉｏｎ ７. ０ ｈｔｔｐ: / / ｄｒｉｖｅ５. ｃｏｍ /
ｕｐａｒｓｅ / )对有效数据序列在 ９７％的相似度下进行 ＳＯＭ 含量在 ３ 个样地中最高ꎻＦＱ 根际土壤的 ＴＰ、
ＯＴＵ ( Ｏｐｅｒａｔｉｏｎａｌ Ｔａｘｏｎｏｍｉｃ Ｕｎｉｔｓ ) 聚 类ꎬ 采 用 ＴＫ、ＡＰ 含量在 ３ 个样地中最高ꎻＧＹ 栽培生境下根
际土壤 ＴＮ、ＴＰ、ＴＫ、ＡＮ、ＡＫ、ＡＰ 及 ＳＯＭ 含量均显
Ｑｉｉｍｅ ２ 进行 ＯＴＵ 物种注释分析ꎬ获得样品 ＯＴＵ
的分类学信息ꎮ 韦恩图、ＰＣｏＡ 分析、ＲＤＡ 分析等 著低于野生生境( ＲＪ 和 ＦＱ)ꎮ 野生生境下的土壤
营养元素和有机质含量高于栽培生境ꎬ并且生态
利 用 联 川 云 平 台 ( ｈｔｔｐｓ: / / ｗｗｗ. ｏｍｉｃｓｔｕｄｉｏ. ｃｎ /
ｉｎｄｅｘ)进行ꎮ 利用 ＦＵＮＧｕｉｌｄ 软件对真菌进行功能 系统更为平衡ꎮ 原因可能为野生生境为茂密的树
预测分析(Ｎｇｕｙｅｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１６)ꎮ 采用 ＳＰＳＳ ２６ 对 林ꎬ存在较多腐殖质ꎬ有机质含量更为丰富且含水
土壤理化性质进行显著性差异分析ꎮ 量较高ꎬ土壤较为疏松ꎬ矿质营养元素不易流失ꎻ
而人工苗圃在管理过程中施用肥料不多ꎬ腐殖质
２ 结果与分析 和有机质偏少且土壤存在一定程度的板结ꎬ土壤
中的 Ｎ、Ｐ、Ｋ 等元素随雨水流失较为严重ꎮ
２.１ ３ 个样地黑老虎根际土壤理化特性 ２.２ 黑老虎根际土壤真菌及根部内生真菌测序
由表 １ 可知ꎬ３ 个不同生境下ꎬ黑老虎根际土 对 Ｉｌｌｕｍｉｎａ 高通量测序数据进行双端拼接、质
壤的理化指标存在显著差异ꎬ野生生境土壤主要 量控制、嵌合体过滤后ꎬ进行高质量数据统计ꎬ共获
养分指标高于栽培生境ꎮ ３ 个生境中ꎬ贵阳栽培生 得有 效 序 列 １ ４６３ ６１９ 个ꎬ 样 品 有 效 ｒｅａｄｓ 为