Page 17 - 《广西植物》2025年第2期

２ 期 刘坤等: 桑树桑黄总三萜的提取纯化及其生物活性研究 ２ １ ９

树桑黄总三萜含量和纯度ꎮ
１ 材料与方法 总三萜的质量(ｍｇ)
总三萜含量 ＝ ꎻ
所用干粉质量(ｇ)
１.１ 材料和仪器 纯度(％)＝
￣１
桑树桑黄购自吉林省敦化市ꎬ经河北经贸大 总三萜质量浓度(ｍｇｍＬ ) ×体积(ｍＬ)
×１００ꎮ
学张香美教授鉴定ꎻ人结肠癌细胞 ＨＣＴ￣１１６、人胃 样品质量(ｇ)
１.２.３ 单因素试验 按照 １.２.１ 的提取工艺进行单
腺癌细胞 ＳＧＣ７９０１、人前列腺癌细胞 ＰＣ３ 由河北
因素分析ꎬ分别考察提取温度、提取时间、液料比、
省科学院生物研究所程华老师提供ꎮ
乙醇 浓 度 ４ 个 因 素 对 桑 树 桑 黄 总 三 萜 含 量 的
香草醛、５￣氟尿嘧啶和齐墩果酸( 上海麦克林
生化有限公司)ꎻＤ１０１ 和 ＮＫＡ￣９ 型大孔树脂(北京 影响ꎮ
１.２.４ 响应面实验 根据单因素结果ꎬ选择乙醇浓
瑞达 恒 辉 科 技 发 展 有 限 公 司)ꎻ ＡＢ￣８、 ＡＤＳ￣８ 和
ＨＰＤ￣１００Ａ 型大孔树脂(天津浩聚树脂科技有限公 度(Ａ)、液料比( Ｂ) 和提取温度( Ｃ) 作为自变量ꎬ
以总三萜含量作为响应值ꎬ设计三因素三水平实
司)ꎻＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０ ( 上海源叶生物科技有限公
验对总三萜的提取工艺进行优化ꎬ试验因素与水
司)ꎻＤＰＰＨ 和 ＡＢＴＳ 试剂盒(上海碧云天生物技术
平设计见表 １ꎮ
有限公司)ꎻ高糖 ＤＭＥＭ 培养基、ＤＥＭ / Ｆ￣１２ １ ∶ １
培养基 ( Ｃｙｔｉｖａ 公 司)ꎻ 胰 蛋 白 酶￣ＥＤＴＡ 消 化 液、
ＤＭＳＯ、ＣＣＫ８ 试剂盒和细胞冻存液(北京索莱宝科 表 １ 响应面试验因素水平表
Ｔａｂｌｅ １ Ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｄｅｓｉｇｎ
技有限公司)ꎮ
ＢＪ￣１０００Ａ 振动式药物超微粉碎机( 青岛聚创 水平 Ｌｅｖｅｌ
因素 编码
环保 集 团 有 限 公 司)ꎻ ＦＲＱ￣１０１０ＨＴ 超 声 清 洗 仪 Ｆａｃｔｏｒ Ｎｏ.
１ ２ ３
(上海科导超声仪器有限公司)ꎻＡｌｐｈａ ２￣４ ＬＤｐｌｕｓ
冷冻干燥机(德国 Ｃｈｒｉｓｔ 公司)ꎻＭｕｌｔｉｓｋａｎ ＧＯ 酶标 乙醇浓度 Ａ ６５ ７５ ８５
Ｅｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ (％)
仪、液相色谱仪￣Ｖａｎｑｕｉｓｈ、质谱仪￣Ｏｒｂｉｔｒａｐ Ｅｘｐｌｏｒｉｓ 液料比
￣１ Ｂ ３０ ∶ １ ３５ ∶ １ ４０ ∶ １
Ｌｉｑｕｉｄ￣ｓｏｌｉｄ ｒａｔｉｏ (ｍＬｇ )
１２０(赛默飞世尔科技有限公司)ꎻＣ１７０ ＣＯ 细胞培
２
提取温度
养箱(德国艾本德股份公司)ꎮ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ (℃ ) Ｃ ３５ ４５ ５５
１.２ 实验方法
１.２.１ 桑树桑黄总三萜的提取 将桑树桑黄子实
１.２.５ 总三萜的分离纯化
体粉碎ꎬ６０ ℃ 烘干至恒重后ꎬ过 ４０ 目筛备用ꎮ 准
１.２.５.１ 大孔树脂的筛选 根据吸附率和解析率公
确称取 １ ｇ 的桑树桑黄干粉于离心管中ꎬ一定条件
式对 ＡＢ￣８、 ＡＤＳ￣８、 ＨＰＤ￣１００Ａ、 Ｄ１０１ 和 ＮＫＡ￣９ ５
下进行超声辅助乙醇提取(５００ Ｗ)ꎬ冷却后过滤提
种大孔树脂进行筛选ꎬ选用最佳的大孔树脂进行
取液ꎬ进一步减压浓缩和冷冻干燥后得到桑树桑
纯化ꎮ 将 ｐＨ 值为 ６ 的 １.５ ＢＶ 的上样溶液( 浓度
黄总三萜粗提物ꎮ
￣１ ￣１
为 １.０ ｍｇｍＬ )以 ２ ｍＬｍｉｎ 流速上样ꎬ吸附 ５
１.２.２ 总三萜含量和纯度的计算 按照李英迪等
ｈ 后ꎬ依次用 ２ ＢＶ 蒸馏水和 ５ ＢＶ ７０％乙醇溶液以
(２０２１)的三 萜 测 定 方 法ꎬ 即 依 次 吸 取 ０. ２ ｍｇ
￣１
２ ｍＬｍｉｎ 的速度洗脱ꎬ收集 ７０％乙醇的洗脱液ꎮ
￣１
ｍＬ 的齐墩果酸标准品溶液 ０、０.１、０.２、０.３、０.４、
( Ｃ －Ｃ )
０.５、０.６ ｍＬ 于 ２０ ｍＬ 比色管中ꎬ水浴蒸干溶剂ꎬ加 吸附率 ％ ) ＝ ０ １ ×１００ꎮ
(
入 ０.２ ｍＬ ５％的香草醛－冰醋酸溶液和 ０.８ ｍＬ 高 Ｃ ０
式中: Ｃ 和 Ｃ 分别为吸附前后溶液中总三萜
氯酸ꎬ振荡均匀ꎬ７５ ℃ 恒温水浴 １８ ｍｉｎꎬ取出后快 ０ １
￣１
速冷却ꎬ加入乙酸乙酯定容至 ５ ｍＬꎬ５５２ ｎｍ 处测 的浓度 (ｍｇｍＬ )ꎮ
定吸光度(Ａ)ꎮ 绘制齐墩果酸标准曲线ꎬ得线性回 ( Ｃ ×Ｖ )
２
２
(
解析率 ％ ) ＝ ×１００ꎮ
归方程 ｙ ＝ ３.５９１ １ｘ－０.０１６ ３(Ｒ ＝ ０.９９２ ９)ꎮ 称取 ( Ｃ －Ｃ ) ×Ｖ １
２
１
０
定量的总三萜提取物于试管中ꎬ根据线性方程计 式中: Ｃ 和 Ｃ 分别为吸附前后溶液中总三萜
１
０
￣１
算样品中总三萜的质量ꎬ再根据下面公式计算桑 的浓度 (ｍｇｍＬ )ꎻ Ｃ 为解吸附后溶液中总三萜
２