Page 28 - 《广西植物》2025年第2期

２ ３ ０ 广 西 植 物 ４５ 卷
到属ꎬ未能明确种且病样来源为广西隆安县ꎬ在核
心产区灵山县发生的广西莪术叶枯病的致病菌、 １ 材料与方法
生物学特性和室内药剂的种类与前人报道的是否

一致目前尚不清楚ꎮ １.１ 试验材料
基于以上情况ꎬ对于广西莪术主产区灵山的 样品来源:广西莪术为一年生植物ꎬ３ 月份种
叶枯病病原菌是否与隆安地区的一致ꎬ以此为防 植ꎬ病叶采集于 ２０２２ 年 ７ 月采集于广西钦州灵山
治靶标筛选出有效的防治药剂ꎬ同时掌握病原菌 陆屋镇(１０９°１７′２７.６０″ Ｅ、２２°２４′５９.３６″ Ｎ)ꎮ
生物学特性ꎬ对今后制定防治策略ꎬ实现病害的科 供试培养基:马铃薯葡萄糖琼脂培养基(ｐｏｔａｔｏ
学防治具有重要意义ꎮ 为此ꎬ本研究通过常规组 ｄｅｘｔｒｏｓｅ ａｇａｒꎬ ＰＤＡ )、 马 铃 薯 蔗 糖 琼 脂 培 养 基
织分离法对广西钦州市灵山县的广西莪术叶枯病 (ｐｏｔａｔｏ ｓｕｃｒｏｓｅ ａｇａｒꎬ ＰＳＡ)、 燕 麦 粉 琼 脂 培 养 基
病原菌进行分离纯化ꎬ并进行致病性测定ꎬ再结合 (ｏａｔｍｅａｌ ａｇａｒꎬ ＯＭＡ)、 玉 米 粉 琼 脂 培 养 基 ( ｃｏｒｎ

形态和多基因序列分析确定病原菌的分类地位ꎬ ｍｅａｌ ａｇａｒꎬ ＣＭＡ)、 沙 氏 培 养 基 ( ｓａｂｏｕｒａｕｄｓ ａｇａｒꎬ
测定其生物学特性ꎬ并研究 ４ 种药剂对致病菌的 ＳＤＡ)ꎬ其主要配方参考曹秀秀(２０２１)中的方法ꎮ
室内抑制活性ꎬ以期为广西莪术的田间防治提供 供试 化 学 药 剂: 室 内 抑 菌 试 验 的 药 剂 见
理论依据ꎮ 表 １ꎮ

表 １ ４ 种药剂名称、剂型、浓度及生产厂家
Ｔａｂｌｅ １ Ｎａｍｅｓꎬ ｄｏｓａｇｅ ｆｏｒｍｓꎬ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅｒｓ ｏｆ ｆｏｕｒ ｒｅａｇｅｎｔｓ
药剂 / 剂型 浓度 生产厂家
￣１
Ｒｅａｇｅｎｔ/ ｄｏｓａｇｅ ｆｏｒｍ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ (μｇｍＬ ) Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅｒ
９８％噁霉灵 ＳＰ ４９、２４.５、１２.２５、６.１２５、３.０６２ ５ 天津市绿亨化工有限公司
９８％ ｏｘａｍｉｌｉｎｅ ＳＰ Ｔｉａｎｊｉｎ Ｌüｈｅｎｇ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ.ꎬ Ｌｔｄ.
７５％肟菌戊唑醇 ＷＧ ２.５、１.２５、０.６２５、０.３１２ ５、０.１５６ ２５ 拜尔作物科学(中国)有限公司
７５％ ｏｘｉｍｍｅｐｅｎｔａｚｏｌｏｌ ＷＧ Ｂａｙｅｒ Ｃｒｏｐ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｃｈｉｎａ Ｃｏ.ꎬ Ｌｔｄ.
￣１
２５０ ｇＬ 吡唑醚菌酯 ＥＣ ０.６２５、０.３１２ ５、０.１５６ ３、０.０７８ １３、０.０３９ ０６ 巴斯夫植物保护(江苏)有限公司
￣１
２５０ ｇＬ ｐｙｒａｃｌｏｓｔｒｏｂｉｎ ＥＣ ＢＡＳＦ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ (Ｊｉａｎｇｓｕ) Ｃｏ.ꎬＬｔｄ.
￣１ 山东田当家生态农业科技有限公司
１ ｂｎｇ 哈茨木霉菌 ＳＣ １０、５、２.５、１.２５、０.６２５
￣１
１ ｂｎｇ Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｈａｒｚｉａｎｕｍ ＳＣ Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｔｉａｎｄａｎｇｊｉａ Ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ
Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ.ꎬ Ｌｔｄ.
１.２ 试验方法 ℃ 恒温培养箱培养ꎬ每处理 ３ 次重复ꎬ每天观察并
１.２.１ 病原菌分离纯化 参考方中达(１９９８) 的常 记录叶片发病情况ꎮ 叶片发病后再次分离ꎬ并鉴
规组织法分离ꎬ取新鲜感病样品的病健交界处ꎬ剪 定与接种用的菌株形态是否一致ꎬ完成柯赫氏法
取 ５ ｍｍ × ５ ｍｍ 大小的组织块ꎬ用 ７５％乙醇消毒 则验证(谢联辉ꎬ２００６)ꎮ
３０ ｓꎬ２.５％ 的次氯酸钠消毒 ３ ｍｉｎꎬ无菌水冲洗 ３ １.２.３ 病原菌鉴定 参考方中达(１９９８) 的方法记
遍ꎬ晾干ꎬ然后转接到 ＰＤＡ 培养基上ꎬ置于恒温 ２８ 录菌落形态ꎬ参考魏景超(１９７９) 的方法和国际分
℃ 培养箱培养ꎬ待长出菌落后ꎬ将新长出的菌丝尖 类网站( ｈｔｔｐ: / / ｗｗｗ. ｉｎｄｅｘｆｕｎｇｏｒｕｍ. ｏｒｇ) 进行菌落
端转入新的 ＰＤＡ 平板ꎬ纯化于 ＰＤＡ 培养基上培养 形态初步鉴定ꎮ 参考 Ｋｕｍａｒ 等(２０１６) 的方法ꎬ利

５ ｄ 备用ꎮ 用 ＭＥＧＡ ７.０ 的邻位连接法构建 ＩＴＳ ｒＤＮＡ 系统发
１.２.２ 致病性测定试验 采用叶片离体试验进行 育进化树ꎬ进行分子生物学鉴定ꎻ采用 ＭｉｇｈｔｙＡｍｐ
致病性测定ꎮ 选取健康广西莪术幼苗的叶片ꎬ先 ＤＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｖｅｒ. ３ ( １. ２５ Ｕ / ５０ μＬ) 试 剂 盒
用自来水冲洗叶片表面的灰尘ꎬ晾干ꎬ再用 ７５％乙 (Ｔａｋａｒａ Ｂｉｏ Ｉｎｃ.ꎬＪａｐａｎꎬｃａｔ. ｎｏ. Ｒ０７６Ａ)ꎬ利用核糖
醇进行表面消毒ꎬ于叶片正面中部对称的两边用 体 ＤＮＡ 内部转录间隔区 ＩＴＳ(ＩＴＳ１ / ５′￣ＴＣＣＧＴＡＧＧ
无菌接种针形成伤口ꎬ在培养基上取直径 ８ ｍｍ 菌 ＴＧＡＡＣＣＴＧＣＧＧ￣３′、ＩＴＳ４ / ５′￣ＴＣＣＴＣＣＧＣＴＴＡＴＴＧＡＴ
块ꎬ菌丝朝向接种叶片伤口处ꎬ以 ＰＤＡ 为对照ꎬ２８ ＡＴＧＣ￣３′) ( Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ.ꎬ１９９０)、 β￣微 管 蛋 白 ＴＵＢ