Page 7 - 《广西植物》2025年第2期
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２ 期 刘振强等: 防风地上部分化学成分及抗炎活性研究 ２ ０ ９
Ｃａｒｌ Ｚｅｉｓｓ 公司)ꎻＴＤＬ￣４ 型低速离心机( 上海安亭 ９→１ ∶ ０) 进行分离ꎬ得到 ５０ 个组分( Ｆｒ. Ｇ１ － Ｆｒ.
科学仪器厂)ꎻＷＴ￣１ＮＤ 超净台(北京王堂蓝翼科技 Ｇ５０)ꎬＦｒ. Ｇ１２ 经 半 制 备 型 ＨＰＬＣ ( ＭｅＯＨ / Ｈ Ｏ ＝
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有限公司)ꎻ分析型色谱柱ꎬ半制备型色谱柱ꎬ制备 ３２％)分离得到化合物 １５(８.６ ｍｇ)ꎮ
型色谱柱(美国 Ｗａｔｅｒｓ 公司)ꎻ柱层析硅胶(青岛海 使用正相硅胶柱色谱将 ７０％ 乙醇洗脱 部 位
洋化工厂)ꎻ薄层色谱用硅胶板(德国 Ｍｅｒｃｋ 公司)ꎻ (２９５.６ ｇ) 进行分离ꎬ流动相采用二氯甲烷 －甲醇
地塞米松(ＤＸＭＳꎬ广东南国药业有限公司)ꎻ胎牛血 (１ ∶ ０→０ ∶ １)进行梯度洗脱ꎮ 旋转蒸发仪浓缩之
清( ＦＢＳꎬ 美国 Ｇｉｂｃｏ 公司)ꎻ ＤＭＥＭ 培养基 ( 美国 后通过薄层色谱并结合分析型 ＨＰＬＣ 进行检识合
Ｇｉｂｃｏ 公司)ꎻ青霉素－链霉素－两性霉素 Ｂ (３ 抗) 并ꎬ得到 ８ 个组分(即 Ｆｒ.１－Ｆｒ.８)ꎮ Ｆｒ.２ 经 ＯＤＳ 反
(上海 碧 云 天 公 司)ꎻ 二 甲 基 亚 砜 ( ＤＭＳＯꎬ 美 国 相柱色谱以甲醇－水为洗脱剂(１ ∶ ９→１ ∶ ０) 进行
Ｓｉｇｍａ￣Ａｌｄｒｉｃｈ 公司)ꎻ一氧化氮检测试剂盒(上海碧 分离ꎬ得到 ６ 个组分 Ｆｒ.２Ａ－Ｆｒ.２Ｆꎬ Ｆｒ.２Ｂ 经制备型
云天 公 司)ꎻ 脂 多 糖 ( ＬＰＳꎬ 美 国 Ｓｉｇｍａ￣Ａｌｄｒｉｃｈ 公 ＨＰＬＣ 分离得化合物 ２(５.５ ｍｇ)、化合物 ３( １４.４
司)ꎻ９６ 孔板(美国 Ｃｏｒｎｉｎｇ 公司)ꎻ色谱层析用化学 ｍｇ)、化合物 ６( ４.３ ｍｇ)ꎮ Ｆｒ.２Ｃ 经制备型 ＨＰＬＣ
试剂(分析纯ꎬ天津试剂一厂)ꎮ 分离得化合物 ７(７.２ ｍｇ)ꎮ Ｆｒ.２Ｄ 经制备型 ＨＰＬＣ
分离得化合物 ４(６.３ ｍｇ)、化合物 ５ ( １３. ０ ｍｇ)ꎮ
２ 研究方法 Ｆｒ.３ 经 ＯＤＳ 反相柱色谱以甲醇－水为洗脱剂(１ ∶
９→１ ∶ ０) 进行分离ꎬ得到 ３ 个组分 Ｆｒ.３Ａ－Ｆｒ.３Ｃꎬ
２.１ 提取和分离 Ｆｒ.３Ａ 经 半 制 备 型 ＨＰＬＣ 分 离 得 化 合 物 １１ ( ５. ２
称取干燥防风地上部分 ２０.０ ｋｇꎬ用 ７０％乙醇 ｍｇ)、化合物 １２(３.９ ｍｇ)ꎮ 化合物 １－１５ 的结构如
(１０ 倍量)加热回流提取 ２ 次ꎬ每次 ２ ｈꎬ旋转蒸发 图 １ 所示ꎮ
仪减压浓缩ꎬ回收溶剂得防风提取物浸膏 ６.３ ｋｇꎬ ２.２ 抗炎活性
出膏率为 ３１.５％ꎮ 取 １.３ ｋｇ 浸膏均匀溶于蒸馏水 ２.２.１ 供试品溶液的配置
中ꎬ采用大孔树脂 ＨＰ￣２０ 对其进行分离ꎬ得到 １０％ ２.２.１.１ 待测化合物配置 取化合物 １－１５ 适量ꎬ用
乙醇组分 １４７.０ ｇ、５０％乙醇组分 ３００.０ ｇ、７０％乙醇 少量二甲基亚矾( ＤＭＳＯ) 溶解成母液ꎬ使用前用
组分 ３３０.０ ｇ 和 ９５％乙醇组分 ２３.２ ｇꎮ ＤＭＥＭ 培养基稀释至所需浓度ꎮ
取 ３００.０ ｇ 防风 ５０％乙醇洗脱部位ꎬ采用硅胶 ２.２.１.２ ＬＰＳ 溶液配置 在紫外灯消毒半小时后的
柱层析法ꎬ使用二氯甲烷－甲醇(１ ∶ ０→０ ∶ １) 作为 超净 台 中 精 密 称 取 １０ ｍｇ ＬＰＳ 粉 末 配 制 成 为
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洗脱剂进行梯度洗脱ꎬ得到 ７ 个馏分ꎬ即 Ｆｒ.Ａ－Ｆｒ.Ｇꎮ １ ｍｇｍＬ 的储存液并进行分装后ꎬ于－２０ ℃ 储存
Ｆｒ.Ｄ 经 ＯＤＳ 反 相 柱 色 谱 以 甲 醇 － 水 为 洗 脱 剂 备用ꎮ 实验时将储备液稀释至 １ μｇｍＬ 的终浓度ꎮ
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(１ ∶ ９→１ ∶ ０) 进行分离ꎬ得到 １５ 个组分( Ｆｒ.Ｄ１－ ２.２.１.３ 阳性药配置 精密称取地塞米松(ＤＸＭＳ)药
Ｆｒ.Ｄ１５)ꎬ将 Ｆｒ.Ｄ３ 经硅胶柱层析法ꎬ以二氯甲烷－甲 品 １.５７ ｍｇꎬ溶于 ２ ｍＬ 含 １％ ＤＭＳＯ 的 ＤＭＥＭ 培养
醇(２５ ∶ １→０ ∶ １) 体系进行梯度洗脱ꎬ得到 ７ 个组 基中ꎬ配成 ２ ｍｍｏｌＬ 的阳性药溶液(母液)ꎬ于－
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分(Ｆｒ.Ｄ３￣１－Ｆｒ.Ｄ３￣７)ꎮ 将 Ｆｒ.Ｄ３￣４ 经半制备 ＨＰＬＣ ８０ ℃冻存备用ꎮ 使用时将其稀释至 １０ μｍｏｌＬ 的
(ＭｅＯＨ/ Ｈ Ｏ ＝ ４２％) 分离得到化合物 ９(６.７ ｍｇ)ꎮ 工作浓度ꎬ采用同等操作制备 ＤＭＳＯ 对照液ꎮ
２
将 Ｆｒ.Ｄ３￣５ 经半制备型 ＨＰＬＣ( ＭｅＯＨ/ Ｈ Ｏ ＝ ４４％) ２.２.２ 细胞培养
２
分离得到化合物 ８(５.８ ｍｇ)和化合物 １０(１０.６ ｍｇ)ꎮ 将含有 ＲＡＷ 细胞的冻存管(１ ｍＬ)ꎬ放入 ３７
Ｆｒ.Ｆ 经 ＯＤＳ 反 相 柱 色 谱 以 甲 醇 － 水 为 洗 脱 剂 ℃ 水浴锅中摇晃解冻ꎬ而后混合物以 １ ０００ ｒ
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(１ ∶ ９→１ ∶ ０) 进行分离ꎬ得到 ５９ 个组分( Ｆｒ.Ｆ１－ ｍｉｎ 转速离心 ５ ｍｉｎꎬ弃去上清液ꎬ加入 １ ｍＬ 的含
Ｆｒ.Ｆ５９)ꎬＦｒ.Ｆ１２ 经半制备型 ＨＰＬＣ( ＭｅＯＨ / Ｈ Ｏ ＝ １０％胎牛血清和 １％ ３ 抗(青霉素－链霉素－两性霉
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３８％)分离得到化合物 １４(５.６ ｍｇ)ꎮ Ｆｒ.Ｆ３１ 经半 素 Ｂ)的 ＤＭＥＭꎮ 将所有细胞悬液转至含已预热 ４
制备型 ＨＰＬＣ( ＭｅＯＨ / Ｈ Ｏ ＝ ６０％) 分离得到化合 ｍＬ 培养基的 Ｔ￣２５ 培养瓶中ꎬ并放置于 ３７ ℃ 、５％
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物 １３ ( ５. ６ ｍｇ )ꎮ Ｆｒ. Ｆ３３ 经 半 制 备 型 ＨＰＬＣ ＣＯ 的 细 胞 培 养 箱 中 培 养 过 夜ꎮ 待 细 胞 长 至
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(ＭｅＯＨ / Ｈ Ｏ ＝ ５８％)分离得到化合物 １(９.８ ｍｇ)ꎮ ８０％ ~ ９０％时进行传代ꎮ
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Ｆｒ.Ｇ 经 ＯＤＳ 反相柱色谱以甲醇－水为洗脱剂(１ ∶ 弃去培养上清液ꎬ 用 ２ ｍＬ 无菌预冷的 ＰＢＳ 清
