Page 120 - 《广西植物》2022年第9期

ϟ ጢ ጢ ᤃ 广জ 西জ 植জ 物 ࿗԰ 卷
ԣॹ྽ 基因枪轰击处理及抗性烟苗获得
参照程义琳等ྉ԰ԡϟሕɯ 的方法ᖔ结合耿立召等
ྉ԰ԡԡጢɯ 和宫本贺等ྉ ԰ԡϟԡɯ 的方法ᖔ用包裹金颗
粒的 ኏શዶ ᣰ ᧕શዶ 寡 聚 核 苷 酸嵌合体 ऊၤ᤟᥋ጢऐऐ 和
ऊၤ᤟᥋ϟᎮϟँ 以 ँዹቝ 的轰击距离ܦ԰ጢ ᔽႿ̀੫ 的轰击压
强对烟草品种ጸ ᣽ሕ԰ᤃᆥ 愈伤组织进行基因枪轰击
处理ᤥ 轰击后的愈伤组织经过恢复培养ᖔ氯磺隆
大写字母为 ᧕શዶ 残基ଫ 小写字母为 ԰ࣕ᥋ᨃ᥋኏શዶ 残基ଫ 框内 筛选分化培养及抗性芽生根培养获得具有氯磺
字母代表突变位点ᤥ 隆抗性的烟草植株 ԰԰ 株ྉ 图 ጢɯ ᤥ
ऊᑕᡱᔽᡷᑕ᤟ ᤟ᔀᡷᡷᔀʢ༁ ʢᔀᡱʢᔀ༁ᔀႿᡷ ᧕શዶ ʢᔀ༁ᔽʛࣼᔀ༁ଫ ᓂᆍऔᔀʢዹᑕ༁ᔀ ᤟ᔀᡷᡷᔀʢ༁
ԣॹጇ 抗性烟苗的 ዛᒦ୒ 酶活性测定
ʢᔀᡱʢᔀ༁ᔀႿᡷ ԰ࣕ᥋ᨃ᥋኏શዶ ʢᔀ༁ᔽʛࣼᔀ༁ଫ ᓂᔀᡷᡷᔀʢ༁ ᔽႿ ᤦᆍ଴ ʢᔀᡱʢᔀ༁ᔀႿᡷ ᡷၤᔀ
ቝࣼᡷᑕᡷᔽᆍႿ ༁ᔽᡷᔀ༁঎ 通过对野生型烟草品种ጸ ᣽ሕ԰ᤃᆥ 的 ዶᓂ୩ 酶活
图 ሕজ 嵌合体 ኏શዶᣰ ᧕શዶ 寡聚核苷酸 性进行不同浓度氯磺隆敏感性检测发现ᖔ在氯磺
èᔽ੫঎ ሕজ ऊၤᔽቝᔀʢᔽዹ ኏શዶᣰ ᧕શዶ ᆍ᤟ᔽ੫ᆍႿࣼዹ᤟ᔀᆍᡷᔽʛᔀ 隆浓度为 ሕԡԡ ጲ ጢԡԡ ဂቝᆍ᤟ኼᓂ 时ᖔዶᓂ୩ 酶活性保持
᥋ϟ

ዛ঎ 烟草愈伤诱导及分化ଫ ଧ঎ 愈伤组织对不同浓度氯磺隆敏感性响应 ྉዛͱ̵ 分别为 ँԡܦϟԡԡܦϟϟԡܦϟ԰ԡܦϟሕԡܦϟ࿗ԡܦϟጢԡܦϟᤃԡ Ⴟቝᆍ᤟ኼ
᥋ϟ
ᓂ 氯磺隆ɯᤥ
ዛ঎ ऊᑕ᤟᤟ࣼ༁ ᔽႿʛࣼዹᡷᔽᆍႿ ᑕႿʛ ʛᔽ஦஦ᔀʢᔀႿᡷᔽᑕᡷᔽᆍႿ ᔽႿ ᡷᆍᤦᑕዹዹᆍଫ ଧ঎ ୩ᔀႿ༁ᔽᡷᔽ׹ᔀ᤟ᢃ ʢᔀ༁ᡱᆍႿ༁ᔀ ᆍ஦ ዹᑕ᤟᤟ࣼ༁ ᡷᆍ ʛᔽ஦஦ᔀʢᔀႿᡷ ዹᆍႿዹᔀႿᡷʢᑕᡷᔽᆍႿ༁ ᆍ஦ ዹၤ᤟ᆍʢ༁ࣼ᤟஦ᆍႿᆍႿ ྉ ዛͱ̵ ʢᔀᡱʢᔀ༁ᔀႿᡷ
᥋ϟ
ᡷၤᔀ ዹᆍႿዹᔀႿᡷʢᑕᡷᔽᆍႿ ᆍ஦ ዹၤ᤟ᆍʢ༁ࣼ᤟஦ᆍႿᆍႿ ँԡᖔ ϟԡԡᖔ ϟϟԡᖔ ϟ԰ԡᖔ ϟሕԡᖔ ϟ࿗ԡᖔ ϟጢԡᖔ ϟᤃԡ Ⴟቝᆍ᤟ኼᓂ ᖔ ʢᔀ༁ᡱᔀዹᡷᔽ׹ᔀ᤟ᢃɯ঎
图 ࿗জ 烟草品种ጸ᣽ሕ԰ᤃᆥ愈伤组织诱导及氯磺隆敏感性分析
èᔽ੫঎ ࿗জ ऊᑕ᤟᤟ࣼ༁ ᔽႿʛࣼዹᡷᔽᆍႿ ᆍ஦ ᡷᆍᤦᑕዹዹᆍጸ᣽ሕ԰ᤃᆥ ᑕႿʛ ༁ᔀႿ༁ᔽᡷᔽ׹ᔽᡷᢃ ᑕႿᑕ᤟ᢃ༁ᔽ༁ ᆍ஦ ዹၤ᤟ᆍʢ༁ࣼ᤟஦ࣼʢᆍႿ

最低ᖔ在小于 ሕԡԡ ဂቝᆍ᤟ኼᓂ 时ᖔ随着氯磺隆浓度逐 ԣॹᣤ 抗性烟苗 ዛᒦ୒ 基因突变区序列扩增及测序
᥋ϟ
渐降 低ᖔዶᓂ୩ 酶活性逐渐增强ᖔ 于是选取 ሕϟԡ 利用特异引物ᖔ对ጸ ᣽ሕ԰ᤃᆥ ዛᒦ୒ 中 ጢऐऐ 位点的
᥋ϟ
ဂቝᆍ᤟ኼᓂ 的氯磺隆作为检测 ዶᓂ୩ 酶活性的标准ᤥ 保守区及 ϟᎮϟँ 位点的保守区进行 ۪ऊ኏ 扩增ᖔ产物
抗性植株与野生型植株的 ዶᓂ୩ 酶活性检测结果显 直接进行测序ᖔ扩增产物无杂带ྉ 图 Ꭾɯᖔ在上述 ԰԰
示ᖔ在抗性植株中有 ऐ 株ྉऊၤ᤟᥋ሕܦऊၤ᤟᥋ጢܦऊၤ᤟᥋ऐܦऊၤ᤟᥋ϟϟܦ 个抗性植株中检测到 ԰ 株发生了特定位点的突
ऊၤ᤟᥋ϟ԰ܦऊၤ᤟᥋ϟऐܦऊၤ᤟᥋԰ԡܦऊၤ᤟᥋԰԰ɯ的 ዶᓂ୩ 酶活性明显高 变ᖔ命名为突变株系 ஦ϟϟ 和 ᤦϟऐᖔ前者在 ጢऐऐ 位点
于野生型的ྉ图 ᤃɯᤥ 因此ᖔ推测这 ऐ 株定点诱变成功 发生了 ऊ܀ዶ 的突变ᖔ后者在 ϟᎮϟँ 位点发生了᥈܀

的可能性较大ᤥ ఋ 的突变ྉ图 ऐɯᤥ