Page 66 - 《广西植物》2020年第2期

２ 期 王伟妍等: 滇龙胆 ８￣羟香叶醇氧化还原酶基因的克隆与表达分析 ２ ０ ３

黑色表示相似性等于 １００％ꎻ粉红色表示 ７５％≤相似性<１００％ꎻ浅蓝色表示 ５０％≤相似性<７５％ꎮ
Ｂｌａｃｋ ｉｎｄｉｃａｔｅｓ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ＝ １００％ꎻ Ｐｉｎｋ ｉｎｄｉｃａｔｅｓ ７５％≤ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ<１００％ꎻ Ｌｉｇｈｔ ｂｌｕｅ ｉｎｄｉｃａｔｅｓ ５０％≤ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ<７５％.
图 ２ Ｇｒ８ＨＧＯ 蛋白与其他植物 ８ＨＧＯ 蛋白的多序列比对结果
Ｆｉｇ. ２ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｏｆ Ｇｒ８ＨＧＯ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ ８ＨＧＯ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｏｔｈｅｒ ｐｌａｎｔｓ

性 引 物 共 克 隆 到 ５ 个 Ｇｒ８ＨＧＯ 基 因ꎬ 分 别 为 Ｃｒ８ＨＧＯ 蛋白序列相似性均最高ꎬ分别为 ８４.３１％、
Ｇｒ８ＨＧＯ￣１(ＫＰ７２２０２９.１)、Ｇｒ８ＨＧＯ￣２(ＫＰ７２２０３０.１)、 ８４.３１％、８４.８４％、８４.５７％、８４.８４％ꎬ其次是中果咖
Ｇｒ８ＨＧＯ￣３(ＫＰ７２２０３１.１)、Ｇｒ８ＨＧＯ￣４(ＫＰ７２２０３２.１)、 啡 ８１.２５％、８１.０７％、８１.３３％、８１.０７％、８１.３３％ꎬ再
Ｇｒ８ＨＧＯ￣５(ＫＰ７２２０５２.１)ꎬ其中 Ｇｒ８ＨＧＯ￣１ 基因 ＯＲＦ 次是 油 橄 榄 ７３. ８６％、７３. ８７％、７４. １３％、７３. ８７％、
长 １ ０６２ ｂｐꎬ编码 ３５３ 个氨基酸ꎻ其余 ４ 条基因 ＯＲＦ ７４.１３％ꎮ 多序列比对分析结果表明 ５ 个 Ｇｒ８ＨＧＯ
长 １ １３１ ｂｐꎬ编码 ３７６ 个氨基酸ꎮ 蛋白与已知 ８ＨＧＯ 蛋白序列相似性很高(图 ２)ꎬ总
２.２ Ｇｒ８ＨＧＯ 基因的生物信息学分析 体相似度高达 ９１.２７％ꎮ 利用 ＭＥＧＡ Ｘ 将 Ｇｒ８ＨＧＯ
利用 ＧｅｎＢａｎｋ 数 据 库 中 的 ＢＬＡＳＴｐ 程 序 和 氨基酸序列与 ＢＬＡＳＴｐ 比对中相似性较高的蛋白
ＤＮＡＭＡＮ ７ 对 Ｇｒ８ＨＧＯ 蛋白的氨基酸序列进行相 氨基酸序列进行系统发育分析ꎬ结果显示 ５ 个滇

似性分析ꎬ结果表明滇龙胆 Ｇｒ８ＨＧＯ￣１、Ｇｒ８ＨＧＯ￣２、 龙胆 Ｇｒ８ＨＧＯ 蛋白与长春花 Ｃｒ８ＨＧＯ 蛋白处于同
Ｇｒ８ＨＧＯ￣３、Ｇｒ８ＨＧＯ￣４、 Ｇｒ８ＨＧＯ￣５ 蛋 白 与 长 春 花 一进化枝(图 ３)ꎬ表明它们的亲缘关系较近ꎮ