Page 131 - 《广西植物》2020年第8期
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图 ４ 原核表达载体 ｐＥＴ￣３０ｂ￣ＣｒＪＡＲ１ 的 ＰＣＲ 和酶切验证
Ｆｉｇ. ４ ＰＣＲ ａｎｄ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｅｎｚｙｍｅ ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ ｐＥＴ￣３０ｂ￣ＣｒＪＡＲ１
Ｍ. 蛋白 ｍａｋｅｒꎻ １－５. １６ ℃ 诱导 ０ 、２ 、４ 、 ８、１６ ｈ 全菌ꎻ ６－１０. ３７ ℃ 诱导 ０ 、２ 、４ 、 ８、１６ ｈ 全菌ꎮ
Ｍ. Ｐｒｏｔｅｉｎ ｍａｋｅｒꎻ １－５. １６ ℃ ｉｎｄｕｃｅｄ ０ꎬ ２ꎬ ４ꎬ ８ꎬ １６ ｈ ｗｈｏｌｅ ｂａｃｔｅｒｉａꎻ ６－１０. ３７ ℃ ｉｎｄｕｃｅｄ ０ꎬ ２ꎬ ４ꎬ ８ꎬ １６ ｈ ｗｈｏｌｅ ｂａｃｔｅｒｉａ.
图 ５ 不同温度诱导表达 ＣｒＪＡＲ１ 的 ＳＤＳ￣ＰＡＧＥ 分析
Ｆｉｇ. ５ ＳＤＳ￣ＰＡＧＥ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＣｒＪＡＲ１ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ
测ꎬ发现该蛋白含有茉莉酸酰胺合成酶保守的结 度 ＩＰＴＧ 在不同温度下进行诱导ꎬ发现诱导表达 １６
构域ꎬ属于 ＧＨ３ 家族成员ꎬ并且通过进化树分析发 ｈ 后ꎬＣｒＪＡＲ１ 蛋白表达量最高ꎮ 此外ꎬ该酶体外功
现长春花 ＣｒＪＡＲ１ 蛋白与笋瓜和番木瓜的 ＪＡＲ１ 蛋 能验证也在进行ꎮ 尽管如此ꎬ现阶段的研究仍有
白的亲缘关系比较近ꎬ表明 ＣｒＪＡＲ１ 蛋白可能是在 助于我们深入研究长春花中茉莉酸生物合成途径
长春花的茉莉酸信号途径中合成 ＪＡ￣Ｉｌｅ 的关键酶ꎮ 以及信号传导机制ꎬ并为研究长春花中次级代谢
构建重组质粒 ｐＥＴ￣３０ｂ￣ＣｒＪＡＲ１ꎬ并且成功在大肠 产物的生物合成提供依据ꎮ
杆菌 ＢＬ２１ 中异源表达 ＣｒＪＡＲ１ 蛋白ꎮ 通过不同浓 目前对于长春花中次级代谢产物的研究主要
