Page 125 - 《广西植物》2023年第10期
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１０ 期 车金凤等: 罗布麻和大麻状罗布麻 ＵＶ￣Ｂ 光受体 ＵＶＲ８ 基因的鉴定及表达分析 １ ８ ７ ９
ＣｅｌｌＰＬｏｃ￣２ / )ꎬ选择 Ｅｕｋ￣ＰＬｏｃ ２.０ 进行 ＵＶＲ８ 蛋白 分别在 ＵＶ￣Ｂ 处理的第 ０ 天、第 ０.５ 天、第 １ 天、第
核定位分析ꎮ ４ 天、第 ７ 天(ｄ０、ｄ０.５、ｄ１、ｄ４、ｄ７)对植株上部成熟
１.２.６ 两种罗布麻 ＵＶＲ８ 蛋白跨膜结构预测、信号 叶片进行取样ꎬ每个样本均为 ３ 个生物学重复ꎬ
肽分析和磷酸化位点分析 蛋白跨膜结构利用软 －８０ ℃ 保存ꎮ 本研究借助前期试验的转录组数据
件 ＴＭＨＭＭ ２. ０ ( ｈｔｔｐ: / / ｗｗｗ. ｃｂｓ. ｄｔｕ. ｄｋ / ｓｅｒｖｉｃｅｓ/ (暂未公开) 对涉及 ＵＶＲ８ 基 因 的 表 达 量 进 行 分
ＴＭＨＭＭ / ) 进行分析ꎬ信号肽预测通过 ＳｉｇｎａｌＰ ５.０ 析ꎬ通过 ＴＢｔｏｏｌｓ 软件构建 ＵＶＲ８ 基因表达量热图ꎮ
( ｈｔｔｐｓ: / / ｓｅｒｖｉｃｅｓ. ｈｅａｌｔｈｔｅｃｈ. ｄｔｕ. ｄｋ / ｓｅｒｖｉｃｅ. ｐｈｐ?
ＳｉｇｎａｌＰ￣５. ０ ) 进 行ꎬ 并 采 用 软 件 ＮｅｔＰｈｏｔｓ ３. １ ２ 结果与分析
(ｈｔｔｐ: / / ｗｗｗ.ｃｂｓ.ｄｔｕ.ｄｋ / ｓｅｒｖｉｃｅｓ/ ＮｅｔＰｈｏｓ/ )统计蛋
白磷酸化位点种类和数目ꎮ ２.１ 两种罗布麻 ＵＶＲ８ 基因筛选
１.２.７ 两种罗布麻 ＵＶＲ８ 基因顺式作用元件分析 通过罗布麻和大麻状罗布麻的全基因组测序
利用 ＴＢｔｏｏｌｓ(Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２０)软件获得 ＵＶＲ８ 基 数据ꎬ分别筛选到了 １０ 个罗布麻 ＵＶＲ８ 蛋白序列和
因上 游 ２ ０００ ｂｐ 序 列ꎬ 作 为 启 动 子 序 列ꎮ 通 过 １４ 个大麻状罗布麻 ＵＶＲ８ 蛋白序列ꎮ 以拟南芥
ＰｌａｎｔＣＡＲＥ ( ｈｔｔｐ: / / ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ. ｐｓｄ. ｕｇｅｎｔ. ｂｅ / ＡｔＵＶＲ８ 蛋白序列为种子序列ꎬ将筛选结果进行序
ｗｅｂｔｏｏｌｓ/ ｐｌａｎｔｃａｒｅ / ｈｔｍｌ/ )数据库对所得序列进行 列比对及在线结构域分析ꎮ 最终获得 ６ 个罗布麻
预测ꎬ采用 ＴＢｔｏｏｌｓ 软件绘图ꎬ对主要顺式作用元件 ＵＶＲ８( ＡｖＵＶＲ８) 基 因 序 列 和 ５ 个 大 麻 状 罗 布 麻
的位置和数量进行分析ꎮ ＵＶＲ８(ＡｃＵＶＲ８) 基因序列ꎬ 分别命名为 ＡｖＵＶＲ８ａ、
１.２.８ 两种罗布麻 ＵＶＲ８ 蛋白系统进化分析 采用 ＡｖＵＶＲ８ｂ、ＡｖＵＶＲ８ｃ、ＡｖＵＶＲ８ｄ、ＡｖＵＶＲ８ｅ、ＡｖＵＶＲ８ｆ 和
在线工具 ＮＣＢＩ(ｈｔｔｐｓ: / / ｗｗｗ.ｎｃｂｉ.ｎｌｍ.ｎｉｈ.ｇｏｖ / )的 ＡｃＵＶＲ８ａ、ＡｃＵＶＲ８ｂ、ＡｃＵＶＲ８ｃ、ＡｃＵＶＲ８ｄ、ＡｃＵＶＲ８ｅꎮ
ＢＬＡＳＴｎ 进行同源性搜索ꎬ获得两种罗布麻 ＵＶＲ８
基因的同源序列ꎮ 通过 ＭＥＧＡ １１.０ 软件构建系统 表 １ 两种罗布麻 ＵＶＲ８ 基因测序序列识别号和基因 ＩＤ
进化树ꎬ利用 Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ 进行多重序列比对ꎬ采用邻 Ｔａｂｌｅ １ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ ａｎｄ
接法( ｎｅｉｇｈｂｏｕｒ￣ｊｏｉｎｉｎｇꎬＮＪ) 构建 ＵＶＲ８ 蛋白系统 ｇｅｎｅ ＩＤ ｏｆ ＵＶＲ８ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｔｗｏ ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ Ａｐｏｃｙｎｕｍ
进化树ꎬｂｏｏｔｓｔｒａｐ ｍｅｔｈｏｄ 值设为 １ ０００ꎬ其他参数采 测序序列识别号 基因 ＩＤ
Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｓｅｑｕｅｎｃｅ
用 系 统 默 认 值ꎮ 通 过 工 具 ＩＴＱＬ ( ｈｔｔｐｓ: / / ｉｔｏｌ. ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ Ｇｅｎｅ ＩＤ
ｅｍｂｌ.ｄｅ)进行美化ꎮ ＯＲＩＧＩＮＡＬ＿ＳＣＡＦＦＯＬＤ＿４２４.３４４.１ ＡｖＵＶＲ８ａ
１.２.９ 两种罗布麻 ＵＶＲ８ 基因表达量分析 本实验 ＯＲＩＧＩＮＡＬ＿ＳＣＡＦＦＯＬＤ＿２６１.２８７.８ ＡｖＵＶＲ８ｂ
室于 ２０２１ 年春季在大棚内进行两种罗布麻的盆 ＦＲＡＧＳＣＡＦＦ＿ＳＣＡＦＦＯＬＤ＿１９.８２３ ＡｖＵＶＲ８ｃ
栽种植(林下土与营养土按 １ ∶ １ 混合)ꎬ田间常规
ＦＲＡＧＳＣＡＦＦ＿ＳＣＡＦＦＯＬＤ＿３７.９３６.２ ＡｖＵＶＲ８ｄ
化管理ꎮ 根据 Ｇａｏ 等(２０１９) 对 ＵＶ￣Ｂ 辐射剂量的
ＯＲＩＧＩＮＡＬ＿ＳＣＡＦＦＯＬＤ＿２６１.２４３ ＡｖＵＶＲ８ｅ
等级划分ꎬ结合宁夏银川地区夏季晴天的 ＵＶ￣Ｂ 强
ＯＲＩＧＩＮＡＬ＿ＳＣＡＦＦＯＬＤ＿４２４.１３３１￣４２４.１３３２ ＡｖＵＶＲ８ｆ
度和两种罗布麻的强抗逆性ꎬ设自然光照( 含 ＵＶ￣
ＯＲＩＧＩＮＡＬ＿ＳＣＡＦＦＯＬＤ＿２８３.４９１.２ ＡｃＵＶＲ８ａ
Ｂ 强度 ８ ~ １１ Ｗｍ )为对照ꎬ在自然光照的基础
￣２
ＦＲＡＧＳＣＡＦＦ＿ＳＣＡＦＦＯＬＤ＿２６.１２８０.２ ＡｃＵＶＲ８ｂ
上增加 ＵＶ￣Ｂ 辐射处理ꎮ 在生长至 ３０ ~ ４０ ｃｍ 的两
ＦＲＡＧＳＣＡＦＦ＿ＳＣＡＦＦＯＬＤ＿２６.３３８ ＡｃＵＶＲ８ｃ
种罗布麻冠层上方 ０.５ ｍ 处安装 ＵＶ￣Ｂ 灯管( 飞利
ＯＲＩＧＩＮＡＬ＿ＳＣＡＦＦＯＬＤ＿２８３.４４６ ＡｃＵＶＲ８ｄ
浦 ＴＬ １００Ｗ / ０１)ꎬ于每天早上 １０:００ 和下午１４:００
ＯＲＩＧＩＮＡＬ＿ＳＣＡＦＦＯＬＤ＿４２１.１１５ ＡｃＵＶＲ８ｅ
开始各处理 ４ 次ꎬ每次处理时长为 １０ ｍｉｎꎬ每间隔
１０ ｍｉｎ 处理一次ꎮ 可在冠层检测到增加的 ＵＶ￣Ｂ
￣２ ￣１ ２.２ 两种罗布麻 ＵＶＲ８ 基因染色体定位
辐射剂量是 １７.５２ ｋＪｍ ｄ ꎬ强度为 ３.６５ Ｗ
ｍ (相当 于 银 川 地 区 夏 季 晴 天 ＵＶ￣Ｂ 强 度 增 加 两种罗布麻的全基因组各有 １１ 条染色体ꎬ采
￣２
３３.２％ ~ ４５.６％)ꎮ 采用 ０.１ ｍｍ 的醋酸纤维膜覆盖 用 ＭＧ２Ｃ 软件绘制 ＵＶＲ８ 基因染色体定位图ꎬ分析
灯管以 屏 蔽 ２８０ ｎｍ 以 下 的 ＵＶ￣Ｃꎬ ＵＶ￣Ｂ 强 度 由 结果( 图 １) 显示ꎬＵＶＲ８ 基因间无串联重复现象ꎬ
Ｌｕｔｒｏｎ 公司的 ＵＶ￣３４０Ａ 紫外线辐照计测得ꎮ 期间 大麻状罗布麻 ＡｃＵＶＲ８ 基因不均匀地分布在 ３ 条
