Page 112 - 《广西植物》2023年第7期

１ ２ ８ ０ 广 西 植 物 ４３ 卷

Ｍ. ＤＬ ２ ０００ ｍａｒｋｅｒꎻ １. ｐＴｃＡＬＤＨ 片段ꎻ ２. ｐＴｃＧＬＩＰ 片段ꎮ
Ｍ. ＤＬ ２ ０００ ｍａｒｋｅｒꎻ １. Ｆｒａｇｍｅｎｔ ｏｆ ｐＴｃＡＬＤＨꎻ ２. Ｆｒａｇｍｅｎｔ ｏｆ ｐＴｃＧＬＩＰ.
图 １ ｐＴｃＡＬＤＨ(Ａ)和 ｐＴｃＧＬＩＰ(Ｂ)ＰＣＲ 扩增
Ｆｉｇ. １ ＰＣＲ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｐＴｃＡＬＤＨ (Ａ) ａｎｄ ｐＴｃＧＬＩＰ (Ｂ)

用特 异 性 引 物 Ｆ￣ＧＬＩＰ￣ｐｒｏ 和 Ｒ￣ＧＬＩＰ￣ＯＲＦ 扩 增 示ꎬ含有 ｐＴｃＡＬＤＨ￣ＬＵＣ 和 ｐＴｃＧＬＩＰ￣ＬＵＣ 载体的农杆
ＴｃＧＬＩＰ 启动子ꎬ获得条带大小为 １ ３４３ ｂｐ( 图 １)ꎮ 菌注射部位ꎬ荧光强度高于空载对照ꎬ说明 ｐＴｃＡＬＤＨ
分别命名为 ｐＴｃＡＬＤＨ 和 ｐＴｃＧＬＩＰꎮ 和 ｐＴｃＧＬＩＰ 能够驱动 ＬＵＣ 基因的表达ꎬ具有启动子
２.２ ｐＴｃＡＬＤＨ 和 ｐＴｃＧＬＩＰ 调控元件分析 活性ꎮ 注射含有 ｐＴｃＡＬＤＨ￣ＬＵＣ 表达载体农杆菌的
利 用 ＰｌａｎｔＣＡＲＥ 软 件 分 析 了 ｐＴｃＡＬＤＨ 和 叶片在 ＡＢＡ 和 ＭｅＪＡ 激素处理后ꎬ荧光强度显著高
ｐＴｃＧＬＩＰ 的顺式作用元件ꎮ 结果显示在 ｐＴｃＡＬＤＨ 于清水对照ꎬ表明 ｐＴｃＡＬＤＨ 具有 ＡＢＡ 和 ＭｅＪＡ 激素
序列 ２ ８４８ ｂｐ 的区域共检测到 ４３ 种 ２１０ 个作用 诱导特性(图 ２)ꎮ 而注射含有 ｐＴｃＧＬＩＰ￣ＬＵＣ 表达载
元件ꎬ在 ｐＴｃＧＬＩＰ 序列 １ ３４３ ｂｐ 的区域检测到 ３０ 体农杆菌的叶片在 ＡＢＡ 和 ＭｅＪＡ 激素处理后ꎬ荧光
种 １１６ 个作用元件ꎮ ｐＴｃＡＬＤＨ 和 ｐＴｃＧＬＩＰ 均含有 强度低于清水对照(图 ２)ꎮ
多个核心启动子元件( ＴＡＴＡ￣ｂｏｘ) 和增强子元件 ２.４ 不 同 激 素 处 理 下 除 虫 菊 叶 片 ＴｃＡＬＤＨ 和
(ＣＡＡＴ￣ｂｏｘ)等基本特征元件ꎬ此外还包含许多与 ＴｃＧＬＩＰ 基因表达分析
激素响应[ ＭｅＪＡ、水杨酸( ｓａｌｉｃｙｌｉｃ ａｃｉｄꎬＳＡ)、生长 用 ＡＢＡ 和 ＭｅＪＡ 处 理 除 虫 菊 组 培 苗ꎬ 检 测
素( ａｕｘｉｎ)、ＡＢＡ、赤霉素( ｇｉｂｂｅｒｅｌｌｉｎꎬＧＡ) 等]ꎬ胁 ＴｃＡＬＤＨ 和 ＴｃＧＬＩＰ 基 因 转 录 水 平ꎮ 结 果 表 明ꎬ
迫响应(损伤、低温、干旱等) 和光响应相关的元件 ＭｅＪＡ 和 ＡＢＡ 处理可显著影响除虫菊 ＴｃＡＬＤＨ 和
(表 ２ꎬ 表 ３)ꎮ 这 两 个 基 因 启 动 子 序 列 均 含 有 ＴｃＧＬＩＰ 基因的表达ꎬ其中 ＴｃＡＬＤＨ 的表达受 ＡＢＡ
ＭｅＪＡ 响应元件( ＴＧＡＣＧ￣ｍｏｔｉｆ 和 ＣＧＴＣＡ￣ｍｏｔｉｆ) 和 诱导上 调ꎬ 受 ＭｅＪＡ 诱 导 表 达 量 先 升 高 后 降 低ꎻ

ＡＢＡ 响应元件(ＡＢＲＥ)ꎮ ＴｃＧＬＩＰ 的表达受 ＡＢＡ 和 ＭｅＪＡ 诱导下调(图 ３)ꎮ
２.３ ｐＴｃＡＬＤＨ 和 ｐＴｃＧＬＩＰ 活性和激素诱导特性分析 ２.５ ｐＴｃＡＬＤＨ 和 ｐＴｃＧＬＩＰ 组织特异性分析
将含有 ｐＴｃＡＬＤＨ￣ＬＵＣ 和 ｐＴｃＧＬＩＰ￣ＬＵＣ 表达载 将 ＴｃＡＬＤＨ 和 ＴｃＧＬＩＰ 启动子区域与 ＧＵＳ 报告
体的农杆菌分别注射烟草叶片ꎬ荧光成像结果显 基因融合ꎬ转化烟草ꎬ获得了 ４ 个独立的 ｐＴｃＡＬＤＨ￣