Page 75 - 《广西植物》2020年第2期
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２ １ ２ 广 西 植 物 ４０ 卷
１.２.２ 结合酚的提取 参照 Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ.(２００２) 的研
１ 材料与方法 究方法ꎬ首先向上述游离酚提取残渣中加入 ２０ ｍＬ
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２ ｍｏｌＬ ＮａＯＨꎬ在氮气条件下室温震荡水解 １ ~
１.１ 材料与仪器 ２ ｈ 后ꎬ其次用 ６ ｍｏｌＬ ＨＣｌ 将 ｐＨ 调至 １.５ ~ ２.０
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１.１.１ 试验材料 试验于 ２０１８ 年 ８ 月 １５ 日在湖北 之间ꎬ最后在溶液中加入 １０ ｍＬ 乙酸乙酯进行萃
省江汉平原长江大学农业科研基地(１１２°１５′ Ｅ、 取ꎬ４ ℃ 、４ ０００ ×ｇ 下离心 １０ ｍｉｎ 收集乙酸乙酯部
３０°３６′ Ｎꎬ海拔 ３４ ｍ) 进行ꎬ该试验基地土壤以重 分ꎬ重复 ５ 次ꎬ合并有机溶剂ꎬ３７ ℃ 下旋转蒸发干ꎬ
壤和粘土为主ꎬ养分高ꎬ土地平整ꎬ水源排灌方便ꎬ 用 ５０％甲醇复溶并定容至 ５ ｍＬꎬ－２０ ℃ 保存备用ꎮ
前 茬 为 大 豆ꎮ 土 壤 ｐＨ 为 ７. ６０ 左 右ꎬ 有 机 质 １.２.３ 总酚含量测定 采用 Ｆｏｌｉｎ￣Ｃｉｏｃａｌｔｅｕ 法测定
２.９３％ꎬ全氮 ０.１６％ꎬ有效磷和有效钾分别为 １６.６３ 川荞 １ 号和九江苦荞籽粒中总酚的含量(Ｊｕｌｋｕｎｅｎ￣
和 １０４.７４ ｍｇｋｇ ꎮ 供试品种为川荞 １ 号和九江 Ｔｉｉｔｔｏꎬ１９８５)ꎮ 以没食子酸为标准当量表示总酚的
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苦荞ꎬ条播ꎬ正常田间管理ꎬ１１ 月份收获ꎬ种子晒干 含量(ｍｇ Ｇａｌｌｉｃ ａｃｉｄ ｅｑｇ 干重样品)ꎬ简写为 ｍｇ
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后ꎬ经人工去壳、冷冻干燥、加工ꎬ贮存于－２０ ℃ 冰 ＧＡＥｇ ＤＷꎮ
１.２.４ 黄酮含量测定 采用 ＮａＮＯ －ＡｌＣｌ ６Ｈ Ｏ
箱备用ꎮ ２ ３ ２
方法测定川荞 １ 号和九江苦荞籽粒中总黄酮的含
１.１. ２ 试 剂 与 仪 器 试 剂: 山 奈 酚￣３￣芸 香 糖 苷
量(Ｊｉａ ｅｔ ａｌ.ꎬ１９９９)ꎮ 以芦丁为标准当量表示总黄
(Ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ￣３￣ｒｕｔｉｎｏｓｉｄｅ) 购自于 ＡｐｅｘＢｉｏ 公司ꎻ山
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酮的含量(ｍｇ Ｒｕｔｉｎ ｅｑｇ 干重样品)ꎬ简写为 ｍｇ
奈酚(ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ)、表儿茶素( ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ)、槲皮素
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ＲＥｇ ＤＷꎮ
(ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ)、没食子酸( ｇａｌｌｉｃ ａｃｉｄꎬＧＡ)、１ꎬ１￣二苯
１.２.５ ＨＰＬＣ 法测定酚类物质组成及含量 苦荞提
基￣２￣三 硝 基 苯 肼 ( １ꎬ ｌ￣Ｄｉｐｈｅｎｙｌ￣２￣ｐｉｃｒｙｈｙｄｒａｚｙｌꎬ
取物酚类物质的组成参照 Ｊｉａｎｇ ｅｔ ａｌ.(２０１５) 建立
ＤＰＰＨ)、２′￣连氮￣二(３￣乙基苯并噻唑啉￣６￣磺酸)
的方法ꎬ结果以 ｍｇｇ 表示ꎮ 对于槲皮素￣３￣Ｏ￣芸
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铵 盐 [ ２ꎬ ２′￣Ａｚｉｎｏｂｉｓ ( ３￣ｅｔｈｙｌｂｅｎｚｏｔｈｉａｚｏｌｉｎｅ￣６￣
香糖苷￣３′￣Ｏ￣β￣吡喃葡萄糖苷ꎬ其含量以芦丁为标
ｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ)ｄｉａｍｍｏｎｉｕｍ ｓａｌｔꎬＡＢＴＳ]、三吡啶基三
准表示ꎮ
嗪( ＴＰＴＺ)、奎诺二甲基丙烯酸酯( Ｔｒｏｌｏｘ) 等购自
１.２.６ 抗氧化性测定
于 Ｓｉｇｍａ 公 司ꎻ色 谱 纯 乙 腈、乙 酸 和 标 准 品 芦 丁
１.２.６.１ ＤＰＰＨ ＤＰＰＨ 自由基清除能力的测定参
(ｒｕｔｉｎ)购自于麦克林公司ꎻ其他试剂均为市售分
考 Ｂｒａｎｄ￣Ｗｉｌｌｉａｍｓ ｅｔ ａｌ. ( １９９５) 研 究 方 法ꎮ ＤＰＰＨ
析纯ꎮ
值以每 １ ｇ 干重样品中奎诺二甲基丙烯酸酯当量
仪器:Ａｌｌｅｇｒａ Ｘ￣３０Ｒ 系列离心机( 美国贝克曼
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(Ｔｒｏｌｏｘ)表示ꎬ单位为 ｍｇ Ｔｒｏｌｏｘ ｅｑｇ 干重样品ꎬ
库尔特公司)ꎬＮ￣１２００Ｂ 旋转蒸发仪( 上海爱朗仪
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简写为 ｍｇ ＴＥｇ ＤＷꎮ
器有限公司)ꎬ真空冷冻干燥机( 德国 Ｍａｒｔｉｎ Ｃｈｒｉｓｔ
１.２.６.２ ＡＢＴＳ ＡＢＴＳ 自由基清除能力的测定参照
公司)ꎬ双光束紫外可见分光光度计( 北京普析通
Ｒｅ ｅｔ ａｌ.(１９９９)的研究方法ꎮ ＡＢＴＳ 以每 １ ｇ 干重样
用仪器有限公司)ꎬ高效液相色谱仪( 美国安捷伦
品中奎诺二甲基丙烯酸酯当量(Ｔｒｏｌｏｘ) 表示ꎬ单位
公司)ꎮ ￣１ ￣１
为 ｍｇ Ｔｒｏｌｏｘ ｅｑｇ 干重样品ꎬ简写为 ｍｇ ＴＥｇ ＤＷꎮ
１.２ 测定指标与方法 １.２.６.３ ＦＲＡＰ ＦＲＡＰ 还原抗氧化能力的测定参照
１. ２. １ 游 离 酚 的 提 取 参 考 Ｐｅｒａｌｅｓ￣Ｓáｎｃｈｅｚ ｅｔ
Ｂｅｎｚｉｅ ＆ Ｓｔｒａｉｎ(１９９６) 研究方法ꎮ ＦＲＡＰ 值以每 １
ａｌ.(２０１４) 的方法并略有修改ꎮ １ ｇ 荞麦粉加入 ８ ｇ 干重样品中奎诺二甲基丙烯酸酯当量( Ｔｒｏｌｏｘ) 表
ｍＬ 正己烷ꎬ充分震荡ꎬ４ ℃ 、４ ０００ × ｇ 下离心 １０ 示ꎬ单位为 ｍｇ Ｔｒｏｌｏｘ ｅｑｇ 干重样品ꎬ简写为 ｍｇ
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ｍｉｎ 后去除上清液ꎬ重复 ３ 次ꎮ 再向沉淀中加入 ８ ＴＥｇ ＤＷꎮ
ｍＬ ８０％乙醇ꎬ室温下浸提 ３０ ｍｉｎꎬ每隔 １０ ｍｉｎ 震 １.３ 数据处理与分析
荡一次ꎬ４ ℃ 、４ ０００ ×ｇ 下离心 １０ ｍｉｎ 后取上清 利用 Ｅｘｃｅｌ ２０１３ 和 ＳＰＳＳ １９.０ 软件进行数据
液ꎬ同样步骤重复 ３ 次ꎬ合并浸提液ꎬ３７ ℃ 下旋转 统计和分析ꎬ每个处理重复 ３ 次ꎬ数据以平均值±
蒸发近干ꎬ用 ８０％乙醇定容至 ５ ｍＬꎬ－ ２０ ℃ 保存 标准差(ｘ±ｓ)表示ꎬ使用线性回归分析进行多酚和
备用ꎮ 黄酮与抗氧化能力之间的相关分析ꎮ
