Page 112 - 《广西植物》2023年第1期

１ ０ ８ 广 西 植 物 ４３ 卷
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＋ １ ６ ｍｇｍＬ 的样品溶液ꎬ测定各个化合物对各种菌
ｍ / ｚ:３４２.１６８ ５ [ Ｍ ＋ Ｈ ] ꎮ Ｈ￣ＮＭＲ ( ５００ ＭＨｚꎬ
ＭｅＯＤ) δ:７.１５ (１Ｈꎬ ｄꎬ Ｊ ＝ ８.２ Ｈｚꎬ Ｈ￣９)ꎬ ７.０２ 的抑制效果ꎮ 参照胡野(２００４) 的方法ꎬ具体的实
(１Ｈꎬ ｄꎬ Ｊ ＝ ８.２ Ｈｚꎬ Ｈ￣８)ꎬ ６.８１ (１Ｈꎬ ｓꎬ Ｈ￣３)ꎬ 验步骤如下:(１)将实验所用到的滤纸片、镊子、培
２.５８ ( ３Ｈꎬ ｓꎬ Ｈ￣１７)ꎬ ３. ６８ ( ３Ｈꎬ ｓꎬ ２￣ＯＣＨ )ꎬ 养皿、三角刮刀、移液枪头等用品用干净的报纸包
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３. ９１ ( ３Ｈꎬ ｓꎬ １０￣ＯＣＨ )ꎬ ３. ８６ ( ３Ｈꎬ ｓꎬ １１￣ 好后放入高温灭菌锅中ꎬ在 １２１ ℃ 下高温杀菌 ２０
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１３ ｍｉｎꎬ备用ꎻ(２)菌种接种ꎬ将指示菌种采用划线法
ＯＣＨ )ꎮ Ｃ￣ＮＭＲ ( １２５ ＭＨｚꎬ ＭｅＯＤ) δ: １４３. ２
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( Ｃ￣１)ꎬ １５０.５ (Ｃ￣２)ꎬ １１３.５ (Ｃ￣３)ꎬ ２９.２８ (Ｃ￣４)ꎬ 接种于制备好的琼脂斜面培养基上ꎬ在(３６±１)℃
６２.３ (Ｃ￣５)ꎬ ６４.３ (Ｃ￣６)ꎬ ３５.９ (Ｃ￣７)ꎬ １２５.６ ( Ｃ￣ 的培养箱里培养 ２４ ｈ 后放入冰箱内保存ꎬ备用ꎻ
８)ꎬ １１２.８ ( Ｃ￣９)ꎬ １５３.５ ( Ｃ￣１０)ꎬ１４５.５ ( Ｃ￣１１)ꎬ (３)菌悬液的配制ꎬ在相应的琼脂斜面培养基上用
１２７.０ ( Ｃ￣１２)ꎬ １１９. ３ ( Ｃ￣１３ )ꎬ １２０. ６ ( Ｃ￣１４ )ꎬ 接种环在培养好的菌种内取 １ 环菌种放入对应的
１３１.２ (Ｃ￣１５)ꎬ １２８.８ ( Ｃ￣１６)ꎬ ４３.９( Ｃ￣１７)ꎬ ５３.８ 液体培养基中ꎬ在(３７±１)℃ 下进行恒温震荡 ２４ ｈ
(２￣ＯＣＨ )ꎬ ５６.３ (１１￣ＯＣＨ )ꎬ ５６. ６ ( １０￣ＯＣＨ )ꎮ 后ꎬ取 １００ μＬ 培养好的菌悬液ꎬ用无菌水稀释 ３００
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以上数据与文献( 邓业成和徐汉虹ꎬ２００４) 报道一 倍ꎬ使菌悬液稀释到 １０ ~ １０ ＣＦＵｍＬ ꎬ并置于 ４
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致ꎬ故鉴定化合物 ９ 为紫堇定碱ꎮ ℃ 下冷藏ꎬ备用ꎻ(４)样品溶液的配置ꎬ将准备好的
化合物 １０ Ｃ Ｈ ＮＯ ꎬ黄色针晶ꎮ ＨＲ￣ＥＳＩ￣ ０.６ ｃｍ 大小的滤纸片经过高温灭菌后ꎬ浸泡在配
２０ １９ ４
＋ １
ＭＳ ｍ / ｚ:３３８.１３７ ２ [Ｍ＋Ｈ] ꎮ Ｈ￣ＮＭＲ (５００ ＭＨｚꎬ 好浓度的样品溶液以及空白对照溶液中 １ ｈ 左右ꎻ
ＭｅＯＤ) δ:７.９９ (１Ｈꎬ ｄꎬ Ｊ ＝ ８.６ Ｈｚꎬ Ｈ￣１１)ꎬ ７.０６ (５)抑菌圈的测定ꎬ在无菌操作台中用移液枪吸取
(１Ｈꎬ ｄꎬ Ｊ ＝ ８.６ Ｈｚꎬ Ｈ￣１０)ꎬ ６.７１ (１Ｈꎬ ｓꎬ Ｈ￣３)ꎬ ２００ μＬ 菌悬液于平板固体培养基上ꎬ先使用三角
６.２５ (１Ｈꎬ ｄꎬ Ｊ ＝ １.５ Ｈｚꎬ ￣ＯＣＨ Ｏ￣)ꎬ ６.１０ (１Ｈꎬ 刮刀在培养基上均匀涂抹ꎬ再放在直径为 ０.６ ｃｍ
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ｄꎬ Ｊ ＝ １. ５ Ｈｚꎬ ￣ＯＣＨ Ｏ￣)ꎬ ４. ０９ ( ３Ｈꎬ ｓꎬ ８￣ 完全浸满样品的滤纸片上ꎬ在(３６±１)℃ 下培养 ２４
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ＯＣＨ )ꎬ ４.００ (３Ｈꎬ ｓꎬ ９￣ＯＣＨ )ꎬ ２.７７ (３Ｈꎬ ｓꎬ Ｎ￣ ｈꎬ最 后 测 定 其 抑 菌 圈 直 径ꎮ 实 验 平 行 ３ 次ꎬ 用
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ＣＨ )ꎮ Ｃ￣ＮＭＲ ( １２５ ＭＨｚꎬ ＭｅＯＤ) δ:１４２. ２ ( Ｃ￣ ＤＭＳＯ 作 为 阴 性 对 照ꎬ用 氨 苄 青 霉 素 ( ＡＭＰꎬ１００
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１)ꎬ １２３.２ ( Ｃ￣１ａ)ꎬ １４６.７ ( Ｃ￣２)ꎬ １０７.０ ( Ｃ￣３)ꎬ ｍｇｍＬ ꎬ即称取 １００ ｍｇ 氨苄青霉素溶解于 １ ｍＬ
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１２６.７ ( Ｃ￣３ａ)ꎬ ２９. ３５ ( Ｃ￣４)ꎬ ５３. ８ ( Ｃ￣５)ꎬ ４４. ２ １ ｍｏｌＬ ＨＣｌ 中)作为阳性对照ꎮ
(Ｃ￣６)ꎬ ６２.０ (Ｃ￣６ａ)ꎬ ２７.０ (Ｃ￣７)ꎬ １１６.７ (Ｃ￣７ａ)ꎬ ３.３ 结果和分析
１５２.２ (Ｃ￣８)ꎬ １４６.０ (Ｃ￣９)ꎬ １１０.４ (Ｃ￣１０)ꎬ １２４.８ 分别用大肠杆菌、金色葡萄球菌、枯草芽孢杆
(Ｃ￣１１)ꎬ １３０ ( Ｃ￣１１ａ)ꎬ １００. ７ (￣ＯＣＨ Ｏ￣)ꎬ ５５. ９ 菌、尖孢镰刀菌作为供试菌ꎬ将从广西地不容非药
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(８￣ＯＣＨ )ꎬ ６０.８ (９￣ＯＣＨ )ꎮ 以上数据与文献(彭 用部位中分离得到的化合物通过滤纸片法测定其
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树林等ꎬ１９９２) 报道一致ꎬ故鉴定化合物 １０ 为克 抑菌圈的直径ꎬ测定结果如表 １ 所示ꎮ 表 １ 结果显
班宁ꎮ 示ꎬ与阳性对照 ＡＭＰ 比较ꎬ化合物 １、２、５ 对大肠
杆菌的抑制作用显著降低( Ｐ<０.０５)ꎬ化合物 ２ 对
３ 体外抗菌活性研究 金色葡萄球菌的抑制率极显著低于阳性对照 ＡＭＰ
的抑制率(Ｐ<０.０１)ꎬ化合物 ３ 和化合物 ８ 对枯草
３.１ 培养基配置 芽孢杆菌有弱的抑制作用ꎬ但无显著性差异( Ｐ>
固体培养基的配置:称取 ＬＢ 营养琼脂 ８ ｇ 使 ０.０５)ꎮ
其完全溶解于 ２００ ｍＬ 蒸馏水中ꎬ于 １２１ ℃ 高温下

灭菌 ２０ ｍｉｎꎬ备用ꎮ ４ 讨论与结论
液体培养基的配置:称取 ＬＢ 肉汤 ５ ｇ 于 ２００
ｍＬ 蒸馏水中使其完全溶解ꎬ于 １２１ ℃ 高温下灭菌 本研究从广西地不容非药用部位醇提物中分

２０ ｍｉｎꎬ备用ꎮ 离鉴定出 ４ 个阿朴啡生物碱ꎮ 其中ꎬ异紫堇定碱
３.２ 体外抗菌实验 (３) 是“ 解痉宁” 的主要成分ꎬ并具有很好的止泻
采 用 滤 纸 片 法 测 定 其 抑 菌 圈 的 大 小ꎮ 以 功效ꎬ这与沈雅琴和张明发(１９９８) 的研究结果一
ＤＭＳＯ 为溶剂ꎬ准确称取各个化合物ꎬ将其配置成 致ꎬ 在临床上主要用于治疗胃肠、 胆、 血管等痉挛